淋球菌培养

淋球菌培养 关键是标本采集正确，保温保湿及时送检，及时接种(30min内)，培养基应孵热后再接种;再则培养基质量也很关键----在我的实验室里24小时内淋球菌就能长到1-2mm大小，阳性率也高，只要涂片能看到的，几乎都能培养出来。一般采用T-H培养基或GC培养基(OXOID产品，有配套添加剂)，我室采用的是本实验室研制的专用培养基，阳性率很高。 另外，对于鉴定其实也很简单，首先该菌生长较慢，营养要求高，需要在5%CO2环境下才能生长良好----这是区别于其他奈瑟菌的前提。接下来是作氧化酶+、触酶+，其他生化反应采用酶法进行，可用非发酵菌用的糖类生化管:葡萄糖、麦芽糖、乳糖、蔗糖、果糖，其他须作硝还、DNA试验;采用大量菌苔浓厚接种于糖类生化管上层，并用无菌液体石蜡封住面，其他两项也采用浓厚接种的，4~6h观察结果。判读时，糖类生化管下层作对照，上黄下绿为阳性，上下无差别或差别很小者为阴性。硝还要加偶氮试剂(甲、乙)，生成红色沉淀为阳性;不显色者加锌粉后变红的为阴性，仍为无色者为硝还及亚硝还均为阳性。DNase需用盐酸倾注，菌落周围有透明环的为阳性。 淋球菌生化结果:葡萄糖+、麦芽糖—、乳糖—、蔗糖—、果糖—、硝还—、DNA—; 药敏采用添加生长促进剂的GC培养基，应选用的药物有青霉素、四环素、环丙沙星、大观霉素、头孢呋新、头孢曲松、阿齐霉素等;在5%CO2环境下培养24h后读取结果。 还有，只有培养法才是金标准方法，也只有培养法才能获得药敏结果，尤其对PPNG这样多重耐药的淋球菌意义更大 在糖类生化管表面加液体石蜡的目的是因为淋病奈瑟菌是以发酵形式利用糖类，而在氧气存在时发酵代谢要受到抑制，加入石蜡则可隔离氧气，使得细菌的发酵产酸现象更为明显，便于观察。 再则，之所以要用非发酵菌的生化管，是因为其配方中糖类与蛋白胨的比例为1:0.2，细菌分解蛋白胨产碱较少，不足以影响代谢糖类时的产酸;还因为培养基中加入了少量琼脂可使代谢时所产生的酸性物质能在局部聚积，使得颜色变化现象更为明显，如此便提高了生化管的灵敏度。 采用酶法，无须让细菌在生化管培养基中生长，因为我们大量接种的细菌细胞中的已经含有足以让生化培养基发生明显变化所需的酶类物质。故而也无须担心培养基中营养不足，不能提供细菌生长所需。在4~6h内就可观察结果了。 采用奈瑟菌生化编码管对脑膜炎奈瑟菌在内的其他奈瑟菌是可行的，因为其基础培养基营养就比较丰富，并且当中已经添加兔血清，只要质控过关就可用。但淋球菌由于营养要求太高，在该生化管培养基中生长还是不好，反应不明显，还是不推荐用于淋球菌。 对于奈瑟菌生化编码管，由于是采用传统方法，需要细菌在当中生长到一定时间，一定数量才能产生变化，故而和接种其他培养基一样，需要给细菌提供生长必要的气体环境，所以培养基表面不能加石蜡。 采用酶法做淋球菌的鉴定没有大的问题,关键是三点需要掌握: 1.大量接种(直接将菌苔用接种针挑起接种到培养基中,要求见到肉眼明显可见的稠厚),仔细搅动使菌苔与培养基混合均匀; 2.必须使用非发酵菌用的糖分解生化反应培养基配方,指示剂一般可用安德烈或者溴麝香草酚蓝. 3.接种时将菌苔接种在上1/3处,下层作为对照;接种完成后需在培养基上层覆盖液体石 蜡.