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大学本科模板 哈尔滨商业大学毕业设计论文 学 生 姓 名 指 导 教 师 专 业 学 院 2010年月日 Graduation Project Thesis Harbin University of Commerce A fine wine physiological and biochemical characteristics of yeast Student Zhang Yin Supervisor Liang Jinzhong Specialty Bioengineering School Food Engineering 2010-06-10 毕业设计论文任务书 姓名 学院 班级 专业 毕业设计论文题目 立题目的和意义 了解合成培养基半合成培养基和天然培养基的配制 学习和掌握麦芽汁培养基马铃薯葡萄糖培养基豆芽汁葡萄糖培养基和察氏培养基的配制方法鉴别酵母菌的实验方法2008年葡萄酒产量已达6983万千升工业总产值达19168亿元葡萄酒进口连续多年保持高速增长态势海关统计数据明2008年全国瓶装进口葡萄酒总额达到264亿美元比2007年新增8000万美元增长率为4348虽然我国是葡萄酒消费大国但是我国葡萄酒产业发展仍然存在一些问题如国产葡萄酒缺乏高端市场竞争力高端市场长期被进口酒占领国产葡萄酒同质化较严重酿酒葡萄产量和质量落后等因此采取一定的促进我国葡萄酒产业的健康发展成为当下之急如借鉴葡萄酒发达国家的先进管理经验通过采取有效的质量控制措施提高国内葡萄酒的品质根据国内葡萄酒行业现状发展具有中国特色的葡萄酒文化 此次实验主要采用液态培养的方法探讨酵母的希望通过本试验提高酵母菌的产量并将其应用于大规模生产中提高工厂效益 技术要求与工作 时间 指导教师要求 签字 年 月 日 教研室主任意见 签字 年 月 日 院长意见 签字 年 月 日 毕业设计论文审阅评语 一指导教师评语 指导教师签字 年 月 日 毕业设计论文审阅评语 二评阅人评语 评阅人签字 年 月 日 毕业设计论文答辩评语及成绩 三答辩委员会评语 四毕业设计论文 年 月 日 摘 要 本实验主要采用液态培养的方法探讨酵母的 [1]KH2PO4为 NH42SO4为07 SO4为0对酵母的生长具有显著的影响作用希望通过本试验能够提高酵母菌的产量并将其应用于大规模生产中提高工厂效益 酵母 Abstract In this study the main advantage of cheap malt juice as wine yeast nutrients using liquid solid and other training methods the best of wine yeast culture conditions physiological and biochemical characteristics [1] Be the most optimal cell culture conditions malt extract medium yeast extract 10 KH2PO4 to 05 NH4 2SO4 to 07 MgSO4 was 003 PH 55 the growth of wine yeast were significant The influence of sugar solubility of 3 temperature 28 ? 10 inoculum incubated in 180rmp speed can get the imum cell number However due to limited experimental conditions can only be carried out using a simple laboratory test drugs Hope this trial can be concluded for the actual production the increase in the production of wine yeast wine production and quality and applied to mass production improve plant efficiency Key Wordswine yeast physiological and biochemical characteristics optimizatio 目 录 摘 要 I Abstract II 1 绪 论 5 11 葡萄酒酵母的概述 5 com 葡萄酒酵母的来源 5 com酵母的特性与应用 5 12 国内外葡萄酒酵母菌的研究现状及发展趋势 7 com 国内葡萄酒母菌发酵生产葡萄酒的现状 7 com 国外葡萄酒酵母菌发酵生产葡萄酒的现状 7 13 课题来源 8 14 本课题研究的目的 8 15 本课题研究的意义 8 16 本课题的研究内容 8 2 实 验 内 容 9 21 实验材料 9 com主要试剂 9 com验仪器 9 22 实验方法 10 com酵母的活化 10 com1 培养基的制备与菌体活化培养 10 com 葡萄酒酵母的纯化与分离培养 11 com酵母生理生化参数的测定 11 com酵母培养条件的优化 14 com培养基的优化 17 3 结 果 与 讨 论 18 31 葡萄酵母酵母的形态 18 32 葡萄酒酵母菌生理生化特性 19 com 葡萄酒酵母碳源的利用 19 com酵母糖发酵实验结果 19 com酵母对氮源的利用 20 com 葡萄酒酵母生长曲线的测定 20 33 葡萄酒酵母菌生长条件优化 21 com 培养基pH对葡萄酒酵母生长的影响 21 com 培养温度对葡萄酒酵母生长的影响 22 com 渗透压对葡萄酒酵母生长的影响 22 com 溶氧量对葡萄酒酵母生长的影响 23 com对葡萄酒酵母生长的影响 23 34 麦芽汁培养基的优化 23 com 酵母膏的添加量对葡萄酒酵母生长的影响 23 com KH2PO4的添加量对葡萄酒酵母生长的影响 24 comNH42SO4的添加量对葡萄酒酵母生长的影响 24 com MgSO4的添加量对葡萄酒酵母生长的影响 25 com 麦芽汁培养基优化的具体结果 25 结 论 26 参 考 文 献 27 致 谢 28 1 绪 论 11 的概述 com 在自然界中天然存在有氧时可进行有氧呼吸且生长旺盛在无氧时进行发酵作用且生长速度较慢适宜pH4-5的酸性环境生长温度在25-30少数种类可耐45-47高温耐糖少数种类能在高浓度糖浆 如蜂蜜 中生长耐受酒精的能力较高[2] UX Qb 本次试验的葡萄酒酵母菌种来源是经过诱变育种后筛选并且在生产中经历生产条件考验的优良菌种它对发酵设备工艺条件等具备了很好的针对性非常适合于工业生产[4] com酵母的特性与应用 酵母菌是单细胞真菌菌体为卵圆形圆形或圆柱形无鞭毛不运动细胞构造具有真菌细胞的一般特征细胞壁不含纤维素由葡聚糖甘露聚糖等多糖为主还含有蛋白质脂类及几丁质等组分酵母菌菌落圆形大而厚多呈乳白色少数红色呈油脂状或皱皮状在液体培养基中均匀混浊有的形成沉淀有的浮于表面形成菌膜[5] 酵母菌以出芽繁殖为其特征少数可行分裂繁殖或产生孢子有性繁殖过程及方式与其他真菌一样十分复杂如酿酒酵母子囊孢子萌发形成单倍体营养细胞以出芽繁殖两个单倍体营养细胞接合形成双倍体营养细胞也以出芽繁殖在一定条件下双倍体营养细胞转变为子囊母细胞然后形成子囊[3]在形成子囊孢子之前有减数分裂子囊孢子一般为1-4个酵母菌的子囊孢子有圆形帽形针形肾形等随种 类而有不同[6]酵母菌可以利用多种糖类进行同化或发酵一般可利用葡萄糖蔗糖麦芽糖等少数种类能利用五碳糖及淀粉酵母菌在有氧时可进行有氧呼吸且生长旺盛在无氧时进行发酵作用且生长速度较慢适宜pH4-5的酸性环境不同菌株的生长范围为pH2-80生长温度大多在25-30少数种类可耐45-47高温一般耐糖少数种类能在高浓度糖浆 如蜂蜜 中生长工业用酵母菌耐受酒精的能力较高一般发酵液中乙醇含量可达10-12[8] UX Qb 常见的重要酵母菌各属如下[9] 酵母菌属 Saccharomyces 细胞圆形椭圆形腊肠形发酵力强主要产物为乙醇及CO2主要的种有酿酒酵母 Saccharomyes cerevisiae 为酿造酒及酒精生产的主要菌种还用于制造面包及医药工业葡萄汁酵母 Saccharomyces uvarum 细胞椭圆形或长形它能将棉子糖全部发酵还可食用及用于医药工业裂殖酵母属 Schizosaccharomyces 细胞椭圆形圆柱形由营养细胞接合形成子囊有发酵能力代表种为粟酒裂殖酵母 Schizosaccharomyces pombe 最早分离自非洲粟米酒能使菊芋发酵产生酒精汉逊酵母属 Hansenula 细胞圆形椭圆形腊肠形多边芽殖营养细胞有单倍体或二倍体发酵或不发酵可产生乙酸乙脂同化硝酸盐此菌能利用酒精为碳源在饮料表面形成皮膜为酒类酿造的有害菌代表种为异常汉逊酵母 Hansenula anomala 因能产生乙酸乙脂有时可用于食品的增香毕赤酵母属 Pichia 细胞形状多样多边出芽能形成假菌丝常有油滴表面光滑发酵或不发酵不同化硝酸盐能利用正癸烷及十六烷可发酵石油以生产单细胞蛋白在酿酒业中为有害菌代表种为粉状毕赤酵母 Pichia farinosa 假丝酵母属 Candida 细胞圆形卵形或长形多边芽殖有些种有发酵能力有些种能氧化碳氢化合物用以生产单细胞蛋白供食用或作饲料少数菌能致病代表种有产朊假丝酵母 Candida utilis 能利用工农业废液生产单细胞蛋白热带假丝酵母 Candida tropicalis 能利用石油生产饲料酵母球拟酵母属 Torulopsis 细胞球形卵形或长圆形无假菌丝多边芽殖有发酵力能将葡萄糖转化为多元醇为生产甘油的重要菌种利用石油生产饲料酵母代表种为白色球拟酵母 Torulopsis candida ]jZ iW1Ca 红酵母属 Rhodotorula 细胞圆形卵形或长形多边芽殖少数形成假菌丝无发酵能力但能同化某些糖类有的能产生大量脂肪对烃类有弱氧化力常污染食品少数为致病菌代表种为粘红酵母 Rhodotorula glutinis 12 国内外酵母菌研究现状及发com 国内母菌生产现状 2008年葡萄酒产量已达6983万千升工业总产值达19168亿元葡萄酒进口连续多年保持高速增长态势海关统计数据表明2008年全国瓶装进口葡萄酒总额达到264亿美元比2007年新增8000万美元增长率为4348虽然我国是葡萄酒消费大国但是我国葡萄酒产业发展仍然存在一些问题如国产葡萄酒缺乏高端市场竞争力高端市场长期被进口酒占领国产葡萄酒同质化较严重酿酒葡萄产量和质量落后等 通过引进消化国外先进酿酒工艺 合资建设葡萄酒厂产业结构的调整葡萄品种与国际接轨等全面提高我国葡萄酒的酿制水平众多葡萄酒企业已采用了具有国际先进水平的气囊压榨浸提低温旋转发酵人工酵母急速冷冻全自动葡萄酒灌装生产线等生产技术及装备现阶段我国葡萄酒企业的酿酒工艺技术水平与世界同步从原辅材料工艺技术到生产设备达到国际先进水平随着人们生活水平的提高葡萄酒文化的深入传播和葡萄酒消费市场的积极培育 产品高端化成为葡萄酒行业的重要趋势酒庄酒冰酒年份酒分级酒树龄酒产地酒品种酒等概念化的高端酒在市场上占据的份额越来越重要直接拉升了吨酒均价2006 年吨酒均价已经 达到26 万元较2004 年上涨幅度超过40 目前这一趋势仍在延续[11] com 国外酵母菌生产现状2008 年全球葡萄酒年产量2765 万t葡萄种植面积780 万km2世界上三大葡萄酒生产国为意大利4968 万t法国4365 万t西班牙这3 个国家葡萄酒产量占全球总产量的50 2008 年全球葡萄酒年销售量2430 万t年销售总产值达1 千亿美元人均葡萄酒消费量为45 L较1990年下降1 L达到近年来的最低点人均葡萄酒消费量下降的主要原因是由于作为葡萄酒主要消费市场的欧盟国家生活方式的改变尤其是法国意大利这些国家均有着以葡萄酒佐餐的传统随着欧洲人生活节奏加快软饮料果汁瓶装水逐渐在某些场合取代了葡萄酒的重要位置尤其是年轻消费者已不再青睐葡萄酒[17]1980 年法国和意大利人的葡萄酒消费量占到全球消费总量的45 但2008 年降至24 欧盟人均消费量从1995 年的30 L降至2008 年的28 L美国是世界增长最快的葡萄酒消费国之一2008 年其人均葡萄酒消费量为9 L法国意大利分别为51 L 和44 L梵蒂冈是全球人均葡萄酒消费量最高的国家为62 L[11] 13 课题来源 项目 14 本课题研究的目的此次实验主要采用液态培养的方法探讨酵母的希望通过本试验能够提高酵母菌的产量并将其应用于大规模生产中提高工厂效益 了解合成培养基半合成培养基和天然培养基的配制原理 学习和掌握麦芽汁培养基马铃薯葡萄糖培养基豆芽汁葡萄糖培养基和察氏培养基的配制方法鉴别酵母菌的实验方法15 本课题研究的意义 16 本课题的研究内容 本课题以检测其生理生化特性 探讨其最佳培养发酵条件优化麦芽汁培养基然后利用以优化的麦芽汁培养基在葡萄酒酵母菌最优的生长条件下进行液体培养获得菌体细胞然后在真空冷冻干燥器中冷冻干燥获得酵母菌冻干粉 2 实 验 内 容 21 实com主要试剂 com1菌种 酵母 主要试剂 表 2-1 主 要 试 剂试验材料 规格 产地 葡萄糖 生化试剂 天津市化学试剂一厂 麦芽糖 生化试剂 中国科学院上海生物化学研究所 蛋白胨 生化试剂 天津化学试剂批发厂 磷酸二氢钾 分析纯 天津市天大化工实验厂 磷酸氢二钾 分析纯 天津市天大化工实验厂 硫酸镁 分析纯 天津市天大化工实验厂 氯化钠 分析纯 天津市天大化工实验厂 盐酸 分析纯 天津四通化工厂 丙酮 分析纯 天津四通化工厂 硫酸钾 分析纯 天津市科密欧化学试剂开发中心 分析纯 天津市科密欧化学试剂开发中心 分析纯 北京化工厂 分析纯 天津市赢达稀贵化学试剂厂 分析纯 天津市基准化学试剂有限公司 22主要实验仪器 表 2-2 实 验 仪 器实验设备与仪器 型号 产地 离心机 电子天平 MD200-3型 上海天平仪器厂 糖度计 RHB-32ATC 泰斯特仪器有限公司 低温冷冻离心机 Sigma 216K 德国 SIGMA 电热恒温培养箱 DHG-9053A 南京电器三厂 立式压力蒸汽灭菌锅 LDZX-50KB 上海申 安医疗器械厂 XB-K-25 玉环县求精医用仪器厂制造 显微镜 Motic-BA 210 麦克奥迪实业集团有限公司福建 22 实验方法通过前人的实验可以简单的确定酵母菌条件 [10]除此之外我酵母优化微生物过程是微生物有效利用生长代谢活动来获取的过程水平不仅取决于生产菌种自身的性能使菌种的能力充分表达出来对于特定的微生物而言就要研究其对环境条件如培养基培养温度pH以及氧的等需求菌种处于产物合成的环境中菌的代谢向需要的方向进行达到最佳的水平我们在酵母培养条件优化过程中对培养基的pH培养温度等影响因素进行了初步 [15] com 培养基的制备与菌体活化培养 葡萄酒酵母培养基制备 将培养基分装干净的三角瓶内在121 ?MPa 灭菌15 min后在无菌操作台上凉至培养 h放置于冰箱中备用[5] com [5] com酵母生理生化参数的测定 com1葡萄酒酵母菌糖发酵试验 1 实验原理酵母菌在厌氧条件下能分解糖类产生各种有机酸气体和其它产物酵母菌种类不同对各种糖类的发酵能力各异因此这是鉴别酵母菌种类的一项重要依据酸的产生可根据培养基中溴甲酚紫pH68-52由紫变黄或溴麝香草酚蓝pH76-60由蓝变黄指标剂颜色的改变来确定产气可由发酵管气泡的产生予以证实糖发酵基础液16溴甲酚紫葡萄糖乳糖糖和麦芽糖酵母斜面菌种实验内容糖发酵基础液配制好后按培养液容量的1加入糖分装于杜氏发酵管中培养液的高度约为4-5厘米再在试管内加入倒置的小玻管约04×20,25厘米一支每种糖设三个重复管121?高压灭菌15分钟将啤酒酵母分别接入上述各发酵管中置30?下 培养48-72小时另以不接种者作对照如产酸则培养液pH值下降而变黄色如产气则必先产酸并在杜氏小管顶端出现气泡结果记录以 表示产酸0表示产气，表示产酸产气,表示无变化碱表示产碱[7]com2葡萄酒酵母菌碳源同化试验 1 实验原理碳是酵母菌细胞的重要组成成分约占酵母菌体重量的50为酵母菌生命活动提供所需的能量和组成其结构的物质酵母菌对各种碳源的利用因种类不同而异这是酵母菌分类鉴定的一个重要依据无碳基础培养基酵母斜面菌种05的葡萄糖蔗糖乳糖糖麦芽糖溶液实验内容液体试管法每管加无碳基础培养基5毫升加被测试的某种碳源并以葡萄糖作为对照接入酒酵母28?下培养1-2周观察结果生长图谱法无碳培养基内加入2的水洗琼脂融化后冷却至45-50?到至平板接种新鲜培养的啤酒酵母于1毫升无菌生理盐水内搅匀后倒入上述未凝平板内摇匀待凝皿底用特种蜡笔写上被测试各种碳源的标记用不锈钢匙按标记加入相应的米粒大小的碳源并以葡萄糖作对照28?下培养24-48小时后观察结果结果观察液体试管中是否形成醭环岛等生长图谱中测量菌落大小说明对碳源的利用情况[7]com3葡萄酒酵母菌氮源同化试验 1 实验原理酵母菌蛋白酶不分泌于菌体外故酵母菌对复杂的蛋白质不能利用酵母菌对一些较简单的含氮化合物的利用程度也不一致 无氮基础培养基酵母斜面菌05的蛋白胨硫酸铵硝酸铵和尿素溶液实验内容液体试管法方法同以被测试的氮源代替碳源不加任何氮源作空白对照生长图谱法方法同以被测试的氮源代替碳源不加任何氮化物作空白对照结果观察液体试管中溶液pH值的变化生长图谱中测量形成菌落的大小说明对各种氮源的利用情况com4葡萄酒酵母菌生长曲线测定 1 实验原理酵母菌属于单细胞真核型微生物把一定数量的酵母菌接种于的 液体培养基中在适宜的温度下培养时它的生长过程具有一定的规律性在其生长过程中定时取样测定酵母菌细胞数量然后以酵母菌细胞数的对数作纵坐标生长时间作横坐标绘制所得的曲线叫生长曲线此生长曲线大致可划分为四个阶段调整期对数生长期稳定期和衰退期[6]酵母菌增殖培养基实验内容将培养24小时左右的酒酵母斜面菌种用无菌水洗下菌苔以3000转分的速率离心得菌体将酵母菌体沉淀物再用无菌水洗2-3次后制备酒酵母菌悬液细胞数量约10左右毫升测数备用取上述菌悬液1毫升于盛有清亮的酵母增殖培养液的试管中25?下培养以此为起始时间记录起始溶液的细胞数并在培养1246891011121416202224小时时分别取样检测酵母菌细胞数量酵母菌细胞数量的检测方法血球计数板计数法此法是先将以上定时取出的被检样品作一系列稀释后使菌落数约为105-106个毫升取一滴稀释液滴于血球计数板内在显微镜下直接计算细胞总数[5]绘制生长曲线以酵母菌细胞数的对数作为纵坐标以培养时间作为横坐标画出酵母菌的生长曲线并分析酵母菌群体的生长规律com酵母培养条件的优化 com1培养基pH酵母的影响实验原理培养基酵母斜面菌实验内容培养基结com2培养温度酵母的影响实验原理培养基酵母斜面菌实验内容培养基结com3渗透压对葡萄酒酵母的影响实验原理培养基酵母斜面菌实验内容结com4溶氧量对葡萄酒酵母的影响实验原理培养基酵母斜面菌实验内容培养基结com5接种量对葡萄酒酵母的影响实验原理培养基酵母斜面菌实验内容培养基自然pH?rpm培养h b结果观察rpm转速的摇床中培养24h后观察结果根据菌液的浑浊度以分度光度计测各个试管中菌液的OD值记录实验结果 com培养基 需要优化的麦芽汁培养基 麦芽汁 10,15 Br 酵母膏 15 KH2PO4 05 NH42SO4 05 MgSO4 005 PH 60,65 在115?灭菌15min [5] 3 结 果 与 31 葡萄酵母酵母的形态 酵母Rhodotorula sp细胞多为[9]常形成假丝但不发达也不典型其形成的菌落与细菌相似但较之大而厚菌落表面湿润粘稠易被挑起菌落呈乳白色[4] 图3-1 显微镜下所观察到的葡萄酒酵母菌与菌落形态 32 葡萄酒com 葡萄酒酵母碳源的利用 通过对葡萄酒酵母的碳源同化实验可得到以下结果 表3-1葡萄酒酵母的碳源同化实验 实验碳源 葡萄糖 麦芽糖 蔗糖乳糖葡萄糖蔗糖乳糖糖蔗com酵母糖发酵实验结果 通过对葡萄酒酵母的糖发酵试验可得到以下结果 表3-2葡萄酒酵母的糖发酵试验 葡萄糖 0 酸 乳糖 碱 无明显变化 蔗糖 酸 无明显变化 麦芽糖 酸 无明显变化 注 酸表示产酸0表示产气，表示产酸产气,表示无变化碱表示产碱com酵母对氮源的利用 通过对葡萄酒酵母的氮源同化实验可得到以下结果 表3-3 氮源 蛋白胨 硝酸铵 硫酸铵 空白 尿素 菌落大小 08,1mm 07,08mm 04,05mm 01,02mm 不生长 注[5] 此培养基适用于测定酵母菌对氮源的利用加被测氮源 05 由结果可知葡萄酒酵母对各种氮源的利用率表现为蛋白胨,硝酸铵,硫酸铵,尿素 液体培养基培养五天PH的变化 初始PH为 60 蛋白胨 51 硝酸铵 44 硫酸铵 41 尿素 60 空白 46 com 葡萄酒酵母生长曲线的测定 以酵母菌细胞数的对数作为纵坐标以培养时间作为横坐标酵母菌的生长曲线并分析酵母菌群体的生长规律图3-2葡萄酒酵母群生长变化曲线 从图中可以看出菌体在生长过程中随着时间的延长菌体量不断增长有一个最高值然后菌体开始自溶随着时间的增加菌体量开始减少菌体在h h进入衰亡期这可能是由于培养基己被耗尽细胞无法继续生长根据实验结果我们选择原始菌株种子培养时间为h-14h33 葡萄酒com 培养基pH酵母的影响 我们主要考察了pH对的影响pH下生长状况如表3-4所示 表3- pH对的影响 注以pH为单因素研究对的影响其他条件为?培养箱中培养h[5] 从表中可以看出最佳pH是-60之间而当pH偏碱性后菌体生能力开始下降菌 体生能力开始下降我们选择pH-60作为的最佳pH com 培养温度对酵母的影响表3-对的影响20? 28? 37? 45? OD值 0681 1415 0114 0063 葡萄酵母菌 注以为单因素研究对的影响其他条件为[5] 从表中可以看出葡萄酒酵母生长com 渗透压对葡萄酒酵母生长的影响 表3-对的影响不同的糖溶度 3 10 20 40 OD值 0(367 0253 0173 酿酒酵母 2 不同的NaCl溶度 05 25 5 10 OD值 0215 0126 0054 0092 酿酒酵母 注以为单因素研究对的影响其他条件为[5] 从表中可以看出葡萄酒酵母在糖浓度为3NaCl浓度为05时生长最佳表3-对的影响注以为单因素研究对的影响表3-对的影响注以接种量为单因素研究对菌体获取的影响其他条件为自然pH接种龄h装量50mL250mL三角烧瓶?rpm培养h[5] 随着接种量的增加液在逐渐增加当接种量达到10时菌体干重达到最大但是接种量太大因此我们选择10作为的最合适接种量34 麦芽汁培养基的优化 com 酵母膏的添加量对葡萄酒酵母生长的影响 分别添加010510152的酵母膏在其它条件不变的情况下对葡萄酒酵母的生长情况进行考察结果如表3-3所示 表3-9 酵母膏 01 05 1 15 2 菌体数 55106 25107 34107 27107 20107 注以为单因素研究对菌体获取的影响其他条件为pH调为55接种 龄h装量50mL250mL三角烧瓶rpm培养h com KH2PO4的添加量对葡萄酒酵母生长的影响 表3-10 KH2PO4的添加量优化 KH2PO4 01 03 05 07 09 菌体OD值 0324 0289 0450 0348 0410 注以为单因素研究对菌体获取的影响其他条件为pH调为55接种龄h装量50mL250mL三角烧瓶rpm培养hcomNH42SO4的添加量对葡萄酒酵母生长的影响 表3-11 NH42SO4的添加量优化 NH42SO4 0(1 0(3 0(5 0(7 0(9 菌体数 1(6107 1(8107 4(1107 4(2107 4(2107 注以NH42SO4为单因素研究对菌体获取的影响其他条件为pH调为55接种龄h装量50mL250mL三角烧瓶rpm培养hNH42SO4NH42com MgSO4的添加量对葡萄酒酵母生长的影响 表3-12 MgSO4的添加量优化 MgSO4 001 003 005 007 009 菌体OD值 0341 0442 0403 0360 0390 注以SO4添加量为单因素研究对菌体获取的影响其他条件为pH调为55接种龄h装量50mL250mL三角烧瓶rpm培养hSO4添加量为003时所获得的菌体数为最高在经济效益上也最划算所以把待优化的培养集中的MgSO4的添加量调整为003 com 麦芽汁培养基优化的具体结果 经过优化的麦芽汁培养基如下 麦芽汁 10,15 Br 酵母膏 10 KH2PO4 05 NH42SO4 07 MgSO4 003 PH 55,60 在115?灭菌15min 在麦芽汁培养基优化后再用优化的培养基在适应的条件下上述实验条件的结论对葡萄酒酵母进行摇床液态培养获得大量的酵母细胞然后离心获得酵母细胞最后将获得的酵母细胞冷冻干燥制成冻干粉 结 论 从上面的结果分析来看KH2PO4为 NH42SO4为07 SO4为0对酵母的生长具有显著的影响作用酵母Rhodotorula sp细胞多为[9]常形成假丝但不发达也不典型其形成的菌落与细菌相似但较之大而厚菌落表面湿润粘稠易被挑起菌落呈乳白色 此次实验主要通过实验设计以所产的含量进行比较得出上述结论虽然这只是试验阶段但是相信在实际生产应用中还是有一定开发前景相信会有利于大规模生产降低产品成本 1 Tao H Marion G P Hermie J M et al Colonic Fermentation May Play a Role in Lactose Intolerance in Humans [J] American Society for Nutrition 2006 136 58,63 2 高产菌株的培育及其产酶研究[D](河北 3 顾国贤 酿酒工艺学第二版[M] 中国轻工业出版社 4 诸葛健 李华钟 微生物学第一二版[M] 科学出版社2009 5 钱存柔 黄仪秀 微生物学实验教程[M] 北京大学出版社2008 6 俞俊棠唐孝宣主编生物工艺学 上册 华东化工学院出版社1992 17( 7 8徐福建陈洪章李佐虎固态发酵工程研究进展[J]生物工程进展2002 22 1 4448 9 张宏忠 微生物分类学[M]复旦大学出版社 10 巴尼特 JA 著 Barnett JA 著 -- 胡瑞卿 译酵母菌的特征与鉴定手册青岛海洋大学出版社 11 12 Watari J Takata Y Ogawa Met al Yeast199410211,225 13 Dengis P BJInst Brew 1997103 4 257,262 14 Bony M Thines-sempoux d Barre Pet al JBacteriol1997179 15 4929,4936 15 贾盘兴蔡金科马德钦等微生物遗传学实验技术[M]科学出版社1992407,408 16 Stratford M Assinder SYeast19917559,574 17 大连轻工业学院等酿造酒工艺学[M]北京中国转出版社1992224,261 18 Dengis P b Nelissen L R Rouxhet P GAppl Environ Microbiol199561 2 718,728 19 王恭堂葡萄酒的酿造与欣赏BDC[M]北京中国轻工业出版社2000 20 翟衡酿酒葡萄栽培及加工技术BDC[M]北京中国农业出版社2001 致 谢 经过论文设计已经作为一个本科生的毕业论文由于经验的匮乏难免有许多考虑不周全的地方如果没有导师的督促指导以及一起工作的同学们的支持想要完成这个设计是难以想象的 在老师的亲切关怀和耐心的指导他严肃的科学态度严谨的治学精神精益求精的工作作风深深地感染和激励着我从课题的选择到项目的最终完成老师都始终给予我细心的指导和不懈的支持老师的专业水平他的治学严谨和科学研究的精神是我永远学习的榜样并将积极影响我今后的学习和工作在此谨向老师致以诚挚的谢意和崇高的敬意 在论文即将完成之际我的心情无法平静从开始进入课题到论文的顺利完成有多少可敬的师长同学朋友给了我无言的帮助在这里请接受我诚挚的谢意最后我还要感谢培养我长大含辛茹苦的父母谢谢你们 最后我还要感谢和我的母校四年来对我的栽培 哈尔滨商业大学毕业设计论文 II 哈尔滨商业大学毕业设计论文 7