高效液相色谱法测定益肝灵分散片中水飞蓟宾的含量

高效液相色谱法测定益肝灵分散片中水飞蓟宾的含量 高效液相色谱法测定益肝灵分散片中水飞 蓟宾的含量 时珍国医国药2006年第17卷第12期 LISHIZHENMEDICINEANDMATERIAMEDICARESEARCH2006VOL?17NO-12 高效液相色谱法测定益肝灵分散片中 水飞蓟宾的含量 王小平,杨银盛,周铁文 (江西中医药高等专科学校,江西抚州344000) 摘要:目的建立益肝灵分散片中水飞蓟宾的含量测定.方法采用C18柱;流动 相:甲醇一水一冰醋酸(48:52:1);检 测波长:288nm;结果水飞蓟宾的线性范围为10.64—53.2Og/ml,r=O.9999;平均回收 率为97.5%,RSD=1.40%.结 论该含量测定方法准确,稳定,可用于益肝灵分散片的质量控制. 关键词:高效液相色谱法;益肝灵分散片;g--x蓟宾 中图分类号:R284.2文献标识码:A文章编号:1008-0805(2006)12-2488-01 DeterminationofSilybininYiganningDispersibleTabletsbyHPLC WANGXiao-ping,YANGYin-sheng,ZHOUTie—wen (JiangxiCollegeofChineseMedicine,Fuzhou344000,China) Abstract:ObjectiveToestablishamethodforthedeterminationofsilybininYiganningDispe rsibletablets.MethodsTheCl8 columnwasused.Themobilephaseconsistedofmethanol—water— glacialaceticacid(48:52:1).ThedetectionwavelengthWaS 288nm.ResultsThecalibrationcurveofSilybinwaslinearintherangeof10.64, 53.201xg/ml(r=0.9999)withaveragere— covery97.5%(RSD:1.40%).ConclusionThedeterminationmethodisaccurate,stableandca llbeusedtocontrolthequality ofYiganningDispersibleTablets. Keywords:HPLC;YiganningDispersibleTablets;Silybin 益肝灵分散片由益肝灵片改变剂型而制成,主要含有水飞蓟 宾,异水飞蓟宾,水飞蓟宁,水飞蓟亭等黄酮类成分….具有改 善肝功能,保护肝细胞膜的作用,主要用于急,慢性肝炎属肝胆湿 热证者.由于方中水飞蓟宾不溶于水,普通片口服生物利用度 低,因此将其研制开发成分散片,增加水飞蓟宾的溶出以提高其 生物利用度.本文对益肝灵分散片中水飞蓟宾的含量测定方法 进行了初步研究. 1仪器与试药 1.1仪器岛津LC一10ATvp高效液相色谱仪(岛津公司); N2000色谱数据工作站(浙江大学智能信息研究所); KQ3200B型超声波清洗器(昆山市超声仪器有限公司);MET- TLER—TOLEDDAB265一S型电子分析天平(瑞士). 1.2试药益肝灵分散片及阴性对照样品:自制;水飞蓟宾对照 品:0856-200203,购自中国药品生物制品检定所;硅胶G(中国青 岛海洋化工集团公司),试剂除HPLC用甲醇为色谱纯外,其他均 为分析纯. 2方法与结果 2.1色谱条件色谱柱:DiamonsilCl8柱(5m,4.6mm×250 mm);流动相:甲醇一水-冰醋酸(48:52:1);流速:1.0ml/min;检 测波长:288nm;理论板数按水飞蓟宾峰计算应不低于5000,见 图1.可见供试品中水飞蓟宾与其它组分达到较好分离,分离度 >1.5. 2.2对照品溶液的制备取经105~C干燥至恒重的水飞蓟宾对 照品约l0mg,精密称定,置50ml量瓶中,加甲醇适量,超声处理 20rain,放冷,用甲醇稀释至刻度,摇匀.精密量取5ml,置25ml 量瓶中,用甲醇稀释至刻度,摇匀,作为对照品溶液. 2.3供试品溶液的制备取本品20片,研细,精密称取适量(约 含水飞蓟宾10mg),置50ml量瓶中,加甲醇适量,超声处理20 收稿日期:2006-01-09;修订日期:2006-07-25 作者简介:王小平(1973一),男(汉族).江西九江人,现任江西中医药高等 专科学枝讲师,硕士学位,主要从事中药药剂教学覆中药新药研发工作. - 2488? min,放冷,用甲醇稀释至刻度,滤过,精密吸取续滤液5ml,置25 ml量瓶中,加甲醇稀释至刻度,摇匀,作为供试品溶液. 2.4水飞蓟宾线性关系考察精密称取干燥至恒重的水飞蓟宾 对照品5.32mg,置5Oml量瓶中,加甲醇适量,超声处理2Omin, 放冷,用甲醇稀释至刻度,摇匀.分别精密量取1,2,3,4,5ml 置1OmI容量瓶中,加甲醇稀释至刻度,依次精密吸取2OI注入 液相色谱仪,记录色谱图.以进样浓度(g/m1)对峰面积作线性 回归,回归方程为:A=34346×C一1758,r=0.9999,可知在 lO.64—53.2Og/rnl范围内呈良好线性关系. 2.5精密度实验吸取同一浓度的对照品溶液2Ol,重复进样 测定5次,结果水飞蓟宾峰面积RSD=0.70%. 2.6稳定性实验取同一供试品溶液,于室温放置0,2,6,12,24 h后分别取样测定,结果水飞蓟宾峰面积RSD=1.77%.表明供 试品溶液在24h内稳定. 2.7重复性实验精密称取同一批号的样品5份,分别照含量 测定方法测定,结果样品中水飞蓟宾平均含量为83.90mg/g, RSD=1.43%. 2.8回收率实验采用加样回收法,取益肝灵分散片样品共6 份,研细,取适量,精密称定,分别精密加入水飞蓟宾对照品2 mg,依法制备供试品溶液并测定含量,计算得平均回收率为 97.50%,RSD=1.40%.结果见表1. 表1回收率实验结果 序 号一 1 2 3 4 5 6 样品中量加人量测得量回收率平均回收率RSD m/mgm/mgm/mg(%)(%)(%) 5.o08 4.883 5.57l 5.352 6.082 6.I41 2.9样品的含量测定取10批益肝灵分散片,照2.3项下操 作,精密吸取对照品溶液与供试品溶液各20l,注入液相色谱 蚰 5 669l28 卯町呻 川 .=mmH儿 ?m 量g一724852一筮 LISHIZHENMEDICINEANDMATERIAMEDICARESEARCH2006VOL. 17NO.12时珍国医国药2006年第17卷第12期 仪,记录色谱图.用外标法,以峰面积计算样品中水飞蓟宾(c, HnOlo)的含量.结果l0批样品的每片含量分别为37.70. 36.32,38.5O,37.54,37.22,38.18,37.85,35.83,37.33.37.38 m#g,平均37.39ms/g,RSD=2.14%,拟定本品每片含水飞蓟 宾(CH22Ol0)不得少于6.0mg. 3讨论 3.1色谱峰面积计算文中色谱条件下测得对照品有两个谱峰, 分别是水飞蓟宾的两个非对映异构体,根据《中国药典}2005版 一 部收载水飞蓟的含量测定方法],以两色谱峰面积之和计算 含量. 3.2提取时间考案分别取4份样品,精密称定,置50ml量瓶 中,加甲醇适量,分别超声lO,15,2O,25min,依法制备供试品溶 液并测定水飞蓟宾含量.结果表明超声时间20min即已提取完 全,故确定超声提取时间为20min. 3+3含量限度确定根据原剂型益肝灵片含量],每片含 水飞蓟宾素以水飞蓟宾(CH2O.)计算,应为标示量(38.5me-/ 片)的90.O%一110.O%,即每片含量应为34.65.一42.35mg.由 以上含量测定结果可知每片含量均在上述标准范围之内.因此, 暂定本品每片含水飞蓟宾(C2sH220..)38.5mg. 参考文献: [1]许海琴,许列琴,许江苇,等.常用天然提取物质量标准参考手册 [M].北京:化学工业出版社,2003:118. [2]国家药典委员会.中国药典,I部[S].北京:化学工业出版社, 2005:56. [3]中华人民共和国卫生部药品标准.益肝灵片(WS一B1618—93). 丹参对梗阻性黄疸大鼠肾损伤作用的实验研究 高卉.,阮明凤,龙浩成 (1.咸宁学院医学院,湖北咸宁437100; 2.咸宁学院附属第一医院,湖北咸宁437100;3.华中科技大学附属同济医院,湖北武汉430030) 摘要:目的探讨血浆内皮素(ET一J)对大鼠梗阻性黄疸肾损伤的作用,以及丹参对 肾损伤的保护作用.方法将64只 大鼠随机分为4组(每组16只):正常对照组(cN),假手术对照组(s0),梗阻性黄疸组 (0J),丹参治疗组(0J+SM).分 另q于手术后7d和14d两个时段检测血浆ET-1,TB,DB,BUN,Cr水平,同时对肾脏 行病理形态学观察.结果与CN组 和s0组比较,0J组大鼠血浆ET-1,TB,DB,BUN,Cr水平明显升高(P<0.01),同时伴 有肾脏病理形态学的改变.丹参 治疗可使血浆ET一1,TB,DB,BUN,Cr水平明显降低,与OJ组比较有显着性差异 (P<0.01),肾组织形态学变化明显减 轻.结论梗阻性黄疸时大鼠血浆ET-1明显升高,与BUN和cr呈正相关;丹参通过 降低血浆ET-1水平对梗阻性黄疸大 鼠肾脏起保护作用. 关键词:梗阻性黄疸;丹参;血浆内皮素;肾功能 中图分类号:R285.5文献标识码:A文章编号:1008~805(2006)12.2489-02 TheExperimentalStudyontheEffectofSalviamiltiorrh/zaontheRenalDamagesinOb- structiveJaundicelts GAOHui,RUANMingfengrz, LONGHao—cheng (1.DepartmentofSurgery,MedicalSchoolofXianningCollege,Xianning437100,China,2.eFintAffilia- tedHospitalofXianningCollege,Xianning437100,China,3.rongiiHospital,HuazhongUniversityofScience& Technology.Wuhan43O030,China) Abstract:ObjectiveTostudytheeffectofSalviamiltio~h&aontherenalinjuryinobstructiveiaundicerats.Methods64ca— sesofratswererandomlydividedintofourgroups:thecontrolgroup(CN),shamoperatedgroup(SO),obstructivejaundicegroup (OJ)andobstructivejaundicesalviamfltiorrhizatreatmentgroup(0J+SM),16casesineach.Plasmalevelsofendothelin-I (ET一 1),totalbililubin(TB),directbililubin(DB),uresnitrogen(BUN)andcreatinine(Cr)weremeasuredonthe7thand14th dayafteropreration.Renalhistopathologicalchangeswereobservedwithlightmicroscopy.ResultsIn0Jgroup,theplasmalev— els0fET— I,TB,DB,BUNandCrwerehigherthanthoseinSOgroup(P<0.01),theplasmalevelsofET-I,TB,DB,Crand BUNinOJ+SMgroupwerelowerthanthoseinOJgroup(P<0. 叭),renalhistopathologiealchangeswereimproved.Conclu- sionPlasmaET— IlevelincreasesinWistarratswithobstructivejaundice,thereisapositiveeorrelationshipbetweenET—Iand BUNandCr.salvi8miltiorrhizamayhavethefunctionofamelioratingrenaldisfunctionbyreducingET一1leve1. Keywords:Obstructiveiaundice;Salviamihiorrhiza;Endothelin.I;Renalfunctions 急性肾功能衰竭是梗阻性黄疸病人术后死亡的主要原因之 一 .近来研究表明,梗阻性黄疽引起的肾损害原因是多方面的, 其中许多炎性介质和活性物质起着重要作用.血浆内皮紊-1 收稿日期:2006-04-25;修订日期:2006-07-26 作者简介:高卉(1967.).男(汉族),湖北浠水人,现任成宁学院医学院 外科学教研室副教授.硕士学位,主要从事普外基础和临床研究工作. (endothelin.1,ET.1)是近年来发现的缩血管活性肽,参与多种疾 病的发生和发展.本研究是采用大鼠梗阻性黄疸动物模型,观察 血浆内皮素与.肾损伤的关系,并探讨丹参对梗阻性黄疸大鼠.肾损 害的作用,为临床上防治梗阻性黄疸引起的肾损伤提供理论 依据. 1材料与方法 1.1药品及试剂丹参注射液购自正大青春宝药业有限公司 ? 2489?