螺内酯代谢物血药浓度的测定及健康人体药动学

螺内酯代谢物血药浓度的测定及健康人体药动学 螺内酯代谢物血药浓度的测定及健康人体 药动学 药物分析杂志ChinJPharmAnal2007,27(10)一1537一 螺内酯代谢物血药浓度的测定及健康人体药动学 乔海灵,郭玉忠,谢敏 (郑州大学临床药理研究所,郑州450052) 摘要目的:建立反相高效液相色谱法测定螺内酯的代谢物——坎利酮的血药浓度,并研究其在健康人体的药动学.方法: 以乙酸乙酯为萃取溶剂,采用HypersilC柱(4.6mm×250mm,5m),流动相:乙腈一0.02mol?L磷酸氢二铵溶液(45: 55);流速为1.0mL?min,,检测波长为280am.结果:坎利酮在9.375,300txg?L范围有良好色谱响应线性关系(r= 0.9999),提取回收率均大于73.3%,日内与日间RSD均小于4.8%.人体药动学参数c…为(172.1?43.3)g?L,,为 (4.0?1.2)h,T1/2h为(16.8?4.3)h,AUCo一为(3246.1?800.4)?h?L,,AUCo一为(3649.1?960.4)g?h?L,.结 论:本方法是测定螺内酯活性代谢物——坎利酮血药浓度的可靠定量方法,适用于螺内酯的人体药动学研究. 关键词:螺内酯;坎利酮;反相高效液相色谱法;药代动力学 中图分类号:R917文献标识码:A文章编 号:0254—1793(2007)10—1537—03 RP—HPLCdeterminationofcanrenonemetabolite ofspironolactoneandpharmacokineticsinhumanplasma QIAOHai—ling,GU0Yu—zhong,XIEMin (DepartmentofClinicalPharmacology,BasicMedicalCollege,ZhengzhonUniversity,Zhengzhon450052,China) AbstractObjective:ToestablishanHPLCmethodforthedeterminationofcanrenoneinhumanplasma.which wasthemetaboliteofspironolactone.Methods:ThechromatographiccolumnofHypersilC18(4.6mm×250mm,5 m)wasused.Themobilephaseconsistedofacetonitrile一 0.02mol?L’.ammoniumphosphatedibasic(45:55) andtheflowratewas1mL?min,.Thedetectionwavelengthwas280nm.The drugwasextractedfromplasma withethylacetate.Result:Thestandardcurveofcanrenonewaslinearintheconcentrationrangeof9.375—300g ? L(r=0.9999).Extractionrecoveriesweremorethan73.3%.Bothintra—daya ndinter—dayRSDswereless than4.8%.Themainpharmacokineticparameterswereasfollows:C(172.1-4-43.3)g?L,,(4.0-4-1.2) h,T1/2.(16.8?4.3)h,AUC0一(3246.1?800.4)I.zg?h?L一.,AUC0一 (3649.1?960.4)g?h?L一.,re— spectively.Conclusion:TheHPLCmethodisreliableforthedeterminationof canrenoneinhumanplasmaandsuit— ableforthepharmacokineticstudyofspironolactone. HPLC;pharmacokinetics Keywords:spironolactone;canrenone;RP— 螺内酯(spironolactone),化学名为17/3一羟基一 3一氧一7一(乙酰硫基)一17a一孕甾一4一烯一21 一 羧酸一内酯.其结构与醛固酮相似,为醛固酮 的竞争性抑制剂.螺内酯仅作用于远曲小管和集合 管,阻断Na一K和Na一H交换,利尿作用较 弱….螺内酯进人体内后迅速被代谢,其中活性产 物坎利酮,7一硫甲基螺内酯是主要代谢物J. 关于坎利酮血药浓度的测定,国内至今尚未见报道. 国外学者曾采用高效液相色谱荧光法检测进行定 第一作者Tel:(0371)66658190;E—mail:qiaohl@ZZU.edu.cn 量,但特异性较差.JankowskiA_5采用四氯化碳 萃取,乙腈和磷酸为流动相,紫外检测器.作者结合 本实验室条件,以上述方法为基础并加以改进,建立 了测定坎利酮血药浓度的方法,方法准确可靠,重复 性好,适合临床药动学的研究. 1仪器与药品 Agilent1100系列高效液相色谱系统,Agilent高 效液相色谱化学工作站,全自动进样器;二极管阵列 检测器;XW一80A型旋涡混合器;台式高速离心机. ?——— 1538?———药物分析杂志ChinJPharmAnal2007,27(10) 螺内酯片(江苏宜兴前进制药厂生产,批号 041119,规格:20mg?片,.坎利酮对照品(江苏长 江药业有限公司提供,批号:050901,含量> 99.1%).乙腈(色谱纯);乙酸乙酯(分析纯). 2对照品溶液配制 精密称取坎利酮对照品0.030g于50mL量瓶 中,用甲醇溶解并定容,得坎利酮储备液(0.6mg? mL);再用甲醇一水(1:1)稀释,配制浓度分别为 30,15,7.5,3.75,1.875,0.9375?mL的坎利酮 对照品溶液. 3血浆样品的处理 抗凝全血离心(3000r?min)10min,精密吸 取血浆1.0mL,加人乙酸乙酯4mL,旋涡混合5 min,离心10min(3500r?min),吸取上层有机相 3mL;于4o?水浴氮气吹干,用100tzL甲醇一水(8 :2)溶解,40进样,记录峰面积.将坎利酮峰面 积代入曲线回归方程计算血药浓度. 4色谱条件 色谱柱(大连依利特,ODS)为HypersilC.柱( 4.6mmx250mm,5m),流动相为乙腈一0.02 mol?L磷酸氢二铵溶液(45:55),流速:1.0mL? min,,检测波长:280nm,柱温:28?,进样量:40 L. 螺内酯在254nm处有较高吸收峰,但在280 nm处基本无吸收,因此螺内酯不干扰坎利酮的检 测.在本试验条件下,坎利酮有较大的色谱峰和较 好的分离度,血浆中杂质不干扰坎利酮峰.坎利酮 的保留时间约为11.5min,见图1.说明该方法的 专属性较高. 5线性关系考察 于干燥离心管中分别加入系列浓度的坎利酮对 照品溶液10,加血浆1.0mL,使坎利酮血浆浓度 分别为9.375,18.75,37.5,75,150,300I.zg?L,,按 “3”项下处理.记录峰面积,以坎利酮峰面积A对 坎利酮浓度C(g?L)进行线性回归,得回归方 程为: C=0.7671A+3.3992r=0.9999 方法最低检测限为6tzg?L(S/N>i5),线性范围 为9.375,300I.zg?L,. 6回收率及精密度 取肝素化血浆1mL,精密加人坎利酮系列对照 品溶液10L,使其浓度分别为18.75,75,300I.zg? L,,按”3”项下操作.每天每一浓度进行5样本分 析,测定日内精密度;每一浓度连续测定5d,得日问 l .6. 0481216048121620t/Rin CD 图1坎利酮HPLC色谱图 Fig1Chromatogramsofcanrenone A.空白血浆(blankplasma)B.空白血浆+坎利酮(30op,g?L) (blankplasma+canrenone)C.受试者用药后8h血浆(plasma8h afteradministrationofcanrenone)D.空白血浆+坎利酮(75Ixg?L) +螺内酯(150g?L一)(blankplasma+canrenone+spironolactone) 1.坎利酮(canrenone) 精密度;以测得的浓度与真实值的比值计算血浆中 坎利酮方法回收率. 分别取相同的高,中,低3种浓度的对照品溶液 10,按”3”项下自”40oC水浴氮气吹干”起,依法 操作,记录峰面积.以提取后进样所得的坎利酮峰 面积与前者的比值求得提取回收率.结果见1. 方法回收率在95.5%,108.0%,提取回收率均大 于73.3%,日内,日问RSD均小于4.8%. 表1坎利酮回收率,日内,日间变异数据(,l=5) dayRSDand Tab1Recoveryrate,inter— intra—-dayofcanrenone 7稳定性考察 于干燥离心管中分别加人不同浓度的坎利酮对 照品溶液1O,加血浆1.0mL,使其浓度分别为 l8.75,75,300?L,.于一20?冷冻放置2周, 测定坎利酮浓度;于室温放置12h,测定坎利酮浓 度;分别反复冻融3次,测定坎利酮浓度.结果见表 2.配对t检验结果表明,经过上述处理后样品组与 新鲜制备组问浓度无显着性差异(P>0.05),说明 含药血浆样品在上述3种条件下均保持稳定. 药物分析杂志ChinJPharmAnal2007,27(10)一1539— 8I临床应用 8.1人体试验9名男性健康受试者,年龄 (22.2?0.8)岁,体重(63.7?5.41)kg.受试前体 检心,肝,肾等功能均正常.受试前2周及试验期间 未用任何其他药物并禁烟酒.受试者对试验过程及 可能发生的不良反应表示理解并签约知情同意书. 受试者于试验前日晚8h后禁食,次日晨用200mL 温开水送服受试药物200mg.服药后4h进相同低 脂肪,低蛋白标准餐.分别于给药前及给药后0.5, 1,1.5,2,2.5,3,4,6,8,12,24,48,72h取静脉血4 mL,肝素抗凝,混合均匀后离心10min(3500r? min),取血浆一20?保存待钡4. 8.2血药浓度一时间曲线9例受试者单剂口服 螺内酯200mg后坎利酮平均血药浓度一时间曲线 见图2. C/uz.L『 图2单剂量口月鹾螺内酯200nag后坎利酮平均血药浓度一时问曲线 Fig2Meanplasmaconcentration—timecurveofeanrenoneafteroral administrationof200mgspironolaetonetablets 8.3药动学参数螺内酯的代谢物坎利酮的药一 时数据用3P97软件经微机进行曲线拟合和模型识 别.结果显示,其体内过程均符合一房室开放模型, 其药动学参数见表2. 9讨论 螺内酯在体内代谢速度快,较难观察螺内酯原 形药物药动学的全过程,因此我们通过测定螺内酯 体内的活性代谢产物——坎利酮的血药浓度,从而 反映螺内酯的药动学过程. 曾采用乙腈,乙醚,甲醇,二氯甲烷等萃取溶剂, 但结果显示提取回收率均小于乙酸乙酯,文献报道 所用试剂四氯化碳毒性较大,因此我们选用毒性小 且回收率高的乙酸乙酯作为萃取溶剂.本文建立的 坎利酮血药浓度高效液相色谱测定法,血浆杂质干 表2受试者单剂口服螺内酯200mg 后坎利酮药动学参数(4-SD,n=9) Tab2Pharmacokineticparametersof canrenoneafteroral200mgspironolactone inhealthyvolunteers(?SD.n=9) 参数(parameters)数值(value) C?/Ixg?L ?/h T1/2h TI/2h ,,L AUC0一 /?h?L AUC0一 /Ixg?h?L一1 172.1?43.4 4.0?1.2 16.8?4.3 1.1?0.9 1421.0?286.4 3246.1?8oo.4 3649.1?9印.4 注(note):为实测值(determinedvalue) 扰少,样品峰分离度好,具有方法灵敏度高,准确性 好,精密度高等优点.本方法线性范围为9.375,300 ? L..,可满足螺内酯的活性代谢物——坎利酮临 床血药浓度检测和药动学研究的需要. 本试验结果显示,健康志愿者口服200mg螺内 酯后,坎利酮的C为(172.1?43.4)g-L_., 为(4.04-1.2)h,Krause等报道C为(177?33) g?L一,为(4.44-0.9)h,与本研究结果相似. 参考文献 lCHENXin—qian(陈新谦),JINYou—yu(金有豫),TANGGuang (汤光).NewCompilationalPharmacology(新编药物学).Beijing (北京):People’sMedicalPublishingHouse(人民卫生出版社), 2O06.496 2KaukonenAM,LennernasH,MannerlIlaaJP.Water—solublebeta— eyelodextrinsinpaediatrieoralsolutionsofspironolactone:Preelinieal evaluationofspironolactonebioavailabilityfromsolutionsofbeta—cy- elodextrijaderivativesinrats.JPharmPharmacol,1998.50:61l 3SandallJM,MillershipJS,CollierPS,eta1.Developmentandvalida- tionofanHPLCmethodforthedeterminationofspimnolaetoneandits metabolitesinpaediatrieplasmasamples.JChromatogrBArm h?zBiomedLifeSci,2006,839:36 4NeubertP,KochK.Simultaneousautomateddeterminationofspirono- lactonemetabolitesinseFum.JPharmSci,1977,66:1131 5JankowskiA,Skorek—JankowskaA,LamparczykH.Simultaneousde— terminationofspironolaetoneanditsmetabolitesinhumanplasma.J PharmBiomedAnal,1996,14:1359 6KratlseW.KarrasJ.SeifertW.PharmaeokinetiesofeanrenoneafterO. raladministrationofspironolactoneandintravenousinjectionofcall- renoate—Kinhealthyman.EurJClinPharmacol,1983,25:449 (本文于2006年l1月21日收到)