寿胎丸对SD孕鼠胚胎-胎仔发育毒性的研究 论文分享

寿胎丸对SD孕鼠胚胎-胎仔发育毒性的研究 论文分享 寿胎丸对SD孕鼠胚胎-胎仔发育毒性的研究 作者,刘丹卓,尤昭玲,赵新广 【摘要】目的探讨寿胎丸对SD孕鼠胚胎-胎仔发育的毒性,对其生殖安全性 进行研究。方法采用寿胎丸不同剂量对SD孕鼠体内染毒,观察其吸收胎、畸 胎等,并观察胎仔内脏、骨骼及胎仔体质发育等异常状况。结果其不同剂量对 孕鼠胎仔活胎率、吸收胎率和畸胎率影响,以及对胎仔内脏、骨骼和体质发育 影响,与溶剂对照比较均未见明显差异。结论寿胎丸药液在本研究所确定的50 g/kg剂量浓度以下,初步认为对健康育龄SD孕鼠生殖功能及其胚胎发育无明 显毒性。 【关键词】寿胎丸,生殖毒性,安全性 寿胎丸乃清代盐山名医张锡纯所创,出自《医学衷中参西录》,原为护胎而设, 后经多年来临床医家们反复实践与锤炼,已演绎成为治疗胎漏、胎动不安、自 发流产、滑胎的首选方。寿胎丸被广泛用于妊娠期,其药效已得到了充分肯定, 但临床运用安全性研究至今未见详细报道。有效评价药物对女性生殖功能的毒 性有着深远的意义,女性生殖系统是药物作用的一个特有的靶器官,女性生殖 系统复杂且所有配子在出生前就已形成,所以其损害可能是多靶点及永久性的, 并可导致完全绝育[1]。有鉴于此,本文通过其不同剂量对SD孕鼠体内染毒, 进行生殖毒性测定,以期获得其继药效学之后的临床前毒效学资料,为其孕期合 理和安全应用提供实验学依据。 1材料与仪器 1.1药液制备 对所需中药药材的来源及品种进行鉴定,筛选优质正品,原料经品种鉴定 无误后,再进行挑选和洗净,然后炮制、切片、烘干、粉碎。严格按经典处方 比例用量配备,制取工艺如下,?取经加工炮制的标准中药饮片,菟丝子、续 断、桑寄生,加蒸馏水6?8倍量,水液煎煮2次,1.5 h/次,合并滤液,浓缩 至相对密度为1.1?1.2 (50?60?C),?加入乙醇使醇含量达65%,冷藏24 h, 醇液滤过,滤液回收乙醇,至无醇味,?阿胶详化,?以上两液合并,滤过, ?滤液冷藏放置,视无沉淀析出,?添加蒸馏水,调pH值至6. 5?7.0,并 调整至相当于含生药2 g/ml,?精滤、灌封、灭菌即得。 1.2试剂与仪器 40%甲醛,北京化学试剂公司生产,冰乙酸,北京化学试剂公司生产,95% 乙醇,北京化学试剂公司生产。丙三醇,北京化学试剂公司生产。光学显微镜, 日本OLYMMPUS SZ-ST型。电子分析天平,美国AG-104,感量值0. 01 g?游标 卡尺,天津仪器厂生产。 1周的健康性成熟未经交配生育的Sprague-Dawley SPF/VAF级大鼠,雌雄 各150只,年龄约80?90 d,体质量约200?220 g(早,,350?380 gU)。以 上动物由北京维通利华实验动物技术有限公司提供,动物合格证号, SCXK(京)2007-0001。使用北京科澳协力饲料有限公司生产的标准膨化饲料在标 准饲养盒内喂养,饲料合格证号,SCXK(京)2005-0007。每盒5只,盒内保持清 洁干燥,定时定量向饲料盒添加足量饲料,由动物自由摄食。饮水采用经DWT 型二氧化氯消毒机处理后聚乙烯塑料瓶装消毒饮用水,由动物自由饮用。每曰 清洗饮水瓶,并更换饮用水1次。SPF级动物房日光灯明暗交替12 h,室温 22?25?C,湿度 30%?70%。 2方法 2.1实验分组 采用交配后动物分组法,将当日己交配受精鼠称重,按体重排序,以每盒5 只将受精鼠按体质量依溶剂对照组,寿胎丸低剂量组、中剂量组、高剂量组, 阳性对照,环磷酰胺,组顺序随机分配,并尽量使各组受精鼠数相近。次曰交 配受精鼠类此,交配期2周,最终各实验组分组只数见1。 2.2给药方法 各剂量组大鼠分上下午2次固定时间灌胃给药,与人临床拟用途径相同, 给药剂量见各表,最高剂量为人临床用量的200倍。于妊娠期第6天开始给药, 连续给药10 do给药期间依体重变化随时调整给药体积。溶剂对照同期灌胃蒸 馏水,给药体积与各剂量组给药体积相当,并依体重变化随时调整给药体 积。阳性对照组采用腹腔注射环磷酰胺药,给药期限从妊娠第11天至妊娠第 13天,给药剂量7 mg/ (kg • d)。 2.3实验步骤及观测指标 妊娠第20天颈椎脱臼处死孕鼠,切开腹部暴露两侧子宫,纵切子宫,分离胎 仔,记录死胎、活胎和早晚吸收胎,称量子宫与胎仔重量,并记录仔代雄雌性别 比。对每只活胎胎鼠先经肉眼检查,肉眼不能确定某种畸形,则将胎鼠放在解 剖显微镜下进一步确定并照相。将每窝一半胎鼠放入Bouin’s液固定,进行胎 仔身长、尾长测定,并进行内脏检查;另一半放入90%酒精中固定进行骨骼检查, 计算骨骼畸形发生率;检查各脏器有无异常,计算内脏畸形发生率。 2.4统计学分析 全部数据统计分析均采用SAS 9. 13版软件,由计算机完成。各组胎鼠平均 体重、身长、尾长等计量资料以土s表示,数据采用t检验进行显著性分析。 活胎、死胎、畸胎、早晚吸收胎等计数资料以百分率,,)表示,数据采用X 2 检验进行显著性分析。 3.1寿胎丸对妊娠期孕鼠生殖状态影响 寿胎丸各剂量组活胎率为97. 74%?98. 51%,溶剂对照组活胎率为 97.57%,寿胎丸各剂量组与溶剂对照组比较,其活胎率未见有明显差异,P> 0.05)。各剂量组孕鼠的死胎率与溶剂对照组相当,在0.0%?0.4%之间,仅 偶见死胎。寿胎丸不同剂量组的吸收胎率,均与溶剂对照组相当,未见有明显 差异。在胎鼠畸形方面,其高、中、低不同剂量组胎鼠的畸胎率,0.75%? 1.54%)与溶剂对照组(1.24%)相比,差异无显著性(P>0. 05)。阳性对照组 活胎率,87.94%)和死胎率,0.39%)均与溶剂对照组相近,但畸胎率,37.61%) 和吸收胎率,11.67%)明显高于溶剂对照组,具有非常显著性意义(P<0. 01)。 结果见表1。表1寿胎丸不同剂量对妊娠期孕鼠生殖状态影响,略, 3.2寿胎丸不同剂量对胎仔内脏及骨骼发育状态影响 寿胎丸各剂量组、溶剂对照组及阳性对照环磷酰胺组做徒手切片共检查 611只胎仔内脏,未查出1例内脏畸形或变异。骨骼检查畸形状况,其各剂量 组与溶剂对照组畸形率比较,无显著性差异,P>0.05)。阳性对照环磷酰胺组 与溶剂对照组骨骼畸形率差异有非常显著性,PC0.01)。结果见表2。表2寿 胎丸不同剂量对胎仔内脏及骨骼发育状态影响,略, 3.3寿胎丸不同剂量对胎仔体质发育状态影响 寿胎丸各剂量组胎鼠的窝均体重、身长、尾长、胎盘重与溶剂对照组相当, 未见显著性差异,P>0.05)。寿胎丸各剂量组孕鼠所孕胎仔的雄雌性别比也未 见明显差异,P>0.05)。阳性对照环磷酰胺组的窝均体重、身长、尾长及胎盘 重以上各项指标均明显低于溶剂对照组,P<0.01)。但孕鼠所孕胎仔的雄雌性 别比与溶剂对照比较,未见明显差异,P>0.05)。结果见表3。表3寿胎丸 不同剂量对胎仔体质发育状态影响,略, 4讨论 合理使用药物,特别是减少药物毒性对妊娠期妇女机体的损害,一直是临 床用药的宗旨。但是,许多临床应用于妊娠期、围生期等中药或复方,由于其 疗效肯定,而其潜在的生殖或遗传毒性并没有引起人们足够重视,也正是由于 这种忽视,方药的潜在毒性可能直接或间接地作用于DNA分子,使DNA的复制 或修复过程受阻,从而引起疾病发生,甚至遗传给下一代。目前国内外所涉及 的药物生殖毒性研究方法数以百计,常用的也有十余种[2]。如致畸敏感期毒 性实验、胚胎毒性实验、一般生殖毒性实验、围产期生殖毒性实验、行为畸胎 学实验等。研究方法虽多,但基本上没有依据中医药g身特点所建立的生殖安 全性研究体系。基于中医的辨证论治规律,方药的遣方配伍原则,寿胎丸广泛 用于妊娠期,而胚胎器官形成期对药物作用最为敏感,为此,本研究采用动物 胚胎致畸敏感期作为药物作用的时间靶点进行生殖毒性试验。 本研究采用寿胎丸3个不同剂量对妊娠期孕鼠染毒,各剂量组活胎率、死 胎率与溶剂对照组相当,仅偶见死胎。各剂量组吸收胎率、畸胎率与溶剂对照 组相比,也无显著性差异,这说明药物本身对妊娠期孕鼠生殖功能状态未见明显 影响,且无明显致胎仔外观畸形作用。各实验组做徒手切片共检查611只胎仔 内脏,未查出1例内脏畸形或变异。检查畸形状况,其各剂量组与溶剂对照组 骨骼畸形率比较,未见有显著性差异。各剂量组胎鼠的窝均体重、身长、尾长、 胎盘重及胎仔的雄雌性别比与溶剂对照组相当,未见明显差异。这进一步提示 寿胎丸不同剂量对胎仔体质发育状态,无明显影响。综合以上实验结果,在本研 究所确定的条件下,寿胎丸药液对健康育龄SD孕鼠胎仔、胚胎发育无明显毒性。 【参考文献】 [1]刘育谷.卫生毒理学[M].北京,人民卫生出版社,2003: 103. [2]付立杰.毒理学在中国现代化建设中面临的机遇和挑战[J].中国药 理学和毒理学杂志,2000,14(5), 326.