5种含齐墩果酸中药配方颗粒专属性鉴别研究（可编辑）

5种含齐墩果酸中药配方颗粒专属性鉴别研究（可编辑） 5种含齐墩果酸中药配方颗粒专属性鉴别研究 广州中医药大学 硕士学位论文 5种含齐墩果酸中药配方颗粒的专属性鉴别研究 姓名:胥爱丽 申请学位级别:硕士 专业:中药学 指导教师:刘法锦 20070401 5种含齐墩果酸中药配方颗粒的专属性鉴别研究 5种含齐墩果酸中药配方颗粒的专属性鉴别研究 专业:中药学 作者:胥爱丽 导师:刘法锦研究员 摘要 目的:利用现代分析技术，对女贞子、夏枯草、白花蛇舌草、山楂、山茱 萸5种含齐 墩果酸的中药配方颗粒进行专属性鉴别研究，建立5种含相同化学成分的中药配方颗 粒的TLC、UV专属性鉴别方法及图谱，以解决含相同化学成分的中药配方颗粒在失 去其原有饮片外形后，仅凭借单一的指标成分无法鉴别定性的问题，为中药配方颗粒 质量标准的提高提供参考。 方法:以齐墩果酸对照品作对照，采用相同的提取溶剂及展开条件，对女贞子、夏枯 草、白花蛇舌草、山楂、山茱萸5种含齐墩果酸的中药配方颗粒进行TLC 鉴别研究， 并对其图谱进行比较，找出5种中药配方颗粒各自特有的斑点，再结合薄层扫描结果 区分此5种中药配方颗粒:对5种中药配方颗粒进行UV鉴别研究，根据谱线形状及 将此5种中药配方颗粒区分开来，并根据测定结果，规定5最大吸收波长， 种中药配 方颗粒在一定条件下的吸光度A值范围，以控制其质量;在原有的中药配方颗粒质量 标准的基础上，对女贞子配方颗粒的质量标准进行优化，增加uV鉴别方法，提高女 贞子配方颗粒的质量标准。 结果: 1(TLC鉴别研究结果; 对女贞子、夏枯草、白花蛇舌草、山楂、山茱萸5种中药配方颗粒的TLc图谱 进行对比，结果显示，同种中药配方颗粒不同批号之间TLC图谱基本一致，不同的 中药配方颗粒之间的TLC图谱存在差别，除齐墩果酸斑点外，5种中药配方颗粒均具 有各自特有的斑点。女贞子配方颗粒斑点较多，有一绿色及橘红色斑点区别于其他品 个蓝色斑点，白花蛇舌草配方颗种，夏枯草配方颗粒在Rf值较小处存在一 粒有两个 亮蓝色斑点，山楂和山茱萸配方颗粒在齐墩果酸斑点上方均有一粉红色斑点区别于其 余品种，山楂配方颗粒有一个绿色荧光斑点，而山茱萸配方颗粒则有两个连续的绿色 荧光斑点，由此可区分山楂和山茱萸配方颗粒。对5种中药配方颗粒的薄层色谱斑点 进行薄层扫描，结果进一步证实了薄层色谱鉴别的结果。薄层色谱图结合薄层扫描图 谱可初步区分此5种中药配方颗粒( 2(uV鉴别研究结果: 广州中医药大学2007届硕士学位论文 对女贞子、夏枯草、白花蛇舌草、山楂、山茱萸5种中药配方颗粒的紫外光谱图 进行对比分析，5种中药配方颗粒不同提取溶液的最大吸收波长各不相同，不同中药 配方颗粒之间的紫外光谱图有明显差别。 女贞子药材与配方颗粒在水溶液、甲醇溶液、乙醇溶液中的最大吸收波长分别为: 收波长相同。 大吸收，而配方颗粒的甲醇、乙醇溶液则只在283nm ?lnm 处有最大吸收。药材 ?Irma 处有最大吸收。 及配方颗粒的水溶液均在280rim 白花蛇舌草药材与配方颗粒水、甲醇、乙醇溶液的最大吸收波长,致， 分别在 lnm 处有最大吸收。 山茱萸药材与配方颗粒的水、甲醇，乙醇溶液在276nm +2rim 处有最大吸收。 为了控制产品质量，根据多批配方颗粒测定结果，规定女贞予配方颗粒在 士lnm 的波长处吸光度 A 不得少于0(6。 萸配方颗粒在277nm 紫外分光光度法具有简便，快速等特点，可用于中药配方颗粒的快速鉴别。 结论:以中医药理论为指导，运用现代分析技术，建立了5种含齐墩果酸中药配方颗 粒的TLC、Uv快速鉴别方法并将其区分;规定了一定条件下吸光度A值范围，可用 于控制产品质量及辅料量;并在原有的中药配方颗粒质量标准鉴别项下增加 了uV鉴 别方法，提高了中药配方颗粒的质量标准，为中药配方颗粒质量标准的研究 和完善提 供了可参考的范例。 关键词: 中药配方颗粒;鉴别研究 5种含齐墩果酸中药配方颗粒的专属性鉴别研究 ofThe IdentificationforFiveKinds Chinese Specical Study MedicineFormulaGranules Traditional OleanolieAcid Containing TraditionalMedicine Specialty’:Chinese Authar'-Xu?蚯H Tutor:Prof(Lin Fajin Abstract useofmodem anatytical Objeefive:The fivekindsoftheChinesetraditionalmedicine Baihuasheshecao，Shanzha,Shanzhuyu been formula oleanolicacidhave madea identification containing special granules the establishedtheirTLC(UVexclusiveidentificationand tosolve author study(And map traditional that the$amechemical Chinese medicine the problemcontaining component in PiecesChinesetraditionalmedicine formula their original appearance， granuleslosing a to with a elementcan’tbe reference and identified， single qualitative provide only ofthe traditionalmedicineformula the standardChinese granules( improvequality same acidstandardsubstancefor started the Method:Oleanolic reference,andusing solventand extracting spread fivekindsofChinesetraditionalmedicineformula Shanzha,Shanzhuyu granulescontaining TLC the fivekindsofChinese oleanolicacidbeenmadea to identify research,andmap( formula their TLC them traditionalmedicine granulesuniquespots，distinguishtogether kinds traditionalmedicineformula forUV withtheresultofTLS:FiveofChinese granules tothe andimum absorptionwavelengthofspectrum,we identification,accordingshape kindsofChme89traditionalmedicineformula thisfive granules, distinguishedseparate mc the invalueAfor fivekindsofChinese and the of absorbency providedrange certain tocontrol the medicineformula under conditions traditional quality;On granules traditionalmedicineformula basisofthe standardoftheChinese granules, existingquality traditionalmedicineformula ofNvzhenzi(increasedUV we theChinese granule optimized standardofit( to the identifywaysimprovequality Results: the anasof ofTLCidentification:WeTLC Nvzhenzi，Xiakucao， The compared study kinds traditionalmedicinefomula five ofChinese Shanzl:la'Shanzhuyu Baihuasheshecao， thatthesamekindsofChinesetraditionalmedicineformula resultsshow granules，the 广州中医药大学2007届硕士学住论文 betweendifferentbatches’ TLCatlasareconsistent(Differentkindsofthe Chinese granules the traditionalmedicineformula betweenTLC the of atlas，with granules exception oleanolicacid theirown formula havemore uniquespots(Nvzhenzigranule spot，have and aredifferentfromother fomula red―orange spots，agreen spots species(Xiakucao in Rf existsablue thelowvalue(Baihuasheshecaofomula hastwo granule spot granule blue and formula havea above bright spots(ShanzhaShanzhuyugranules pinkspot in can themfromthe oleanolicacid distinct Shanzhaformula spotcommon,it rest，but hasone fluorescent formula hastwoconsecutive spot，andShanzhuyu granule green granule can Shanzha Comus fluorescent between and green spots(Fromthis，wedistinguish kindsChinese medicine formula of traditional formula granules Shanzhuyugranule(Five for wasfurtherconfirmedtheresultsofTLCS(TLCwithTLCS TLC spotsTLCS，TLC by can kinds traditionalmedicineformula atlas thesefive ofChinese granules( distinguish UV The of study formula for fivekindsofChinesetraditionalmedicine Shanzhuyu granulescomparative solventforfivekindsofChinese oftheultraviolet spectrum(Differentex乜-aeting analysis havetheir imum traditionalmedicineformula granules unique absorptionwavelength( traditionalmedicine atlas differentbetweenthefivekindsofChinese n圮UVale evidently formula granules( for inthe solutionsthe Nvzhenziherbandformula water,methanol，ethanol granule imum wavelengtharc:274nm a-lma ，277nm +lnm ，277nm +1nm ( absorption ale andethanolsolutionsofimum thesalTle( methanol wavelength absorption has ineachsolutionof and Nvzhenziformula one water,methanol peak granuleonly ( ethan01 Xiakucaoherb at Therealeimum nm of 288nm 士1nm ，326nm 士1 absorption solution(Bothherband at methanolandethanol andfomula 283nm 圭lrim in granule havema(v iIllm at formula inwatersolution wavelength 280hm 士1 granule absorption herbandformula ineachthethreesolutionofXiakucan c811seetwo granule( rim (we peaks inthe solutions Baihuasheshecaoherbandformula water'methanol，ethanol granule fbrtheimum nm ，277姗 士1 absorptionwavelengthale:270hm +lnm ，273nm 士1 nm ( imum at Shanzhaherbandformula wavelength280 。 -lrim in granule absorption bothmethanolandethanolsolution( water 278 士1 solutioll，at nnl in at herbandformula imum wavelength276 士 2nm Shanzhuyu granule absorption andethanolsolution( inallthe water,methanol the ofthefive In the ofthe on result odertocontrol product,base groups quality 4 5种含齐墩果酸中药配方颗粒的专属性鉴别研究 thatthe Nvzhenziformula formula regulated value A of granule granules，We absorbency cRn’tunder1(6at can’tunder0(8at formula 274 士l 280 士1 nm ;Xiakucaogranule rim ; Baihuasheshecaocan’tunder1(0at formula 270 士lmn ;Shaazha formula毋'anule granule at can’tunder0(7at formula cRn’tunder0(6 277 ?l 280 +1rim ;Shanzhuyugranule am ( as methodfortheChinese The showsthatUVc&nbeusedafastidentification study traditionalformula medicine granules( themodem Conclusion:Directedthe of by T(C(M(，惦ing analyticaltechniques，we theory for kindsofChinesewaditionalmedicine fast methodfive establishedtheTLC?、 identify to the of valuecon灯olthe of formula regulatedrangeabsorbency quality granules，and standardoftheChinese and thebasisofthe productsexcipients(On existingquality of traditional formula addtheUVmethodintotheitem medicine granules(We traditionalmedicineformula the standardofChinese identification,enhanced quality for ofChinesetraditionalmedicine and areferencethe improvement granulesprovide formula granule( traditionalmedicineformula words:Chinese granule identificationstudy Key 附 广州中医药大学学位论文原创性声明 本人郑重声明: 所呈交的学位论文，是个人在导师的指导下，独立进行研 究工作所取得的成果。除文中已经特别加以注明引用的外，本论文不含任何 其他个人或集体已经发表或撰写过的作品成果。对本文的研究做出重要贡献的个 人和集体，均已在文中以明确方式标明并致谢。本人完全意识到本声明的法律结 果由本人承担。 学位论文作牵淄名::!氆量匣 日期:厕年占月r日 关于学位论文使用授权的声明 本人完全了解广州中医药大学有关保留使用学位论文的规定，同意学校保留 允许被查阅和借阅。本或向国家有关部门机构送交论文的复印件和电子版， 人授 权广州中医药大学可以将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检 索，可以采用影印、缩印或其他复印手段保存和汇编本学位论文。 保密论文在解密后应遵守此规定 论文作者签名_二煎纽论文导师签名 日期:矽7年办，日 5种舍齐墩果酸中药配方颗粒的专属性鉴别研究 引言 中药配方颗粒，是用符合炮制规范的中药饮片为原料，经现代工业提取、浓缩、 干燥、制粒精制而成的纯中药产品系列(其性味、归经、功效与原中药饮片一致，用 其代替中药饮片供临床辨证论治、随证加减，配方使用，既保持了原中药饮片的药性 药效，又具有不需煎煮，易于调剂，携带方便，服用方法简单的优点，符合现代中药 安全、有效、稳定、可控的特点。 “中药配方颗粒”原又称。单味中药浓缩颗粒”、“中药饮片精制颗粒”、“免煎饮 片”，2001年，国家食品药品监督管理局正式命名为“中药配方颗粒”，并颁发了管理 暂行规定，这标志着中药配方颗粒取得了合法身份，同时也为中药配方颗粒向科学化、 产业化、标准化方向发展奠定了重要基础( 中药配方颗粒作为传统中药饮片的现代化改革新剂型，己于20世纪90年代在国 内许多医疗单位推广使用。作为治病保健的药品，中药配方颗粒必须具有严格的质量 标准。因中药品种繁多，每一个生产品种都必须有其质控标准。质量标准的研制是一 项繁重的任务，国内各生产厂家都投入了一定的人力、物力，目前包括天江药业、广 东一方制药有限公司在内的6家企业生产700多种常用配方颗粒，并建立了质量控制 标准。 相对于传统中药水煎饮片，中药配方颗粒有利于提高药物临床疗效;便于运输储 存，有益于稳定样品价格;工艺先进，有利于保证质量;调配和服用更加方便，这些 优点使配方颗粒的使用越来越广泛。然而，中药配方颗粒作为传统中药饮片的补充， 可控的质量是其优势，但中药配方颗粒其半成品及成品已经失去了其原有的传统饮片 形态学鉴别的基础，而现有的理化标准专属性差，尤其对于指标成分相同的品种，在 只凭借单一的指标成分进行鉴别，缺乏专属性，其失去其原有饮片外形后， 真伪鉴别 和优劣评价无疑在质量控制中受到严峻挑战。 针对上述的问题，本实验利用现代的色谱和光谱分析手段，对女贞子、夏枯草、 白花蛇舌草、山楂、山茱萸5种均含齐墩果酸的中药及其配方颗粒进行对比研究，最 终建立了女贞子、山楂、山茱萸、夏枯草、白花蛇舌草5种含齐墩果酸中药配方颗粒 的TLC及UV特征图谱，确定了不同中药配方颗粒之间成分的区别以及药材 制成配 方颗粒后成分的变化，更好地解决了中药配方颗粒在不具饮片外形后的真伪鉴别问 题。 本课题主要在以下几个方面开展了研究: 1、5种含齐墩果酸中药配方颗粒的TLC鉴别研究 在对5种原料药材进行薄层鉴别研究的基础上，选择适当的提取溶剂及展开条件， 应用于5种中药配方颗粒的薄层鉴别。根据药材及配方颗粒的TLC图谱，对5种药 广州中医药大学2007届硕士学位论文 材和中药配方颗粒进行对比，找出相关性。根据5种不同的中药配方颗粒的TLC图 谱，找出它们之间成分的差异，确定各自专属的特征斑点。 2、5种含齐墩果酸中药配方颗粒的UV鉴别研究 分别对5种药材及中药配方颗粒采用水、甲醇、乙醇3种不同的溶剂提取，对提 取液进行紫外光谱测定，得到不同的紫外谱线图。比较不同样品谱线的峰形，峰数， 最大吸收峰位置及峰强度等，确立中药配方颗粒的特征紫外光谱图及规定吸 光度A值 的范围。 3、女贞子配方颗粒的质量标准研究 以女贞子配方颗粒为研究范例，在原有质量标准研究的基础上。改进女贞子配方 颗粒的薄层鉴别方法，增加紫外光谱鉴别方法，对原有的女贞子配方颗粒质量标准进 行优化和提高。 预期本课题的研究成果能为含相同化学成分的不同中药配方颗粒的专属性鉴别 研究提供参考，为企业制定中药配方颗粒质量标准提供新方法和新思路。 2 5种含齐墩果酸中药配方颗粒的专属性鉴别研究 第一部分文献综述 一、齐墩果酸文献概述 齐墩果酸 oleanolic OA 是一种齐墩果酸烷型五环三萜类化合物，化学名为 可溶于乙醇、三氯甲烷、丙酮。熔点310?，比旋度[a]D+795。 三氯甲烷中 ( 于双子叶植物五加科、木犀科、龙胆科如青叶胆全草、女贞子果实等植物中嗍( 文献对于含齐墩果酸成分的中药及其制剂的鉴别检测方法颇多，近年来齐墩果酸 成分的鉴别及含量测定方法的最新进展如下: 1、薄层色谱鉴别 对含有齐墩果酸成分的中药进行薄层鉴别的文献中，采用了各种不同极性的溶剂 提取，在对样品进行分析时，可根据样品的性质和要求选择合适的溶剂。 卢文彪采用薄层扫描法对白花蛇舌草中齐墩果酸的含量进行测定。先加乙醇和浓 硫酸回流水解，再加三氯甲烷回流提取，以三氯甲烷一甲酵 9:1 为展开剂，结果 药材样品的薄层色谱斑点分离清晰，显色稳定啪。 中药大枣中含有齐墩果酸成分。刘合刚等制定健脾补血口服液的质量标准，对其 中的大枣作薄层鉴别，先采用三氯甲烷萃取。挥干溶剂后用甲醇溶解，以三氯甲烷一 丙酮一甲酸 8:2:1 为展开剂。结果供试品色谱在与大枣对照药材色谱相应的位 置上显相同颜色的斑点，而阴性对照色谱中则无此斑点叫( 姜店春等人对中药槲寄生与扁枝槲寄生进行薄层鉴别，采用甲醇作溶剂，以甲苯 一乙酸乙酯一冰醋酸 12:4:0(5 为展开剂，用齐墩果酸对照品作对照。薄层色谱 槲寄生和扁枝槲寄生均含有齐墩果酸成分，但其他化学比较研究结果表明， 成分则不 尽相同附。 张玉洁等人先用甲醇提取，溶剂挥干后，残渣用无水乙醇一三氯甲烷 3:2 混 合液溶解，以环己烷一丙酮一醋酸乙酯 5:2:1 为展开剂，对一种伪品女贞子进 行薄层鉴别，以齐墩果酸作对照，结果发现这种女贞子的伪品――鸦胆子中不含有齐 墩果酸，用此方法能将两者进行区分„。 2、紫外光谱鉴别 中药的紫外吸收光谱是其各组分特征吸收光谱叠加而形成的，而中药材的吸收光 谱是由其所含各成分综合决定的，因此尤其适应于中药的真伪优劣鉴别，若能对其在 多种溶剂中的特征吸收峰规定其吸收度，则可用于中药质量的监控m(近年来，用此 在理化鉴别中所占比例也逐渐增加，目前法鉴别中药的研究报道逐渐增多， 大约已有 200多种生药采用紫外光谱鉴别真伪。 广州中医药大学2007届硕士学位论文 2(1鉴别原理一般来讲，凡含一定共扼双键成分 如黄酮类、葱醒类、香豆精类、皂 试类、树脂及街菇类等 的生药，可能在紫外光区有吸收光谱，经过适当处理及限定 后，其最大吸收波长、最小吸收波长、肩峰、吸收系数、吸收度比值等可用于鉴别哪。 2(2检测方法从选用溶剂方面看，用95,或50,乙醇，50,甲醇最多，其次是无水乙 醇或甲醇，仅少数采用石油醚、三氯甲烷、水、硫酸或盐酸等溶剂。高文博等人经过 20余种药材的甲醇、乙醇、三氯甲烷、乙醚、酸性水等浸出液的紫外光谱比较，认为 药材川以甲醇、乙醇为溶媒所得光谱的波峰清晰，甲醇与乙醇效果相似，50,、95, 及无水乙醇的浸出液无明显差别。供鉴别的常数多为最大吸收峰波长，仅少数凭借两 峰吸收度比值或两峰间距辨别，但近年来用导数光谱鉴别渐多。操作过程大致可分三 种类型:一是只经简便提取即行检测者，占绝大多数二是需经萃取分离与处理后方可 检测者，占一定比例;三是要经色谱法分离再提取后才能检测者，目前虽用的较少， 但今后值得研讨m。 2(3应用范围根据紫外光谱的鉴别原理，借助紫外光谱法鉴定真伪的品种，可由原 药材拓展引伸到饮片、粉末、浸膏，流浸膏、提取液、酊剂、酒剂、注射剂等味数少 包括其中间体、半成品 中。这样其应用范围成倍地扩大，的各种剂型制品 更具独特 的鉴别真伪价值。如郝耀礼等的。益母草膏的紫外分光光度法鉴别、孙红祥等的石斛 夜光丸的紫外光谱鉴别”、曹成顺的“参麦注射液中麦冬的紫外分光光度测定法”等 等，涉及到各种剂型成药，另外还有周树云对蛇胆及其制剂进行紫外光谱鉴别的初步 。 试验，刘华著“对一些中成药片剂紫外光谱鉴别的探讨” 另外，辅料的特征吸收光谱也适应于中药成方制剂中对辅料的质控，如伪品蜂蜜 的紫外光谱均在283土lnm处有一强吸收峰，但正品蜂蜜无此现象，因此，若制剂中 所含中药在283士lra处无吸收峰，而在该制剂中发现有此吸收峰，则可认为该制剂 的辅料蜂蜜有掺伪现象，从而起到对辅料的监控作用。。 3、含量测定 用于齐墩果酸 oA 的含量测定方法有很多，过去常用比色法、中和法，但操作 复杂，显色误差较大，对酸性物质无分辨能力和选择性，所以近年来已很少应用，而 薄层扫描法，高效液相法则较为常用。 3(1薄层扫描法操作简便，能快速地检测出齐墩果酸的存在，应用比较广泛。 要方法有: 1 曹艳丽等采用乙醇回流的方法考察9批不同产地的女贞子药材中齐墩果酸的含 量，结果齐墩果酸在0(541,2(7059范围内线性关系良好、相关系数为0(9997，加 较大M。 2 由于一些中药中的齐墩果酸成分是以与糖结合成苷的形式存在的，所以在处理 4 5种舍齐墩果酸中药配方颗粒的专属性鉴别研究 过程中必须先用酸水解，才能更好地检测齐墩果酸的含量。卢文彪采用薄层扫描法测 定白花蛇舌草中齐墩果酸的含量。结果表明，药材的色谱斑点分离清晰，方法简便， 灵敏度高，有较好的重现性和加样回收率，可作为控制白花蛇舌草药材的质量标准之 一啪( 3 应帮智等人以乙醚作为提取溶剂，采用薄层扫描法测定比较山茱萸不同炮制品 中齐墩果酸含量。结果表明不同炮制方法和加入的辅料对齐墩果酸含量影响较大，其 炮制品中齐墩果酸含量均高于生品，并且酒蒸品 酒浸品 酒炖品 清蒸品“”。 3(2高效液相色谱法高效液相色谱 HPLc 法有操作快速，准确性高的优势，正在 取代其他的方法。主要方法有: 1 精密称取样品，置索氏提取器中，用40ml三氯甲烷提取4h，放出提取液，过滤， 蒸干溶剂，残留物加甲醇使溶解，转移至50ml量瓶中，加甲醇至刻度。以甲醇一水 9:1 为流动相。李显奇等人采用IIPLC法对女贞子不同炮制品中的齐墩果酸进行 了含量测定，结果表明:其含量大小依次为酒炖品 酒蒸品 醋蒸品 盐水蒸品 盐炙品 生品。平均回收率97(87,，RSD I(23,”( 2 精密称定样品，置圆底烧瓶中用20、15、15ml无水乙醇分三次回流提取，每次 rain，合并提取液于60?水浴挥去乙醇，残渣加20ml4mol,l的盐酸加20 热回流30min， 冷却溶液，不必分离，直接分两次加入三氯甲烷回流萃取，每次lOml，萃取15min， 取lOml三氯甲烷萃取液于50?水浴挥去三氯甲烷，残渣加90,甲醇使溶解并至lOml， 制成样品溶液。以甲醇一水 9:1 为流动相。王天勇等人首次采用反相高效液相色 谱法分离并测定了地肤子、连翘、牛膝、泽兰、白花蛇舌草、夏枯草、柿蒂七种中药 中的齐墩果酸，建立了中药中齐墩果酸分离、测定的色谱方法。结果以上七种中药齐 取液抽滤后浓缩至干，残渣用甲醇溶解，转移至50ral容量瓶中，加甲醇至刻度。以 甲醇一水 88:12 为流动相。袁珂等人采用此方法测定车前草中熊果酸和齐墩果酸 为97(8, RSD 2(24, (结果可以看出车前草中熊果酸的含量高于齐墩果酸“”( 4 精密称取样品，置具塞锥形瓶中，精密加入无水乙醇50ml，称定重量， 水浴回 流提取2h，冷却，称量，加无水乙醇补足至原重，摇匀，滤过，续滤液作为供试品溶 液。以甲醇一0(I,磷酸溶液 82:18 为流动相。干国平等人采用HPLJc法比较了伞 形花耳草和白花蛇舌草中熊果酸和齐墩果酸的含量，结果表明伞房花耳草中齐墩果酸 和熊果酸的含量明显高于白花蛇舌草“”( 5 赵永席等人采用高效液相色谱一蒸发光散射检测法测定几种不同产地 的山茱萸 药材的齐墩果酸和熊果酸含量(以甲醇一O(5,冰醋酸 87:13 为流动相，蒸发光 广州中医药大学2007届硕士学位论文 散射监测器漂移管温度65。C，载气流速2(OL,min。结果齐墩果酸和熊果酸分别在 (28,3(84垤和1(16,3(4899时线性关系良好，测得陕西丹风产的山1 茱萸齐墩果酸 含量最高，河南西峡产的熊果酸含量最高““。 3(3气相色谱法周静等用毛细管气相色谱法测定女贞子中齐墩果酸和熊果酸的含 量。取女贞子三氯甲烷提取液，挥干，甲醇溶解经甲酯化后，迸样分析。色谱条件:HP 气相色谱法也可以用作齐墩果酸和熊果酸成分的检测“”。 二、5种中药各自的研究现状 1、女贞子 女贞子 Nllzhenzi FRU铘SLIGUSTRILUCIDI 【概述】 LucidumAir( 的干燥成熟果实。冬季 本品为木犀科植物女贞Ligustrum 果实成熟时采收，除去枝叶、稍蒸或置沸水中略烫后，干燥;或直接干燥。 分布 于华东、华北、中南、西南及陕西、甘肃。 性昧与归经甘、苦，凉。归肝、肾经( 功能与主治滋补肝肾，明目乌发(用于眩晕耳鸣，腰膝酸软，须发早白， 目暗不明。 用法与用量6,129 【产地研究】 l不同产地女贞子中齐墩果酸的含量比较 传统认为女贞子主要产湖南、四川。采用CS910薄层扫描仪测定浙江、江西、 河南、湖南、广西、云南产女贞予中齐墩果酸的含量，结果为:浙江2(10,、 江西1(62,、河南2(93,、湖南2(48,、广西1(60,、云南1(31,。这 表明:产地不同，女贞子中齐墩果酸含量亦不相同，以河南省和湖南产女贞子中 齐墩果酸含量较高。因而认为湖南市为女贞子传统产区是有科学性的，而河南产 女贞子亦为女贞子中质优品种“”。 【采集研究】 1 女贞子不同采收期与其有效成分含量的关系 女贞子为木犀科植物女贞的干燥成熟果实，具有强腰膝，补肝肾之功效，其 熊果酸等，传统认为宜果热时采收。现代有人对不同有效成分为齐墩果酸、 采收 6 5种舍齐墩果酸中药配方颗粒的专属性鉴别研究 期两种有效成分的含量进行了测定，结果表明:二者含量以12月正常成熟期采 收含量最高“”。 2女贞于不同生长期与齐墩果酸含量的关系 也有人对不同生长期的女贞子进行齐墩果酸定量分析，结果表明:女贞子中 齐墩果酸含量以幼果期 8月下旬 最高，以后随着果实的生长发育，含量逐渐下 降，但到12月份以后，果实完全成熟，含量基本稳定不再下降，根据这一含量 变化考虑到lO月上旬采收女贞子较为合理“”。对于女贞子采收期的不同看法， 尚有待于人们进一步研究。 【鉴别研究】 I性状鉴别 呈肾形、卵形或椭圆形。表面灰黑色或紫黑色，皱缩不平，基部常有宿尊及 果柄残痕。外果皮薄，中果皮稍疏松(内果皮木质，黄棕色，具有纵棱(内有种 子1,2枚，紫黑色或红棕色，略呈肾形，有纵棱。昧甘，微苦涩嘲。 2显微鉴别 2(1横切面外果皮为1列细胞，外壁及侧壁加厚、内常含油滴。中果皮 12,25列薄壁细胞。内果皮处有7,12个维管束散在，内果皮由4一-8列纤维组 成具棱环。种皮最外为1列切向延长的表皮细胞，常含油滴。向内为棕色薄壁细 胞。胚乳较厚，内有子叶嘲。 2。2粉末灰棕色或黑灰色，果皮表皮细胞黄棕色或紫棕色。断面观略呈 扁圆形，较大，外壁圆拱形角质增厚，且呈数个尖脊状伸入脑腔，将胞腔分隔;表面 观呈类多角形，胞问层似细缝状，垂周壁厚。内果皮纤维纵横交错排列。种皮碎片淡 细胞稍狭长，散有圆形、长圆形分泌细胞，内含黄棕色分泌物棕色或棕色， 和油滴。 果皮下皮细胞含紫色物，易破碎成色素块(中果皮薄壁组织及内胚乳薄壁细胞含草酸 钙砂晶及细小方晶，偶见簇晶嘲( 3理化鉴别 3(1化学法 3(1-1粉末lg，加3ml乙醇，振摇5分钟，滤液置蒸发皿中蒸干，残渣加 加1滴硫酸，显桃红色，渐变紫红色，最终呈污绿色，置lml醋酐使溶解( 365nm 紫外灯下观察，显黄绿色荧光啪1。 3(1(2粉末0(59加乙醇5m]，振摇5分钟，滤液置蒸发皿中蒸干(滴加三氯 化锑三氯甲烷饱和液，再蒸干。呈紫色 甾萜类反应 溯。 3(1(3粉末29，加乙醚20ral，温浸30分钟后过滤。取滤液2ml，置玻璃 皿上挥去乙醚，残渣与无水硫酸钠1,2粒指挥直接加热，产生气泡及丙烯醛的白色 气体，有刺激性特臭 查油脂类化合物 啪。 3(2层析法 7 广州幸医药大学2007届硕士学位论文 G板 105?活化1小时 上，以0(5mg,ml齐墩果酸三氯甲烷液作对照，环己烷一三氯 甲烷一乙酸乙酯 20:5:8 展层，展开后晾干，喷20,硫酸液，105。C烘10分钟。 日光下可见4个斑点，365nm紫外灯下可见9个黄色荧光点，且均有齐墩果酸斑点五。 3(2(2样品适量，80?恒温干燥3小时，以三氯甲烷回流提取5小时，滤液 调成0(069,ml，点于硅胶G板，以齐墩果酸标准品配制成Img,ml三氯甲烷液作对 照。三氯甲烷,甲醇 20:1 展层，10,硫酸乙醇液喷雾，90烘10分钟显 紫红色斑点 [?】 ? 3(2(3取粉末59，加7,硫酸乙醇一水 1:3 溶液50ml，加热回流2小时， 放冷后，用三氯甲烷振摇提取3次 50、25、25m1 ，三氯甲烷液以水振摇洗涤后，用 无水硫酸钠脱水，滤过。三氯甲烷液蒸干后，残渣溶于Iml甲醇，吸取101J1点于硅 胶G 湿法铺板，105?活化1时 薄层板上。以三氯甲烷一乙醚 1:1 展开后，喷硫酸 一水 1:1 ，105?烘烤，可见7个斑点，其中1个斑点与标准品齐墩果酸相同 苷元 检识 九。 3(2(4粉末lOOg，置沙氏提取器中，用石油醚提取总油。取油29依常法用0(5N 氢氧化钾乙醇液80ml皂化后，缛总脂肪酸。用2,浓硫酸一甲醇溶液 1:5 30ml回 流2小时，进行甲基化，得总脂肪酸甲酯，点样于硅胶G--10,硝酸银 3:lO，湿法 铺板，105?活化l小时 薄层板上。以苯展开，喷以0(2,2’，7’一二氯荧光素乙 置254nm紫外灯下，显4个黄色斑点。由下而上分别与亚麻酸、亚油醇液， 酸、油酸、 棕榈酸的甲酯斑点一致 总脂肪酸甲酯检识 洲( 3(3电泳法用聚丙烯酰胺凝胶电泳法，对女贞于进行可溶件蛋白电泳研究， 结果蛋白电泳语上有3条谱带嘲。 3(4荧光法样品的乙醇浸出物，置于365nm紫外光灯下观察，呈黄绿色荧光 [烈】 ? 【化学成分】 1有机酸、苷、萜及甾类 oleandic acid 、2?一羟 齐墩果酸 oleanolicacid 、乙酰齐墩果酸 acteyl acid 、女贞苷 基齐墩果酸 2a―hydroxyoleanolicacid 、女贞子酸 Nuczhenidic acid 、19 a--hydroxy Nuezhenide 、熊果酸 Ursolicd一羟基一3一乙酰乌索酸 19 一3一acetylurs01ic acid 、亚麻酸 Linolcnic Palmiticacid 、硬脂酸 stearicacid 、油酸 Oleic alcoh01 、对羟 基 alcohol―B―D― ―D一吡喃葡萄糖苷 p―hydroxyphenethyl 苯乙醇一B 2磷脂 8 5种舍齐墩果酸中药配方颗粒的专属性鉴别研究 溶血磷脂酰胆碱 LPC 、磷脂酰乙醇胺 PE 、磷脂酰胆碱 Pc 、磷脂酸 PA 、磷脂酰肌醇 PI 等嘲。 3糖类 含女贞子多糖 uPs 由B一糖苷键连接 ，由鼠李糖、阿拉伯糖、葡萄 糖及岩 藻糖组成嘲。 4氨基酸及微量元素 含15氨基酸，其中谷氨酸含量最高，含人体必需氨基酸8种汹1，含儿种微量元 素，其中有5种人体必需元素嘲。 5挥发油 hexane 、 2，2--dimethyl--pentane 、乙酸乙酯 acetic 6其它 从女贞子叶中分离出了齐墩果酸 oleanolicacid 、芹菜素一7一葡萄糖苷 日本产 acid 、 女贞子 L(japonicumThunb 中含乌索酸 Ursolicacid 、齐墩果酸 oleanolic 乙酰齐墩果酸 acetyloleandic 【成分分析】 1成分鉴别 TLC鉴别齐墩果酸将样品的醉溶液点于硅胶G板上，用石油醚一三氯甲烷一醋 酸 10:lO:2 展开，氯磺酸一醋酸 1:2 喷雾显色，齐墩果酸Rf O(60嘲( 2含量测定 9 广州中医药大学2007届硕士学位论文 2(1比色法 2(1(1测齐墩果酸含量 2(1(1(1精取样品醇提液，点于硅胶G板上，用石油醚一三氯甲烷一醋酸 10: 10:2 展开，将齐墩果酸斑点刮入试管，精密加入5,香草醛一冰醋酸溶液(2ml、 0 高氯酸0(8ml，混匀置70?恒温水浴加热15分钟，冷至室温，精加乙酸乙酯4ml， 离心，取上清液在560nto测吸收度，同时随行空白对照，由标准曲线计算齐墩果酸含 量踟。 85。C水浴中回流提取2小时，分出三氯甲烷层，回收定容并点于硅胶G板上，用石油 醚一三氯甲烷一冰醋酸 10:10:1 展开，碘蒸汽显色定位(挥尽碘蒸汽，刮取齐墩 果酸斑点，加上述显色剂离心取上清液比色测定渊。 2(1(2测磷脂含量 样品用Forch试剂渗漉提取20小时，并浸泡过夜，渗漉液低温 50"C以下 氮气 减压回收溶剂，残渣用三氯甲烷溶解，加5倍量石油醚沉淀甾苷类化合物，离心后取 上清液，重复3次，合并上清液并在真空干燥器中挥干溶剂，残渣用三氯甲烷定容放 冰箱中备用。取一定量提取液消化、显色，在700nm处比色测定，可计算样品中总磷 脂含量。取一定量提取液浓缩后点于硅胶G板上，同时点磷脂对照品，用丙酮展开 17cm，取出后在暗处挥去溶剂后放干燥器中干燥12小时，再用乙酸乙酯一异丙酯一 xlOcm 水 10:7:3 同向展开15cm，碘蒸汽显色2小时，将相应色带处硅胶刮于l 层析柱中，用Forch试剂洗脱并测定各磷脂组分的吸收度，分别计算含量啪1。 2(2碘量法测定甘露醇含量九 样品用石油醚脱脂，乙醇提取、水定容，取水样稀释100倍后取25mi 于腆量瓶中，精密加入高碘酸钾液50ml。水浴加热15分钟，冷后加碘化钾试液5ml， 放5分钟，用0(Olmol,LNa:S:0。标液滴定，淀粉作指示剂，并同时作空白校正，计算 含量。 2(3TLCS法 2(3(1药材中齐墩果酸含量测定 2(3(1(1女贞子药材粗粉用石油醚回流5小时脱脂后，用三氯甲烷回流6小 时，回收三氯甲烷并定容，过滤。取续滤液定容点于硅胶G_-cMc板上，环己烷―三 长反射锯齿扫描，^。 530nm，^。 640nm，SX 3，狄缝2×2“”。 取两次，合并提取液，过滤并定容至50m1。齐墩果酸用三氯甲烷配成lmg,m1的溶液。 10 5种含齐墩果酸中药配方颗粒的专属性鉴别研究 SX 3，外标二点法定量蚴。 2(3(I(3 以游离形式存在的齐墩果酸样品用乙醇80"C水浴提取30分钟并定 容;以苷形式存在的齐墩果酸样品，用70,乙醇一浓盐酸 9:1 在80?水浴提取30 分钟并定容。点于硅胶例c_-Na板上，用三氯甲烷一甲醇 9(5:0(5 展开，10,硫 叫 ? 2(3(1(4取女贞子粗粉69左右，用石油醚在沙氏提取器中回流5小时脱脂后， 再用三氯甲烷提取6小时，回收三氯甲烷至于，精密加90ml三氯甲烷溶解，过滤， ，用三氯甲烷定容至lOml，点于硅胶p_cMc板上，用环己烷一取续滤液Iml 三氯甲 外标一点法定量„。 2(3(2制剂中齐墩果酸含量测定 2(3(2(1 口服液中齐墩果酸含量测定用苯一乙酸乙酯 3:1 为展开剂，双 点法测定„。 2(3(2(2齐墩果酸片中齐墩果酸含量测定 点子硅胶G板上，用石油醚一苯一乙醋乙酯一醋酸 10:20:7:0(3 展开， 用无水乙 醇一醋酐―浓硫酸 10:l:1 喷雾，100"C烘5分钟显色，双波长反射法锯齿扫描， ^s 530hm，^I 700hm，SX 3，外标一点法定量四。 2(3(2(2(2取齐墩果酸片10片研细混匀，精取适量 相当于3片重 ，用三 。点于硅胶G板上，用氯访一氯甲烷溶解，过滤，用三氯甲烷定容至50ml 甲醇 20: 1(2m，外标二点法定量九。 ----2，狭缝1(2X 2(3(2(3丸剂中齐墩果酸含量测定 样品点于硅胶G薄层板上，用石油醚一苯一乙睡乙酯一醋酸 10:20:7:0(5 展 3“町。 2(4 HPLC法 ,分钟，室温，纸速0(5cm,分钟(外标法定量四( 广州中医药大学2007届硕士学位论文 【临床应用】 1治疗慢性气管炎 取女贞子树皮或枝叶的煎剂，每日服药量相当树皮鲜品1209或枝叶鲜品1809， 分3次服，10日为1疗程，连服1个疗程。治疗慢性气管炎492例，有效率为89(23 ,，其中显效以上者占53(25,刚。 2治疗慢性萎缩性胃炎 贞芪扶正冲剂。每次209，l曰2次，2个月为l疗程，治疗过程停用其他有关药 物。治疗慢性萎缩性胃炎336例，治疗3个疗程后胃镜、病理、症状疗效总 有效率分 别为74(1,、77(4,、95(O,。疗效随服药时间延长有所提高o”。 3治疗消化吸收不良症 贞芪扶正冲剂。每次209，1日2次，2个月为1疗程。治疗消化系统脾气虚证患 者53例，疗效较好，总有效率为96(2,。并采用原子吸收光谱法检测患者治疗前后 Cu,Zn比值降低 P 0(01 嘲( 4治疗肝炎 4(1采用从女贞子药渣中提取的齐墩果醇酸，治疗急性黄疸型肝炎70例，有 效率为94(3,，治愈及显效率为80,嘲( 4(2应用齐墩果醇酸治疗乙型肝炎70例，对恢复肝功能、HBsAg转阴均有一定 疗效”( 5治疗冠心病 女贞子注射液 每m1含乙酸乙酯总提取物lOmg 治疗冠心病取得良好疗效。肌注: 2例，为中度心绞痛患者，用5,20ml加入25,葡萄糖或生理盐水40ml，每日1次， 10目为1疗程，可连用1,2疗程。静滴;2例，为重度心绞痛者，用20ral 加入10 状者5l例，有效率86(3,，显效率23(5,。合并心肌梗塞3例，显效1例，改善 l例，无效1例;合并高血压病32例，显效7例，改善19例，无效6例;单纯冠心 病心绞痛12例，显效3例，改善9例。治疗后复查心电图73例，其中显效6例、改 善3l例，有效率50(7,，显效率8，2,嘟1。 6治疗高脂血症 女贞子、怀菊花各209，生山楂、制首乌各309，生大黄69 后下 。煎成水煎500ml， 每次饮用20ml，每日3次，30目为1疗程。连服2个疗程。治疗期间停服其他降脂 药物。治疗60例高脂血症，结果甘油三酯平均值下降95(106mg,dl，平均下降率为 7治疗小面积烧烫伤 12 5种含齐墩果酸中药配方颗粒的专属性鉴别研究 取鲜女贞子叶，煎取浓汁，局部外涂。治疗106例中小面积烧烫伤(结果浅?度， 未感染化脓刨面愈合平均10日;感染化脓创面愈合平均20日。深II度，未感染化脓 创面愈合平均23日。?度小面积创面未植皮愈合平均时间为40日[sT]o 8其他 女贞子对提高机体免疫力有一定作用嘲。 2、夏枯草 夏枯草 Xiakucao SPICAPRUNELL(他 【概述】 本品为唇形科植物夏枯草PrunellavulgarisL(的干燥果穗(夏季果穗呈棕红色 时采收，除去杂质，晒干。分布子华东、中南、西南及陕西、甘肃、新疆。 性味与归经辛、苦，寒。归肝、胆经( 功能与主治清火，明目，散结，消肿。用于口赤肿痛，目珠胀痛，头痛眩晕， 瘿瘤，乳痈肿痛;甲状腺肿大，淋巴结结核，乳腺增生症，高血压寥傈疬， 症。 用法与用量9,159。 ;【采集研究】 1夏枯草采集月份研究 夏枯草古代以用茎叶为主，农历四月采，近代本草记载主要用果穗，7月中旬半 枯时采，齐墩果酸和熊果酸是其中已知的主要成分之一，若以之含量评价其质量、确 定采收期，则果穗的熊果酸、总三萜酸含晕以7月半枯时最高，叶中的含量在6月花 期最高，故果穗宜7月采，叶宜6月采。此结果进一步验证了历代本草和现代药典记 载夏枯草不同部位分期采收的科学性侧。 2夏枯草的不同生长期与其有效成分含量的关系 夏枯草主要有效成分为齐墩果酸、熊果酸，传统认为宜夏季采收。现代有人通过 Gc对夏枯草的主要有效成分齐墩果酸、熊果酸的含量进行了分析，以总三萜的量作为 评价以上诸方面指标的研究，结果表明:药用部位地上部位似都可为药用，花期叶中 含量为高，果序期中含量为高，所以采集夏枯草应根据其不同物候采收不同入药部位 【钳】 ? 【鉴别研究】 l性状鉴别 呈棒状，略扁，长1(5,8cm，直径0(8,1(5cm。淡棕色至棕红色。全穗由数 轮至10数轮宿萼与苞片组成，每轮有对生苞片2片，呈扇形，先端尖尾状，脉纹明 显，外表面有白毛。每一苞片内有花3朵，花冠多已脱落，宿萼二唇形，内有小坚果 广州中医药大学2007届硕士学位论文 4枚，卵圆形，棕色，尖端有白色突起，体轻，气微，味淡九。 2显微鉴别 2(1果实横切外果皮为1层厚壁细胞，外附粘液层。中果皮为1,4层石细胞 。 及微木化的薄壁细胞。内果皮为1层石细胞，种皮为1层薄壁细胞“”