豚鼠感染犬小孢子菌动物模型的建立及其应用

豚鼠感染犬小孢子菌动物模型的建立及其应用 摘要 本试验采用米饭培养基,,。,培养犬小孢子菌,,，振荡法制备菌悬液，砂纸法接种在豚鼠背部皮肤上建立动物模型。通过临床症状、病理学变化和在皮肤内发现犬小孢子菌证实模型建立成功。在该模型基础上分别于接种后,，,,，,,，,,，,,，,,和,,,取接种部位皮肤，并通过,,,酶染色研究朗格汉斯细胞的变化。在该模型基础上做了四种抗真菌药物的临床疗效实验，包括特比奈芬、益康唑、克霉唑和米糠唑，井与体外药敏试验结果相比较。 试验结果表明，豚鼠皮肤感染犬小孢子菌动物模型建立的条件是:砂纸打磨至渗虹，每;,,接种大分生孢子浓度为,,?个,,,的菌悬液,(,,,,，接种后,,动物模型建立成功。感染皮肤增厚最明显的是真皮，表皮增厚最明显的是棘层。动物模型丁,接种后第,,天自愈。表皮内侧郎格汉斯细胞受到真菌、,抗原刺激向真皮内游走，形态发生一定的变化，直至接种后第,,天恢复正常。四种商品抗真菌药物对动物模型的治疗效果由强到弱依次为:特别萘芬，益康唑，咪康唑，克霉唑，该顺序与体外药敏试验结果一致。但是药物和真菌之间的量效关系还需要进一步研究。 关键词:豚 ,鼠，犬小孢子菌，动物模型，朗格汉斯细胞，约敏试验 ,,,,,,;, ,,,,,,,,,,,,,,, ,, ,,;,,,,,,,, ;,,,, ,,,,;,,,,, ,,,,,, ,,, ,,,,, ,,, ,,,,,,, ,,, ;,,,,,,,,, ,,,,;, ,,,,,,(,,)，,,。,，,,, , ,,,, ,,, ,,, ,,,,,,,,,, ,,,;,,,,,, ,,, ,,,,,, ,,, ,, ,,,,,,,,, ,, ,,,, ,,;, ,, ,,, ,,,,,,,, ,,,,, ,,, ,,,,,,,,,, ,, ,, ,,;;,,,,,, ,, ;,,,,;,, ,,,,,,,，,,,,,,,,,;,,;,,,,,, ,,, ,,,,;,,,, ,(;,,,, ,, ,,,,(,,, ,,,, ,,,,,, ,,,, ,,,,,,, ,,,,, ,,,;,,,,,, ,，,,，,,，,,，,,，,, ,,,,, ,,,,(,,, ,,,,,,,,,, ;,,,, ,,,, ,,,,,,, ,, ,,,,,, ,,,,,,,,(,,,, ,,,,,,,,,, ,,,,, ,,,, ,,,,,, ,, ,,,,,,, ,, ,,, ,,,,, ,,;,,,,,, ,,,,,,,,,,,，,;,,,,,,,，,,,,,,,,,,, ,,, ,,;,,,,,,,(,,, ,,,,,,, ,,,,;,,,,,,, ,,,, ,, ,,,,, ,,,;,,,,,,,,,, ,,,,,,,( ,,, ,,,, ,,,,,，,,,,,;,,;,,,,,,,,;,,,,(,,,,, ,,, ,,,,, ,,,, ,,,, ;,,,,,,,,, ,, ,,,,,,,,,,,,,,,, ,, ,,;,,,,,,,, ;,,,, ,,,,;,,,,, ,,,,,, ,,, ,,,,,(,,, ,,,,,, ,,, ,,, ,,,,,,, ,,,,,,,,,,,,,;,,,,,, ,,,, ,,,;,,,,, ,,, ,,,, ,,,,,,,;,,,,, ,, ,,, ,,,,;,,,,, ,,,, ,,, ,,,,,,,,,(,,, ,,,,,,,,,,, ,,, ,,,,,;,,,, ,,,,, ,,,;,,,,,, ,, ,,,,(,,, ,,,,,,,,,, ;,,,, ,,,,,,,,,,,,, ,,,, ,,,,,,,,, ,,,,,,,, ,,,,,,,,,, ,, ,,,,,, ,, ,(;,,,, ,,, ,, ,, ,,, ,,,,, ,,, ,,;,,,,,, ,,,,, ,,,;,,,,,, ,, ,,,,(,,,,,,,,,,,,,; ,,,,;, ,, ,,,, ;,,,,,;,,, ,,,,,,,,,, ,,,,, ,, ,,,,,, ,,,,, ,,,,,, ,,,,,,,,,,,，,;,,,,,,,，,,;,,,,,,, ,,, ,,,,,,,,,,,, ,,,, ,,,, ,, ,,,,, ,,, ,,, ,,,, ,,, ,,,, ,, ,,, ,,,,,, ,, ,, ,,,,,,,,;,,,,,,,,,, ,,,,,,,(,,, ,,, ,,,,, ,, ,,, ？,,,,,,, ,, ,,,,, ,,, ,,,,, ,,,,,, ,, ,,,,,,,,,,, ,,,,,, ,,, ,,,,,:,,,,,, ,,,，,,;,,,,,,,, ;,,,,，,,,,,, ,,,,,，,,,,,,,,,, ,,,,，,,,;,,,,,,,,,, ,,,, ，， , ,,,,,, 独创,,生声明 本人声明所呈交的论文是我个人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。尽我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得中国农业大学或其它教育机构的学位或证书而使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示了谢意。 研究生签名: 毒态 时间: ‰„年,月廖同 关于论文使用授权的说明 本人完全了解中国农业大学有关保留、使用学位论文的，即:学校有权保留送交论文的复印件和磁盘，允许论文被查阅和借阅，,,,『以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文。同意中围农业大学可以用不同方式在不同媒体上发表、传播学位论文的全部或部分内容。 (保密的学位论文在解密后应遵守此) 研究生签名 季鸯， 时问:渺„年占月侈同 导师签名 时间:‖? 年易月侈日中国农业大学硕士学位论文 第一章弓，言 第一章 引言 据国家有关部门统计在大中城市每年犬猫以,,,以上的速度递增。但是由于人什,对犬猫饲养没有正确科学的知识，所以由此引起的犬猫感染人们的疾病近年来也是越来越多，并已经引起医学方面的重视。在由此引起的人兽共患病中，皮肤真菌是影响和危害最人的疾病。在皮肤真菌病中，犬小孢子菌病位于三大人兽共患病之首。所以研究犬小孢子菌对有效的防治人感染犬小孢子菌具有十分重要的参考和借鉴价值。 犬小孢子菌是目前动物临床影响年,，危害最人的一个皮肤真菌病，据报道,,,的猫和,,,的狗皮肤病是由犬小孢子菌引起的。所以本文研究了犬小孢子菌的发病规律、临床特征、免疫学变化、病理学变化以及抗真卣药物的临床药敏试验等，对犬小孢子菌病有了一个更加全面的认识，对该病的病理学、治疗学、免疫学以及抗真菌药物的药效评价都有十分重要的作用。,(,犬小孢子菌的微生物学特征 犬小孢子菌(,,;,,,,,,,, ;,,,, ,,,,,，,(;,,,,，,,,,)，也称为羊毛状小孢子菌(,,;,,,,,,,,,,,,,,, ,,,,,,,,,，,,,,);其有性呲代称为太田矮小菌(,,,,,,,,,,,,，,,,,,,,,);本菌属于、,知菌亚门——丝孢卣网——从梗孢目——丛梗孢科一小孢子菌属，为发内兼发外型、亲动物性皮肤癣菌。菌体包括气生菌丝，营养卣丝和大分生孢子。犬小孢子菌存在于自然界“】及猫、狗、兔、羊等动物的皮毛上口】，属于,,,界性的病源真菌。 犬小孢子菌在培养毖上除生匠出典型的大分生孢子外，还可有异型和变种。,,,,年金学洙等,,应片,显微操作法单孢子培养技术， 发现一株异型犬小孢子菌的大分生孢子较细艮且呈各种弯曲型。国外学者也犬小孢子菌有大分生孢于抓转变种(,(,(,,,，,,,,,,,,, ,,;,,;,,,,,,)〔,,。,(,(,常用培养基及其特性 犬小孢子菌生,繁殖规律随培养基成份的,;同而不同，常用的培养基有沙堡罗固体培养基 (,,,,,,,,, ,,,,,,,, ,,,,，,,,)，沙堡罗液体培养基(,,,,,,,,, ,,,,,,,, ,,,,,，,,,)和米饭培养基(,,;, ,,,,,,(,,)等。 ,)在,,,上,, ,,培养,,,,,可见典型的菌落特征，正面白色至淡黄色绒毛状，丝状或粉状，菌落四周有黄色的色素产生，背面早黄色至黄褐色，取菌落镜检可见分隔分支的菌丝，具有,(,,个分隔的人分生孢子，罐厚，表面粗糙，两头尖。 ,)在,,,培养基,主要产生大量的菌丝，所以为了获得大量的菌丝，可以将真菌在液体培养基上进行培养。但是,“。,:人分生孢于的时间最晚，为接种培养斤的第,天，量也很少。 ,),,培养菌落明显比,,,和,,,生长缓慢。本研究发现在米饭培养基上，菌丝顶端长出分生孢子器，发卣成大分生孢子;人分,孢子内生长出菌丝和分生孢子器。新一代分生孢予器发育成新的人分牛孢,，如此循环往复、生,繁殖。而,,,,年金学洙等嗡日告了对犬小孢子菌生长,繁殖规律进行研究的成果，认为冉?,,,,沙氏培养基上犬小孢,菌主要靠大分生孢子发芽 ,中国农业大学硕士学位论文 第一章引言形成菌丝及分技，并不断增生、产生新的大分生孢子和小分生孢子，如此反复、不断循环形成菌落。,(,(,毛发穿孔试验 犬小孢子菌既是发内型义是发外型亲动物皮肤癣菌，犬小孢子菌侵袭皮肤角质层后，其菌丝顶端沿毛囊下行，至毛球上方即毛小皮成熟水平的部位，穿透破坏的毛小皮侵入毛发内;此时菌丝向下行进的速度减慢，与毛发生长的速度抵销，所以一般情况,菌丝很少达到毛乳突。毛根内的菌丝也随着毛发的生,而上移到毛干内。本试验也通过扫描电镜试验证明了犬小孢子菌既是发内型又是发外型亲动物皮肤癣菌。,(,(,染色特征 犬小孢子菌细胞壁的主要成分是几丁质(,,,,,,,,，是一种构造类似于纤维素的多糖体，又称甲壳质)，葡聚糖和蛋白质，所以其染色特征是乳酸酚棉兰将其染成蓝色，革兰氏染色染成红色，,;,,,,氏过碘酸染成红色。,(,(,荧光检查 伍德氏灿采用低压水银蒸气放电，低压水银主要发射的是,,,,,短波紫外线，采用光量,转调法，在灯管内壁涂上?层特殊荧光材料，使它吸收,,,,,短波紫外线而在,,,,,附近形成较宽的紫外线光谱带，经过滤色片滤去可见光，得到高能量长波紫外线。高能量艮波紫外线照射到处于基态的物质分子上，基态分子受到激发而处于激发状态，激发态分子的能量一部分消耗于振动，于是分子处于振动能级，从振动能级回到基态时多余的能量以光的形式放出来即荧光。真菌细胞晕由儿』质，蛋白质和葡聚糖组成，其比例剃结构的差异造成了在紫外线照射 ,所发山的荧光不同，感染犬小孢子菌的毛发和病灶在伍氏灯照射卜,发山亮绿色的荧光。,，,犬小孢子菌的流行病学特征,(, ,犬小孢子菌病 ,,,,年世界,生组织(,,,)和联合国粮农组织(,,,)对人兽共患病(,,,,,,,,)定义为那些在人类和脊椎动物由共同病原体引起，又在流行病学上有关联的疾病。畜牧专家钱永清讲(,海农业网信息摘要,,,,年第,,划)目前世界,(已经证实的人兽共患病有,,,多种，包括细菌、病毒、立克次体、原虫、真菌、寄生虫和其他种类疾病。犬小孢子菌病是人兽共患病，它既呵以感染人又可以感染动物，并,能够 在人和动物之间互相传播。犬小孢子菌是人头癣股癣体癣的雨要致病菌，人犬小孢子菌病的传染源是患犬小孢子菌病和带菌的猫、狗、兔、羊等动物。人们可以通过„,这些动物直接接触而传染【“, ,】;或者接触了病猫、病狗等留稿:饮料、家 ,具、衣物、土壤、地毯及地板等上的带菌皮毛而传染【“,】;也可通过理发,,具间接传染,,】。病人中接触猫狗等动物的占,,(,,,,,,(,,,【,,”,;饲养宠物可致家庭内的流行旧,,,由人传染给人的虽然少见，但美国有由托儿所护理员传染给婴儿引起爆发流行的报告,,】;国内也有报告【,…。易感人群是儿童，以学龄前儿童发病率较高【,,,，儿童占,,(,,,，学龄前患儿占,,(,,,。孙亦新等,”,报告儿童占所有患者的,,(,,,，其中学龄前儿童为,,，,,,，学龄儿童为,,(,,,。人多在夏初秋末发病〔,,;也有报告在,月和,月最多见【“,。头癣丁冬春季发病者占,,,，而体癣大多在夏季发病。犬小孢子卣主要是引起头癣，占,,(,,,，全都是儿童。曾庆玉等【,”报告,,,,年至,,,,年,,,例儿童头癣中,,，,,,(,,,,,,) ,】的报告相似。从近是由犬小孢子菌所致，与,,,,,,,,, ,,等【, ,,年来的文献报告看出，犬小孢子菌病,“泛分布于世界各地;我国各地区均有分布，其中以西北、华北、和东北地区较多见，南方及沿海地区较少见”…。 犬小孢子菌是犬猫临床最为重要的皮肤病源真菌。动物的犬小孢子菌病在,,月至次年,月发病率高，而在,,,月份发病率低。,,,,年联合王国学者,,,,,,,,,等““报告白,,,,至,,,,年共,,,,份猫、狗皮肤癣菌病标本作培养，结果,,,的猫和,,,的狗标本为犬小孢子菌。通过动物身上的腐食酪螨(,,,, ,,,,,,,,,, ,,,,,,;,,,,,,)的叮咬和粪便造成动物之间犬小孢子菌的感染和传播〔,,。与中国农业大学的林德贵教授等所作的调查结果基本一致。犬小孢子菌感染所引起的外观多种多样，一般有不同程度的脱屑，,皮碎屑，结痴和脱毛。脱毛只是暂时的，但若毛囊被炎症所破坏，新毛就不能生氏。通常，毛发变脆),:在靠近皮肤的地力断裂，留,短的毛茬，同时可见皮肤脱屑和撕皮。另据英国人,,,,,,,, ,,,,,〕报道犬小孢子菌还可以引起猪皮癣病的暴发流行。,(,(,人兽共患病 《人兽共患病报告》,,,,,,,, ,,,,,,(,,,,年一,,,,年第一个五年报告)指出主要的人兽共患病皮肤真菌有三个，即:犬小孢子菌(通常来自于宠物，特别是猫和犬)，疣状毛癣菌(通常来自于牛)利须癣毛癣菌(平常能感染实验室中饲养的小鼠、火鼠、狗、猫、兔、灰鼠和豚鼠)。犬小孢子菌在人和动物之间的传播方式主要是接触传播，如经常接触患有犬小孢于菌病的犬猫，犬猫可以通过病人的脱落的病发和鳞屑，污染的农物等被动物啃咬接触所感染。据英国的调查，与感染猫接触的人有,,,感染，并且,,,的家庭至少,人感染。,,,,年吴绍熙等【”,较早的报道了一例人猫共患犬小孢子菌病。,(, ,犬小孢子菌感染的现状 近年来，人犬小孢子菌病早逐年增多的趋势。张豁达等”峙,告，,,,,年,月至,,,,年,月犬小孢子菌病,,,所有浅部真菌病的,,(,,,(,,,,,,,);而紧接着的,,,,年,爿至,,,,年,月，其百分比升高至,,(,,,【,,。特别是犬小孢子菌所致头发和头皮深层的感染(脓癣)发病率急剧增加，喻昭等【,,”】报告，,,,,年至,,,,年的,年间，,,例脓癣中没有,例是由犬小孢，,菌引起的;而,,,,年至,,,,年的,年间，,,例脓癣中就有,,例(占, ,(,,,)是犬小孢子菌所致。,,,,年至,,,,年间，,,例头癣病原菌中，犬小孢子菌占,,,(,,,,,)〔,,,:，,,,,,年 ?中国农业大学硕士学位论义 第一章引言至,,,,年间,,例脓癣中犬小孢子菌所占百分比就增至,,(,,,(,,,,,)。傅爱华等【,,,报告在,,,,年到,,,,年间，犬小孢子菌病的发病数逐年增多，分别为,,例、,,例、,,例、,,例。 不同部位的犬小孢子菌病的发病率不同，原因之一是各部位直接接触病猫病狗的频率及其寄生环境不同。接触频率高且寄生环境好的课环??示透撸 苑??室酝费?罡撸 逖?沃 盅? 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