三九胃泰颗粒对急性胃粘膜损伤修复及iNOS表达的影响

三九胃泰颗粒对急性胃粘膜损伤修复及iNOS表达的影响 三九胃泰颗粒对急性胃粘膜损伤修复及 iNOS表达的影响 中国腹部疾病杂志2001年12月第1卷第6期?475? 三九胃泰颗粒对急性胃粘膜损伤修复及iNOS表达的 影响 张万岱姚永莉 【摘要】目的观察三九胃泰颗粒对胃粘膜损伤修复的影响.方法采用无水乙醇lml胃饲诱发急性胃粘膜损伤大鼠模型并用三九胃泰颗粒 治疗,免疫组织化学技术检测胃上皮细胞的增殖改变,参与催化生成胃粘膜损伤修复信号分子一氧化氮(NO)的诱导型一氧化氮合酶(iNOS)的表 达.结果三九胃泰颗粒,胃苏颗粒,养胃冲剂及丽珠得乐治疗组大鼠胃粘膜损伤的指数(uI)均显着低于无水乙醇模型组及自然恢复组,尤以三 九胃泰颗粒治疗后为甚(P<O.05);免疫组织化学显示三九胃泰颗粒,胃苏颗粒,养胃冲剂及丽珠得乐治疗组大鼠胃粘膜PCNA标记的阳性细胞 量,iNOS的阳性表达均有高于无水乙醇模型组及自然恢复组趋势,尤以三九胃泰颗粒治疗后为甚(P<O.o5).结论三九胃泰颗粒能促进急性 胃粘膜损伤的修复. 【关键词】急性胃粘膜损伤;诱导型一氧化氮合酶;三九胃泰 中图分类号:R573.9文献标识码:A文章编 号:1530—566(2001)06—0475—05 EffectofSanJiuWeiTaionacutegastricmn~asmembranelesion 2HANGWan—dai.YAOYong—li.InstituteofDigestiveDiseases,NanfangHospital,RMilitaryMedicalUniversity,Cauzngzhou,510515,China. 【Abstract】 AIMToinvestigatetheeffectofSanJiuWeiTai(SJWT)Oflacutegastricmucousmembranelesion.METHODSAnimalmodels establishedbyintragastricinstillationoflmLofethanolandthentreatedwithsJWr.TheexpressionofiNOSwasanalyzedby studies.RESULTSC~stricmucous~rarlelesionindexes(U1)significantlydecreasedaftertrea~nentwithSJWT,Weisu(ws),YangWe(YW)orLi ZhuDeLe(LZDL)comparedwiththecontrolgroup.SJWTwasthemosteffectiveore(P<0.05) iNOSexpressionandPCNAlabeledcellsaftertrea~nentwithSJWT,WS,YWandDLcomparedwithcontrolgroup,withthemosteffectiveore (P<0.05).CONCLUSIONSJWTcouldacceleratethehealingofacutegastricmucousmembranelesions. 【Keywords】Acutegastricmucousmembranelesion;iNOS;SanJiuWeiTai CLCnumber:R573.9Documentcode:AArticleID:1530—566(2001)06— 0475—05 三九胃泰颗粒由三桠苦,九里香,白芍等组成,具 有消炎止痛,理气健胃的作用,主治慢性胃炎,功能性 消化不良等上消化道疾病.1994年三九胃泰被列为 国家中药保护品种,为进一步其对胃粘膜保护的 药理作用及其相互关系,我们应用三九胃泰颗粒临床 治疗剂量(0.1g?,?d)的30倍(3g?kg,’d), 观察其对大鼠无水乙醇急性胃粘膜损伤模型的影响, 并检测了胃上皮细胞的增殖改变,参与催化生成胃粘 膜损伤修复信号分子一氧化氮(NO)的诱导型一氧化 氮合酶(iNOS)的表达….以期明确三九胃泰颗粒对 胃粘膜损伤修复的机理. 1与方法 1.1三九胃泰颗粒由深圳南方制药厂生产,批号 作者单位:第一军医大学南方医院全军消化内科研究所 (广东省,广州市,510515) 20010202;胃舒颗粒由扬子江制药股份有限公司生 产,批号001214;养胃冲剂由正大青春宝药业有限公 司生产,批号0102006;丽珠得乐由珠海丽珠药厂生 产,批号0103067.免疫组化染色试剂购自武汉博士 德公司.选用56只健康成年雄性SD大鼠,体重 200g+10g,饮食不限,适应性饲养7d后用于实验. 1.2动物模型制备及处理实验用大鼠随机分成7 组,每组8只.正常对照组(A):禁食不禁水24h后, 蒸馏水lml,ig后间隔1h断颈处死动物.无水乙醇 模型组(B):禁食不禁水24h,无水乙醇lml,ig后间 隔1h断颈处死.自然恢复组(C):禁食不禁水24h, 无水乙醇lml,ig后间隔8h,蒸馏水2ml,bid,连续 5d.三九胃泰颗粒治疗组(D):禁食不禁水24h,无水 乙醇lml,ig后间隔8h,三九胃泰颗粒2ml(0.15kg? L),bid,ig,连续5d.胃舒颗粒治疗组(E):禁食不 禁水24h,无水乙醇lml,ig后间隔8h,胃舒颗粒2ml ? 476?ChineseJournalofCeliopathy,December2001,Vo1.1.No.6 (0.9kg?L),bid,ig,连续5d.养胃冲剂治疗组(F): 禁食不禁水24h,无水乙醇lml,ig后间隔8h,养胃冲 剂2ml(0.9kg?L),bid,ig,连续5d.丽珠得乐治疗 组(G):禁食不禁水24h,无水乙醇lml,ig后问隔8h, 丽珠得乐2ml(0.015kg?L,,bid,ig,连续5d.C,D, E,F,G组制模结束后禁食不禁水24h,断颈处死大 鼠.全部实验大鼠均正中开腹取出全胃,结扎食管及 幽门,向胃内注入40ml?L多聚甲醛溶液2ml,并将 全胃浸入40mg?L多聚甲醛溶液中固定30min后, 沿胃大弯切开,平展在玻璃板上,肉眼观察胃粘膜改 变;用微卡尺测定溃疡灶大小并按Guth法计算粘膜 损伤指数;全胃各病灶长度之和为损伤指数(uI),以 rnlTl表示,损伤?lmrn(包括糜烂点)为1分,>lmm 而~2rnm为2分,依此类推,损伤宽度>2mm者指 数加倍【2】.胃组织40mg?L多聚甲醛溶液固定6h, 石蜡包埋,制成3m,4gm的连续切片,染色观 察组织病理学改变. 1.3免疫组织化学采用武汉博士德公司的SABC 免疫组化染色试剂盒,按说明书操作. 1.3.1PCNA免疫组织化学染色结果分析阳性细 胞的核被染成棕黄色或深棕色,计数方法:每个标本 的连续切片在高倍镜(10x40)下随机取5个视野,每 个视野计数200个以上胃小凹有核细胞中PCNA阳 性的细胞数,换算成PCNA标记指数(PCNALabel— ingIndice,PCNALI),PCNALI=阳性细胞数/计数 细胞数×100%. 1.3.2iNOS免疫组织化学染色结果分析阳性细 胞的胞浆可被染成棕黄色或深棕色,与阴性细胞形成 鲜明对比.染色结果分级参照Shimizuetal0评分方 法.每张切片均观察胃窦部粘膜染色情况,从中选择 5个有代表性的区域,每区计算200个细胞.阳性细 胞数计分:阳性数?5%为0,阳性数>5%但?35% 为1,阳性数>35%但?70%为2,阳性数>70%为 3.阳性强度计分:不着色为0,弱色为1,强着色为 2.阳性分级:以上两项相加,?2为(一),3=(+),4 = (++),5=(卅).以阳性分级(+)以上为阳性. 1.4统计学分析用SPSS统计软件进行数据处 理,率的比较用Chi—Square检验,等级资料用非参 数检验;计量资料据用均数?差表示,满足正态 分布时行方差分析,不满足正态分布时用非参数检 验,P<0.05认为有显着性差异. 2结果 2.1大体观察发现正常对照组大鼠胃粘膜红润, 光泽,未见糜烂,水肿及充血等病理改变.无水乙醇 模型大鼠胃粘膜表面见条状出血病灶,少数呈斑片状 及点状,粘膜表面明显水肿(图1,2).经三九胃泰颗 粒治疗大鼠胃粘膜的色泽及光润度与正常相似,偶见 点状糜烂;经胃苏颗粒,养胃冲剂及丽珠得乐治疗大 鼠胃粘膜的色泽及光润度也与正常相似,可见点状糜 烂及出血点改变;自然恢复大鼠胃粘膜的色泽浅淡, 光润度稍差,仍可见糜烂,水肿及充血等改变,但较无 水乙醇模型大鼠程度明显减轻.各组间胃粘膜表面 损伤程度比较以UI为标准,三九胃泰颗粒,胃苏颗 粒,养胃冲剂及丽珠得乐治疗组大鼠胃粘膜UI值均 显着低于无水乙醇模型组及自然恢复组;三九胃泰颗 粒,胃苏颗粒,养胃冲剂及丽珠得乐治疗组大鼠胃粘 膜uI值之间虽无显着差异,但三九胃泰颗粒治疗组 大鼠胃粘膜UI值低于其它三个治疗组(表1). 图lA胃粘膜小片状烧伤 图1B小片状烧伤侵入固有膜,炎性细胞浸润 (HE染色,200x) 中国腹部疾病杂志2001年12月第1卷第6期?477? 图2A胃粘膜条状烧伤,可见暗红色出血带,粘膜质脆 表1胃粘膜表面损伤程度及胃上皮细胞增殖情况比较 (?s,n:8) ?VsAP<0. 05.口BP<0.05,CP<0.05 2.2三九胃泰颗粒对无水乙醇急性胃粘膜损伤后细 胞增殖的影响PCNA标记的阳性细胞均呈核着色, 图3A正常胃粘膜PCNA阳性细胞的标记 (免疫组化染色,200×) 图2B条状烧伤表层上皮缺损明显,损伤侵入胃粘膜全层 (染色,200×) 在正常胃粘膜,PCNA标记的呈深棕色或棕黄色阳性 细胞主要分布于粘膜固有层胃小凹区域的腺管上皮 中,呈带状分布,形成细胞增殖带,表层上皮几乎不存 在PCNA标记的阳性细胞;无水乙醇所致急性胃粘 膜损伤时,固有层胃小凹区域的腺管上皮中PCNA 标记的阳性细胞数量显着减少;而经三九胃泰颗粒, 胃苏颗粒,养胃冲剂及丽珠得乐治疗后,固有层胃小 凹区域的腺管上皮中显着增多,比正常粘膜也明显增 多,尤以三九胃泰颗粒治疗后P(A标记的阳性细 胞数量增加显着;自然恢复大鼠胃粘膜PCNA标记 的阳性细胞,较无水乙醇急性胃粘膜损伤时明显增 加,接近正常(表1,图3).’ ? t : ? ? ‘ ,- . ‘?.,. 一 图3B无水乙醇所致急性胃粘膜损伤经三九胃泰颗粒治疗 后,胃粘膜PCNA阳性细胞的标记(免疫组化染色,200×) 一 ? 478?ChineseJournalofCeliopathy,December2001,Vo1.1.No.6 2.3三九胃泰颗粒对无水乙醇急性胃粘膜损伤后 iNOS表达的影响iNOS的阳性信号定位于细胞质, 阳性细胞多位于胃粘膜底部,呈散在分布或簇状分 布.正常胃粘膜及无水乙醇所致急性胃粘膜损伤时 均未见iNOS的阳性信号;自然恢复大鼠胃粘膜中出 现iNOS的阳性信号表达;而经三九胃泰颗粒,胃苏 颗粒,养胃冲剂及丽珠得乐治疗后,胃粘膜中iNOS 的阳性信号表达明显增加,显着多于自然恢复大鼠, 尤以三九胃泰颗粒治疗后为甚(见表2和图4) 表2iNOS对无水乙醇所致急性胃粘膜损伤修复的 影响(n=8) 总体的秩和检验P=0.000; 总体率的比较:=28.862,P=0.000 两两比较:d伽口P=0.002.d伽bP=0.002.e伽aP= 0.001,e伽bP=0.01,f伽aP=0.01,f伽bP=0.01,ga P=0.002,g伽bP=0.002,余均P>0.05 . , ? , ;, ,? ,r 图4无水乙醇所致急性胃粘膜损伤经三九胃泰颗粒治疗后, 胃粘膜iNOS的表达(免疫组化染色,200×) 3讨论 胃炎是一种古老而常见的消化系统疾病,属中医 的”胃脘痛,胃痞,痞胀”等范畴.其发病率居各种胃 病之首,对人类健康的影响较大.中医中药对胃炎的 治疗具有悠久的历史,已积累了丰富的经验.但由于 胃炎病程,疗程较长,中药煎剂费时费力,往往患者依 从性差.加强中药剂型研究,把中医理论与临床实践 相结合,筛选出确有疗效的专方专药,制成糖浆,冲 剂,片剂等中成药不仅便于患者接受,还将为拓展中 药应用带来曙光.三九胃泰冲剂H由三桠苦,九里 香,白芍等组成,具有消炎止痛,理气健胃的作用,主 治各类慢性胃炎,功能性消化不良等上消化道疾病, 面世以来,深受患者及医生的欢迎,1994年三九胃泰 被列为国家中药保护品种. 众所周知,胃粘膜的损伤修复是一个复杂的多因 素,多途径的网络调控过程,为进一步了解三九胃泰 在胃粘膜损伤修复这一复杂调控过程中的药理作用 及其疗效,探讨三九胃泰颗粒对胃粘膜损伤修复 和细胞增殖活性调控的机理.我们观察了其对胃上 皮细胞的增殖,参与催化生成胃粘膜损伤修复信号分 子NO的iNOS表达的影响. PCNA可标记S期,G期及M期的增殖细胞. PCNA的免疫组化染色标记指数是评价胃上皮细胞 增殖改变的可靠指标.无水乙醇所致急性胃粘膜 损伤时,固有层胃小凹区域的腺管上皮中PCNA标 记的阳性细胞数量显着减少,而经三九胃泰颗粒,胃 苏颗粒,养胃冲剂及丽珠得乐治疗后,固有层胃小凹 区域的腺管上皮中显着增多,比正常粘膜也明显增 多,尤以三九胃泰颗粒后显着.提示三九胃泰颗粒对 无水乙醇所致急性胃粘膜损伤修复具有明显促进作 用. NO是一种在宿主防御和炎症反应中起重要作 用的气体分子,参与压力,酒精,应激等因素诱导的胃 粘膜损伤和损失修复机制.体内NO是由左旋精氨 酸在一氧化氮和酶(NOs)的催化下生成.NOS又分 结构型和诱生型两类.有研究发现机体在损伤后能 够自限性诱导和调节iNOS的表达,而主要来源于 iNOS活性的NO在胃粘膜的损伤修复过程中发挥重 要作用,结构型一氧化氮合酶(eNOS)的表达和活性 水平在胃粘膜损伤修复的整个过程中保持相对稳 定.我们的研究发现正常胃粘膜及无水乙醇所致 急性胃粘膜损伤时均未见iNOS阳性信号,而经三九 胃泰颗粒,胃苏颗粒,养胃冲剂及丽珠得乐治疗后胃 中国腹部疾病杂志2001年12月第1卷第6期?479? 粘膜中iNOS的阳性信号表达增加,显着多于自然恢 复大鼠,尤以三九胃泰颗粒治疗后为甚.提示iNOS 的表达增加促进来源于其本身的NO的合成增加, NO参与三九胃泰颗粒促进无水乙醇所致急性胃粘 膜损伤修复过程并发挥重要作用,这可能正是三九胃 泰颗粒能促进无水乙醇所致急性胃粘膜损伤修复的 重要原因之一. 本研究为探索三九胃泰颗粒促进胃粘膜损伤修 复的可能机制提供了新的信息和依据,提示我们可在 临床实验中,进一步观察三九胃泰颗粒对胃粘膜损伤 修复和细胞增殖活性调控的影响. 参考文献 1.PisanoC.Gran~D,M_0一lliG,c0ppdliG,VesciL,Lo~udiceP,Pace S,PacificiL,LongoA,CoruzziG,Canni~tiP.GmWospari~effectof newaIltiiIIflaIl【mlatorydrugamt~meting岫q一_mtherat:involvement oflli埘coxide【JJ.DigDisSd,1999;Apr;~(4):713724 2.GuthPH,AuresD,PaulsenG.Topicalaspirinpl峭HCLgastriclesiom intllerat【JJ.Gastroenterology,1979;76:88,93 3.S~mizuM,NikaidoT,ToldT,S~ozawaT,FUiHS.Oearcell~arcillo? 嘲hasaIlexpressionpat钯mofcellq.deregula~m0lec.1lthatis uniq~删ngovari~adenocarcinomas[J].Cancer,1999;85(3):669 , 677 4.张月彩.张万岱.三九胃泰治疗慢性胃炎前后胃粘膜的光镜及电镜 观察EN].第一军医大学,1990;(4):340 5.BrenesF,RuizB,CorreaP.Helicobacterpylo~cal塔巧h)1,erpmlif. erationofthegas~c~ithelium:pandposteradi~tionindicesof pmHfe~fioncellnuclear~figen[J].AmJGastroenterol,1993;88: 187O,1875 6.郭津生,古永亮,王吉耀,曹之宪.结构型与诱生型一氧化氮合酶在 大鼠胃溃疡模型中的表达和活性变化[J].世界华人杂志,2001;9 (3):288,292 腹茧症手术治疗1例 田洪广杨风环 中图分类号:R656.7文献标识码:B文章编号:1530—566(2001))06—0479—01 1临床资料 患者,男,l9岁,因”腹部胀痛,停止肛门排气,排便4天”. 入院,既往无腹部外伤史及手术史,入院查体,一般情况尚可, 痛苦貌.皮肤粘膜无黄染,浅表淋巴结未及肿大,眼窝稍凹 陷,口唇干燥.心肺无异常.腹部稍膨胀,无局限性隆起,未 见胃,肠型及蠕动波,腹肌稍紧,未触及包块,脐周压痛,无反 跳痛.腹部叩鼓,无移动性浊音,肠鸣音稍亢进.无腹外疝. x光透视示:腹部见多处肠管胀气及小气液平面,左上腹明 显.诊断为肠梗阻,予以保守治疗.3天后病情无缓解,仍腹 痛,腹胀,无自主排气,排便,拟定手术探查.进腹后,发现大 网膜缺如,大部分小肠被包裹在一层灰白色,质韧,较厚的一 层纤维膜性结构内,左上腹较重,肠管间粘连紧密,分离时易 出血,仅右下腹小部分回肠粘连成团,不能分离,呈革囊状,且 为梗阻部位,故予以切除后吻合.由于肠管粘连广泛,分离面 广,为预防术后再次发生肠梗阻,故行肠内排列术.先切除阑 尾,然后于其残端向小肠近端逆行插入两根连接好的胃管,使 作者单位:山东省阳谷县第二人民医院外科(252316) ? 短篇报道? 成内支架,然后将小肠按顺序排放置腹腔内,胃管于右下腹戳 孔引出.术后可自右下腹胃管内间断抽吸肠内容物,起减压 作用.术后病人恢复顺利,术后5天排气,7天排便,腹胀消 退,l2天逐渐拔除右下腹胃管,局部放油纱条引流换药至愈 合,病人痊愈出院. 2讨论 腹茧症在临床上较为罕见,由Foo首次命名.该病的特 点为全部或部分小肠被一层致密,灰白色,质韧,硬厚的纤维 膜所包裹.此病目前认为可能与下列因素有关:?先天性畸 形,有人认为此包膜为大网膜变异而来,以致此类病人大网膜 大多数缺如.?在有腹水,腹膜炎病史的病人中发病率高. ?药物作用.有人报道腹腔化疗可致此病. 此病术前诊断较困难,治疗以手术为主,手术原则是彻底 切除包膜,松解粘连或切除囊带.但一般只做包膜的单纯切 除,以解除对小肠的压迫.由于本例纤维膜与肠管粘连紧密, 分离困难,易出血,剥离面广,为防止术后发生粘连性肠梗阻, 故行肠内排列术,效果良好.