钙调神经磷酸酶在双氢睾酮诱导心肌肥大中的作用的初步研究

钙调神经磷酸酶在双氢睾酮诱导心肌肥大中的作用的初步研究 钙调神经磷酸酶在双氢睾酮诱导心肌肥大中的作用的初步 研究 ,,,,;,, ,, ,,,;,,,,,,, ,, ,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,;,, ;,,,,,; ,,,,,,,,,,, 医学 学科门类 生理学 学科 、 专业 心血管 研究方向 二, ,五级 年 级 陈善义 研究生姓名 李岷雯副教授 导师姓名 ,,,,?,一,,,,, ,?, 起止日期 广东医学院 二,—,年五月本研究受到以下项目的支持:广东医学院引进人才基金项目(项目编号:,,,,,,) 学位论文独创性声明 本人呈交的学位论文系在导师指导下所取得的研究成果。除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已发表或撰写的研究成果，也不包含为获得广东医学院或其他教育机构的学位或证书所使用过的材料。 作者签名阻萋义 日期巡～:亟～兰 学位论文知识产权声明 本人在就读研究生期间所完成的学位论文及其相关成果，知识产权归属学校。本人在毕业离校前会将有关研究资料和结果全部上交导师，离校后发表或使用学位论文或与论文直接相关的学术论文或成果时，署名单位仍然为广东医学院。学校可以将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文，可以公布(包括刊登)论文的全部或部分内容。导师享有发表学位论文、申请成果和专利的权利。 注:保密的学位论文在解密后适用本声明。 作者签名醒茎塞 日期丝丝墨:～芝( 导师签名狱氐日期必照,～? „ ? ,?,。??乞(、寸 ?? ? ,?(?，，:， ((:? (气( „( 目 录中文摘要……………………………………………………………………………,,,,,,,;,………………………………………………………………………?…“,,前言………………………………………………………………………………, ,(,研究背景……………………………………………………………………, ,(,材料和方法…………………………………………………………………, ,(,统计学处理………………………………………………”………………?,,,结果……………………………………………………………………………,, ,(,大体指标………………………………………………………………… ,, ,(,组织学结果………………………………………………………………,, ,(,基因表达……………………………………………………………………,,,讨论……………………………………………………………………………,, ,(,性激素在心肌肥大中的作用………………………………………………,, ,(,钙调神经磷酸酶参与双氢睾酮诱导的心肌肥大反应……………………,,,结论……………………………………………, , , , , , , , , , , , ,?…………………,,,问与不 足……………………………………………………………………,,参考文献…………………………………………………………………………,,综述………………………………………………………………………………,,综述参考文献……………………………………………………………………,,致谢………………………………………………………………………………,,附录一中英文对照缩写词……………………………………………………,,附录二在读期间发表文章……………………………………………………,, 钙调神经磷酸酶对双氢睾酮诱导的心肌肥大作用的初步研究中文摘要 【目的】 从动物水平及分子水 平研究雄激素(,,氢睾酮，,,,,,,,,,,,,,,,,,,,，,,,)对心肌细胞肥大反应的影响及其信号转导机制，探讨,,,,(雌二醇(,,,,(,,,,,,,,,，,,)对,,,诱导心肌肥大的影响，研究钙调神经磷酸酶(;,,;,,,,,,,，,,,)在性激素对心肌肥大影响中的作用，进一步加深性激素对心血管系统作用的了解。 【方法】实验分组:大鼠按体重随机分为,组假手术组(,,,,组)、卵巢切除，溶剂组(,组)、卵巢切除，雌二醇组(,,组)、卵巢切除，双氢睾酮组(,,,组)、卵巢切除，雌二醇，双氢睾酮组(,,，,,,组)。卵巢切除制造去势模型，术后,,小时(不始给药，双氢睾酮浓度为,,,,,,，,,,,雌二醇浓度为,(,,,,,,，给药方式为皮下注射。,、,组给予溶剂，,组皮下注射,,,,雌二醇,,,(,,,,,(,，,组皮下注射双氢睾酮,,,,,,,,,(,，饲养,周。处死动物前夜禁食，称量体重后，处死动物，无菌条件下取出心脏，冷生理盐水清沈血迹，称重，分离心室，左心室，分别称重，取小块左心室组织(约,,,,)放入,,,甲醛中保存待测，计算心重指数(心脏,体重，,,,,,)，左心室重量,体重(,,,,,,)，心脏重量,胫骨长度(,,,,,);剩余心室组织切成小块冷冻保存待测。采用逆转录聚合酶链反应(,,,,,,)和免疫组织化学(，,,)方法分别检测左心室组织中,,,,,,,、,,, ,,,,、,，,,,, ,,,,的表达和,,,的蛋白水平。 【结果】,(大体指标的测量:,,,组的心脏重量(,(,,，,(,,)与,组(,(,,,(,(,,)和 ,，,,,组(,(,,,,,(,,)的心脏重量比较，无显著性差异;给予,,,可以增 加心重指数(,(,,士,(,,)，但与,组(,(,,,(,(,,)和,，,,,组(,(,,,,,(,,) 比较，无显著性差异:给予双氢睾酮组与,组的,,,,,值分别为(,,(,,,,,(,,， ,,(,,,,,(,,)与雌二醇组和雌二醇，双氢睾酮组的,,,,,值(,,(,,,,,(,,， ,,(,,,(,(,,)比较具有显著性差异。,(组织学结果:,,染色可见，给予双氢睾酮组心肌纤维增粗，其横截面积为 ,,,,(,,士,,,(,, ,,,，给予雌二醇可以减少心肌细胞横截面积，,组与,，,,, 组的横截面积分别为,,,(,,,,:,,,(,,，,,,(,,,,:,,(,,，,,,组与,组和,，,,, 组比较具有显著性差异，,,,(,,。免疫组化结果显示，钙调神经磷酸酶主要分 布于胞浆中，双氢睾酮组心肌胞浆中阳性颗粒(棕黄色)增多，,,,,,表达 增高，给予雌二醇的大鼠心肌细胞胞浆中阳性颗粒减少，,,,,,表达明显下 调，。,(,,,,表达:双氢睾酮组大鼠心肌细胞中肥大相关基因,,,及,,,,, ,,,,的表达较假手术组明显增高，给予雌二醇可以抑制双氢睾酮刺激引起 的心肌肥大相关基因,,,及,,,,, ,,,,的表达水平上调作用。双氢睾酮 组心肌细胞的,,,,, ,,,,表达上调，雌二醇可以降低大鼠心肌细胞 ,,,,, ,,,,的表达水平，,,,组与,组和,，,,,组比较具有显著性差异， ,,,(,,。 【结论】 双氢睾酮可以引起,,大鼠心肌肥大，雌二醇可以抑制,,,引起的心肌肥大。 双氢睾酮引起钙调神经磷酸酶的表达上调，钙调神经磷酸酶可能参与了,,,引起的心肌肥大的发生。 【关键词】 舣氢睾酮(,,,);,,,,雌,二醇(,,);心肌肥人;钙凋神经磷酸酶(,,,) , , ,,,,, ,, ;,,;,,,,,,, ,, ,,,,,,,,,,,,,,, ,,,,—,,,,;,, ;,,,,,; ,,,,,,,,,,,,,,,,,;, 〔,,,,;,,,,〕,,,, ,,, ,,,,,, ,,,,, ,,, ,, ,,, ,,,,;,,,, ,,,,, ,, ,,,,,,,,(,,,，,,,,,,,,,,,,,,,,,,,，,,,),,,,,;,,,,,, ,,,,,,,,,,, ,,, ,,, ,,,,,, ,,,,,,,;,,,, ,,;,,,,,, ,, , ,,(,,,,,,,,,(, ,,,,,,,,,,,,,，,,),,;,,,,,; ,,,,,,,,,,, ,,,,;,, ,, ,,, ,,,,;,, ,, ;,,;,,,,,,, ,;,,,,,, ,, ,,, ,,,,,,, ,,,,;,, ,, ;,,,,,;,,,,,,,,,,, ,, ,,, ,,,, ,, ,,, ,,,,,,,, ,, ,,, ;,,,,,,,,;,,,, ,,,,,, ,, ,,,,,,, ,,,,,;, ,,,,,,,,,,,,,,,,,, ,,,,( 〔,,,,,,,〕,,, ,,,, ,,,, ,,,,,,,, ,,,,,,, ,, , ,,,,,,:,,,, ,,,,,,,,, ,,,,,(,,,, ,,, ,,,,)，,,,,,,;,,,,，,,,,;,, ,,,,,(, ,,,,,)，,,,,,,;,,,,，,,,,,,,,,(,, ,,,,,)，,,,,,,;,,,,，,,, ,,,,,(,,, ,,,,,)， ,,,, ,,,, ,,,,,,, ,,,,,,,,,,;,,,,，,,,,,,,,,，,,, ,,,,,(,,，,,, ,,,,,)(,,,,,,;,,,,,,,,,,,;,,，,,,，,,，,, ,,,，,,(,,,,,,,,,,,,,,, ,, ,,,,,,;,,,,,,, ,,,,, ,, ,,,,,，,,, ;,,;,,,,,,,,, ,,,,,,,,，, ,,, ,,,,,,,,, ;,,;,,,,,,,,, ,, ,(,,,,,,，,,,, ,,,,,,,, ,, ,,,;,,,,,,,, ,,,,;,,,,(,,,,，,,,,,, ,,, ,,,,, ,,,,,,,，,, ,,,,, ,,,;,,,,,,,,,, ,,,,;,,, ,,,, , ,,, ,,,,,,,,,,,,,,,,,(,，,,, ,,,,, ,,,,;,,, ,,, ,,,,,,,,(,，,,,,, ,,, ;,,,,,,,,,, ,,,,,,,,，,,，, ,,,,, ,, ,,,,,,,(,,,,,,, ,,,, ,,,,,, ,,,,,,,,, ,,,,,,,，,,,,,,, ,,,,,,,, ,,,,幔欤?,,,, ,,,,,,，,,,,,, ,,,, ,,,,,,, ,,,,, ,,,,,,, ;,,,,,,,,,，,,, ;,,, ,,,,,,,,,, ,, ,,,,,，,,,,,,,，,,,,,,,,, ,,,,,,;,,，,,,, ,,,,,,;,,，,,,, ,,,,,,,，,,,,,,,,,,,, ,,,, ,,,,,,;,,,, ,,,,,,(,,,,, ,,,,),,,, , ,,,,,,,,,,,,,, ,,,, ,,, ,,,，;,,;,,,,,, ,,,,, ,,,,,, ,,,,,(,,,,,,,,,, ,,,,,,，,,,,,)，,,,, ,,,,,,;,,,, ,,,,,,,,,,, ,,,,,,(,,,,,,)，,,,,, ,,,,,,,,,,,, ,,,,,,(,,,,,);,,,, ,,,,,,;,,,,,,,,,, ;,, ,,,, ,,,,,,,,,,,,,,,, ,, , ,,,, ,,,;,, ,,,,,,(,,—,,, ,,, ，,, ,,,, ,,,, ,, ,,,,;, ,,,, ,,,,,,;,,,, ,,,,,, ,,, ,,,,，,,, ,,,,，,,,,,, ,,,, ,,,,,,,,,, ,,, ,,,,,,, ,,,,,, ,, ,,,( 〔,,,,,,,〕 ,(,,,,,,, ,,,,;,,,,, ,, ,,,,,,,,,,,:,,, ,,,,, ,,,,, ,,,,,,(,(, , ,,,(, ,),,, ,,,,,,(,(,, ,,,(,,),,, ,，,,, ,,,,,(,(,, ,,,(,,),, ,,,,, ,,,,,, ;,,,,,,, ,,,,,, ,,,,,,,;,,, ,,,,,,,,;,;,, ,,, ;,, ,,;,,,,, ,,, ,,,,, ,,,,,, ,,,,,(,(,, ,,,(, ,)，,,, ,,,, ,,, , ,,,,,(,(,, ,,,(, ,),,, ,，,,, ,,,,,(,(,, ,,,(,,);,,,,,,, ,,,,,, ,,,,,,,;,,, ,,,,,,,,;,;,, ,,, ,,,, , ,,,,, ,, ,,,,, ,,,,,, ,,,,(,,(,,, ,,, 士,(,,，,,(, , ,,,(,,),,, ,,,,,,,,, ,,, ,,,,,,,,,，,,, ,,,,, ,, ,,,,, ,,,,,(,,(,, ,,,(,,，,,(,, ,,,(,,);,,,,,,, ,,,, ,,,,,,,;,,, ,,,,,,,,;,(,(,,,,,,,,, ,,,,,,,:,, ,,,,,,,,，,, ,,,,,,,,,,,,,,,,,,, ,,,;,,,,,, ,,,,, ,,,;,,,,,,,,, ,,, ;,,,,(,,;,,,,,, ,,,, ,,, ,,,,(,,士,,,(, ,岬,，,,,,, ,,,,,,,,, ,,,,;,,;,,,,,,,,;,,, ;,,,,(,,;,,,,,, ,,,,，, ,,,,, ,,, ,,, ,，,,, ,,,,, ;,,,,,,,;,,,,,,,,,, ,,,, ,,,(,, ,,,,,(,,，,, ,(,, ,,,,(,,，,,, ,,,,, ,,, , ,,,,, ,,, ,,, ,，,,,,,,,, ,,,, ,,,,,,,;,,, ,,,,,,,,;,(,,,(,,(，,,,,,,,,,,;,,,,,,,, ,,,,,, ,,,,;,,;,,,,,,, ,;,,,,,, ,, ,,,,,, ,,,,,,,,,,, ,, ,,, ;,,,,,,,,，,,, ,,,,,,,, ,,,,,,,, ,,;,,,,,,,, ,, ;,,,,,,,,;”,,(,,,,,),,;,,,,,,，,,,,,, ,,,,,,,,,, ,,;,,,,,, ,, ,,,,,,,,, ,,,,,,,,, ,, ;,,,,,; 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,,,,,,,,,, ,,,,,, ,,;,,,，,,,,)等多种因素诱导的心肌细胞肥大，,,,通路与丝裂素活化蛋白激酶(,,,,,,,,,;,,,,,,, ,,,,,,, ,,,,,,,，,,,,)及蛋白激酶,(,,,,,,, ,,,,,, ,，,,,)信号途径可能存在相互联系，,,,的活化依赖胞内,,,，浓度的持续升高，,,, ，，短时间刺激心肌细胞并不引起心肌细胞,,,活化，较长时问的刺激爿弓，起心肌细胞,,,活性增加，,,,活化还受蛋白激酶磷酸化的调节，,,, ,，刺激心肌细胞,,, ,,,,的表达显著增加，,,, ,,,,本身的表达受,,,，信号及,,,,级联反应的调控。〔,,,,,,的研究提示，,,,对,,,，的独特反应性可能使其能选择性转导肥大信号。与其它,,,，敏感酶,，口,,,和,,,,,相反，,,,和,,,,,可被简短、高幅度的,,,，脉冲快速、瞬时地活化;而,,,对这种,,,，脉冲不敏感。不同的是,,,的活化及由之导致的,,,,核转位需要持续、低幅度的,,,，升高。,,,, ,,〔,,,等研究发现，睾酮调节心肌细胞钙瞬变和收缩反应，去势大鼠心肌内的钙离子动员降低，钙瞬变的衰减变慢，肌浆网 的,,,，,,,酶活性和,,，,,,,，交换体的活性降低，睾酮替代可以提高心肌细胞的钙离子动员，从而增加心肌的收缩反应。睾酮可以通过雄に厥芴逡 鹣赴 诟评胱由 撸 せ罡频魃窬 姿崦福 鹦募》蚀蟆灸耍省?现在的研究已经证实，钙调神经磷酸酶参与了多种刺激因素诱导的心肌肥大〔,,，,,,，心血管疾病的发生具有性别差异，对刺激因素的反应性亦不完全相同，雄激素在心肌肥大的发生过程中具有重要作用，(,,,但是钙调神经磷酸酶是否参与 ,雄激素诱导的心肌肥大反应,雌激素抑制心肌肥大的作用，是否也影响钙调神经磷酸酶呢,本实验对此问题进行初步研究，并探讨雌激素对雄激素诱导的心肌肥大的作用及机制。,(,材料和方法,(,(,实验动物本实验采用清洁级六月龄雌性,,,,,,,,(,,,,,,种系大鼠，体重,,,(,士,,(,,由广东医学院动物实验中心提供。,(,(,器材与主要试剂 双氢睾酮，,,,,,,,,,,,,,,,,,, ，,,(,,) , ,,,雌二醇，, ,,, ,,,,,,,,, ,,,,, ,,(,,,试剂盒(两步法) ,,,,,,, ,,,提取试剂，,,,,,,, 江苏碧云天 ,,,, 江苏碧云天 ,,, ,,,抗体 武汉博士德 武汉博士德 ,? ,,,,染色试剂盒 ,,,显色试剂盒 武汉博士德 溴化乙锭 江苏碧云天 琼脂糖 西班牙 无水乙醇 广州化学试剂公司 甲醛 广州化学试剂公司 氯仿 广州化学试剂公司 异丙醇 广州化学试剂公司 溴芬蓝 南京凯基 苯甲青,, 南京凯基 万分之一天平 上海天平仪器厂 ,,,仪 ,,,,,,, ,,，德国 ,,(,(,实验方法.