B病毒抗原片在猴B病毒抗体检测中的应用研究 - 天津市实验动物管理

B病毒抗原片在猴B病毒抗体检测中的应用研究 - 天津市实验动物管理 B病毒抗原片在猴B病毒抗体检测中的应用研究 田克恭 遇秀玲 蔺会云 韦毅 饶军华 吴娜 军事医学科学院实验动物中心 北京丰台区东大街20号 100071 [摘要] 目的 建立B病毒玻片免疫酶法,EIA,～并与HSV-1玻片免疫酶 法,EIA ,及美国生产的B病毒DIA dot试剂盒进行比较。结果 BV EIA法的 阳性检出率比HSV-1 EIA法提高18.10%～比BV DIA dot法提高7.90 %～达到国 外同类产品的水平。结论 建议在临床上推广应用B病毒抗原片。 [关键词] B病毒; 抗体检测 Application of B Virus Antigen in the Detection of B Virus Antibodies on Rhesus Monkeys TIAN Kegong YU Xiuling LIN Huiyun WEI Yi RAO Junhua WU Na (Laboratory Animal Center, Academy of Military Medical Sciences) Enzyme immunoassay (EIA) for detection of B virus Abstract Objective antibodies in rhesus monkey sera was developed using B virus (BV) antigen. Results The positive rate in BV EIA (45.07%) was much higher than in HSV-1 EIA (26.97%) and in BV DIA dot(30.40%). Conclusion The higher sensitivity of BV EIA make it suitable for routine use in the clinical detection of B virus antibodies in rhesus monkeys. [Key words] B virus; Antibody detection 实验猕猴是医学科学研究中非常重要的实验动物，在我国有丰富的自然资 源。近年来，全国各地相继建立了多所猕猴繁育场，每年有大量的猕猴出口到欧 美、日本等国家。为此，国内学者开展了大量的有关猕猴群中B病毒的流行病 学调查和检测方法的研究工作，证实无论是野生猕猴资源丰富的云南、广西、贵 州、广东、福建、河南等地区，还是自繁猴较多的北京、上海等地区，虽然因地 域不同，猴群的生活方式和饲养管理方式不同，感染率10%~60%不等，但普遍 [1][2]存在B病毒感染是不争的事实。文献报道，猴B病毒、人单纯疱疹病毒 (HSV-1、HSV-2)、SA8病毒(见于非洲绿猴和狒狒的一种疱疹病毒)具有密切 的抗原关系。因此，在检测方法上，由于我国没有B病毒种毒，从国外引进又 十分困难，只好以HSV-1为抗原，建立了检测B病毒相关抗体的玻片免疫酶法 [3]。目前我国实验猴群中B病毒抗体检测主要采用这种方法，对净化猴群起到了 [4]一定的积极作用，但由于是交叉抗原关系，与国外试剂的检测结果，常有差异 [5]。而国外多采用B病毒作抗原检测猴群中的 B病毒抗体，并已有商品化的试 [6]剂盒供应。本实验旨在用从我国猴群分离鉴定的B病毒147株 基金项目:本课题为北京市科委实验动物专项基金资助项目(953990700,954982600) 作者简介:田克恭，男(1964-)，副研究员，研究方向:动物病毒学。现供职单位:农业部 兽医诊断中心 (BV147)，建立B病毒玻片免疫酶法(EIA)，并与HSV-1 EIA法和美国生产的B病毒DIA dot试剂盒进行比较。现报道如下: 1 材料与方法 1( 1材料 1(1(1细胞培养与病毒株 Vero细胞由中国药品生物制品检定所提供; BV147株由本实验室分离保存。 2 BV抗原片 本研究组在P3实验室制备。 1(1( 1(1(3 HSV-1抗原片 购自中国医学科学院实验动物研究所。 1(1(4 BV DIA dot试剂盒 购自美国Viratest International公司。 1(1(5 HRP-SPA 工作浓度1:150，本实验室保存。 1(1(6 被检猴血清 我国广西、广东、北京等地送检的猴血清，共计1967 头份。 1( 2方法 [3]1(2(1 HSV-1 EIA法 参照吴小闲等(1989)方法进行,血清稀释度为1:10。 1(2(2 BV DIA dot试剂盒操作及判定 按试剂盒说明的要求进行。 1(2(3 BV EIA法 参照HSV-1 EIA法略做修改后进行。血清稀释度为1:10。 2 结果 2(1 BV EIA法与HSV-1 EIA法比较结果(见表1)。从表1可以看出，经HSV-1 EIA法检测为阳性的353份样品，经BV EIA法检测全部为阳性，而经HSV-1检测为阴性的956份样品，经BV EIA法检测，719份为阴性，237份为阳性。与HSV-1 EIA法相比，BV EIA法检测阳性率为45.07%，HSV-1 EIA法检测阳性率为26.97 %，BV EIA法的阳性检出率提高 18.10%。两者的符合率为81.89%。 表1 BV EIA法与HSV-1 EIA法检测结果比较 Tab.1 Results of BV Antibodies in Monkey Sera by BV EIA and HSV-1 EIA BV EIA 合计 阳性数(No of Positive) 阴性数(No of Negative) HSV-1 阳性数(No of Positive) 353 0 353 EIA 阴性数(No of Negative) 237 719 956 合 计 590 719 1309 2(2 BV EIA法与BV DIA dot试剂盒比较结果(见表2)。从表2可以看出， 经BV EIA法检测为阳性的252份样品，经BV DIA dot法检测，198份为 阳性，54份为阴性;经BV EIA法检测为阴性的406份样品，经BV DIA dot法检测，404份为阴性，2份为阳性。BV EIA法检测阳性率为 38.30%， BV DIA dot 法检测阳性率为30.40%，与BV DIA dot法相比，BV EIA法 的阳性检出率提高7.90%，二者的符合率为91.49%。 表2 BV EIA法与BV DIA dot法检测结果比较 Tab.2 Results of BV Antibodies in Monkey Sera by BV EIA and BV DIA dot BV EIA 合计 阳性数(No of Positive) 阴性数(No of Negative) BV 阳性数(No of Positive) 198 2 200 DIA dot 阴性数(No of Negative) 54 404 458 合 计 252 406 658 3 讨论 3(1 由于B病毒对人的危害性极大，因此有关实验用猴B病毒检测工作越来 [7][3]越受到重视。在我国自1989年吴小闲等人研制成功HSV-1 EIA法以来，国 内一直采用此方法检测猕猴群中的B病毒抗体。由于HSV-1与B病毒在抗原性 上存在差异，因此出口到国外的阴性猴常被国外检测为B病毒抗体阳性，造成 不必要的经济损失。本实验用从我国猕猴群分离的BV147做种毒，建立了BV EIA 法，并与HSV-1 EIA法和美国生产的BV DIA dot试剂盒进行实验比对，结果BV EIA法的阳性检出率明显高于HSV-1 EIA法，达到了国外同类产品的水平，建议 在临床上推广使用。 参考文献 1 田克恭. 我国猕猴群中B病毒流行病学调查与检测方法研究进展. 中国人兽 共患病杂志，1999，15(5):251-252 2 蔺会云，遇秀玲，田克恭. 猴B病毒研究进展，实验动物科学与管理，2000， 17:38-44 3 吴小闲，蒋虹，曲立荣，等:恒河猴B病毒相关抗体检测方法的比较，病毒 学杂志，1989，1:80 4 田克恭，贾锐胜，李俊梅，等. 两种抗原不同方法检测猕猴B病毒抗体的初 步探讨，实验动物科学与管理，1998，15:26-27 5 Hebetling RL, Kalter SS. A dot-immunobinding assay (DIA) on nitrocellose with psoralen inactivated Herpesvirus simiae (B virus). Lab Anim Sci, 1987, 37:304-308 6 Paul MB, Susan LM, Charles BH, et al. B virus (Herpesvirus simiae) and human infection. Arch Dermetol, 1989, 125:1247-1248 7 Andrew WA, Charles BH, Bradfords, et al. Human Infection with B virus following a needlestick injury. Reviews of Infectious Diseases. 1991, 13:288-291 8 Holmes GP, Chapman LE, Stewart JA, et al. Guideline for the prevention and treatment of B virus infections in exposed persons. Clinical. Infectious Diseases. 1995, 20: 421-439 9 Ward JA, Hilliard JK. B virus specific pathogen free breeding colonies of macaques: issues, surveillance and results in 1992. Lab Anim Sci 1994, 44: 222-228