奶牛乳房炎防治技术

奶牛乳房炎防治技术 《奶牛乳房炎防治技术指南(试行)》的通知 作者:佚名 来源:本站原创 文章点击数: 33 附件3: 乳汁体细胞计数法 推荐使用体细胞计数仪进行乳汁体细胞计数。 体细胞计数法有直接计数法和间接计数法。直接计数法中简便易行的方法是直接用显微镜进行体细胞计数(SCC)，间接计数法就是后面提到的CMT。法。 l主要试剂和材料 美蓝染色液:美蓝乙醇饱和溶液30mL((美蓝2g，95,乙醇100mL)，10,氢氧化钠溶液0.1mL，蒸馏水100mL，将上列溶液混合摇匀，过滤后备用。二甲苯、95,乙醇。生物显微镜、载玻片、l0μL。微量加样器(或移液枪)等。 2操作方法 2.1涂片制备 涂布:充分摇匀新鲜乳样，用l0μL微量加样器吸取中部乳汁l0μL， 2或用接种环蘸取等量的乳汁，将乳样滴于玻片一端中侧，仔细涂布成约lcm。面积的乳膜(为便于操作，可在玻片下垫衬一张硬纸板，纸板上用毛笔划数 2个面积为lcm的方格透视)。 干燥、脱脂、固定:涂好乳膜的玻片于37?温箱中干燥，然后用二甲苯脱脂5min，再置95,乙醇中固定5,10min。 染色:玻片干燥后，用美蓝染色液染色5min。水洗，再用95,乙醇脱色数分钟，水洗干燥后镜检。 镜检及计数:在生物显微镜油镜下观察(最好用l0×目镜，其视野直径要求为0.016)，计数100个视野内的细胞数，然后用下式计算:SCC=100xN 2,Лr 222 视野面积Лr=3.1416×(0.016,2)。=0.0002cm， 显微镜系数N=I,0.0002×100=500,000 SCC=系数×每个视野的细胞平均数(即细胞总数?100):细胞数,mL乳。 3判定标准 随着国际和国内乳品行业的接轨，国内标准也在提高，一般以每毫升牛 奶中含20万个细胞为亚临床乳房炎的临界值(+);超过该值为阳性，低于该值则正常。 附件4: 加州乳房炎检测法(CMT) CMT是加州乳房炎试验的简称，即首先在美国加利福尼亚州使用的一种乳房炎检测试验。它是通过间接测定乳中体细胞数(SCC)来诊断隐性乳房炎的方法。其原理是在表面活性物质和碱性药物作用下，乳中体细胞被破坏，释放出DNA，进一步作用，使乳汁产生沉淀或形成凝胶。体细胞数越多，产生的沉淀或凝胶也越多，从而间接诊断乳房炎和炎症的程度。该法是国际通用的隐性乳房炎诊断方法，其特点是简便、快速。我国研制出了类似的方法如BMT(北京奶牛研究所)、SMT(上海奶牛研究所)、HMT(黑龙江省兽医科学研究所)，以及LMT(中国农科院兰州兽医研究所) 等。 1试剂和方法 CMT检测中用到的试剂和方法如下:十二烷基磺酸钠30g溶解于1000mL蒸馏水，用2M的氢氧化钠调节PH等于6.4，加入溴甲酚紫0.1g，即成CMT检验液，取乳房炎诊断盘1只，滴加被检乳2mL，诊断液2mL，缓缓作同心圆状摆。市售成品CMT诊断试剂或者其他方法的成品试剂，按照说明操作。 2判定标准:可以参考表l。 表1 CMT法的判定方法及标准 体细胞数 反应判定 被检乳 反应状态 (万,毫 升) 0 混合物呈液体状，倾斜检验盘时，流动流畅，无 — , 阴性 凝块 20 20 混合物呈液体状，盘底有微量沉淀物，摇动时消? 可疑 , 失 50 盘底出现少量黏性沉淀物，非全部形成凝胶状， 50 + 摇动时，沉淀物散布于盘底，有一定的黏性 弱阳性 ,80 全部呈凝胶状，有一定黏性，回转时向心集中， 80 ++ 不易散开 阳性 ,500 混合物大部分或全部形成明显的胶状沉淀物，黏 稠，几乎完全黏附与盘底，旋转摇动时，沉淀集 +++ >500 强阳性 于中心，难以散开