酶的竞争性抑制作用,实验报告

酶的竞争性抑制作用,实验 实验五琥珀酸脱氢酶的作用及其竞争性抑制 实验五 琥珀酸脱氢酶的作用及其竞争性抑制 【实验目的】 1、掌握竞争性抑制概念及作用机理。 2、了解在无氧情况下观察脱氢酶作用的简单方法。 【实验原理】 存在于心肌、骨骼肌、肝脏等组织中琥珀酸脱氨酸，能使琥珀酸脱氢而成延胡索酸，脱下氢可使甲烯蓝退色，还原为甲稀白。反应如下: 草酸、丙二酸等在结构上与琥珀酸相似，可与琥珀酸竞争与琥珀酸脱氢酸的活性中心结合。若酶已与丙二酸等结合，则不能再与琥珀酸结合而使之脱氢，产生抑制作用，且抑制程度取决于琥珀酸与抑制剂在反应体系中浓度的相对比例，所以这种抑制是竞争性抑制。本实验通过观察在由不同浓度的琥珀酸与丙二酸组成的反应体系中使等量甲稀蓝退色反应时间，从而验证丙二酸对琥珀酸的竞争性抑制作用。 【实验用品】 1、试剂 (1)0.10mol/L0.1mol/LNa2HPO481ml。 (2)0.093mol/L琥珀酸钠溶液:取琥珀酸钠1.5g溶于100ml蒸馏水中。 (3)0.10mol/L丙二酸钠溶液:取丙二酸钠1.5g溶于100ml蒸馏水中。 (4)0.02%甲稀蓝溶液。 (5)液体石蜡。 2、器具 (1)0.10mol/L磷酸盐缓冲液(pH7.4):0.1mol/L NaH2PO419ml 加0.1mol/LNa2HPO481ml。 (2)0.93mol/L琥珀酸钠溶液:取琥珀酸钠1.5g溶于100ml蒸馏水中。 (3)0.10mol/L丙二酸钠溶液:取丙二酸钠1.5g溶于100ml蒸馏水中。 (4)0.02%甲烯蓝溶液。 (5)液体石蜡。 2、器具 (1)恒温水浴箱(2)研钵或组织匀浆机 【实验操作】 磷酸盐缓冲液(pH7.4):0.1mol/L NaH2PO419ml 加 新鲜免肝立即剪碎，放于组织匀浆机中研碎，加入pH7.4的0.10mol/L磷酸盐缓冲液， 将各管溶液混匀后加一薄层液体石蜡后静置(此时不可摇动!)，观察各管中的颜色变化，并记录各管颜色完全变化的时间。 【思考】 1、抑制的分类及其特点, 2、本实验中液体石蜡起什么作用? 3、各管中的反应体系配好后为什么不能再摇动? 4、制备肝浆时用磷酸缓冲液，可否换用蒸馏水，为什么, 篇二:实验十六、丙二酸对琥珀酸脱氢酶的竞争性抑制作用 实验十六:丙二酸对琥珀酸脱氢酶的竞争性抑制作用 【实验名称】:丙二酸对琥珀酸脱氢酶的竞争性抑制作用 09救援一班 第三大组 李岚宇 2009222336 室温:25? (一)实验目的:1、学习和掌握竞争性抑制作用的特点。 2、观察丙二酸对琥珀酸脱氢酶的竞争性抑制作用。 (二)实验原理:化学结构与酶作用的底物结构相似的物质，可与底物竞争结合酶的活性中心，使酶的活性降低甚至丧失，这种抑制作用称为竞争性抑制作用。琥珀酸脱氢酶是机体内参与三羧酸循环的一种重要的脱氢酶，其辅基为FAD，如心肌中的琥珀酸脱氢酶在缺氧的情况下，可使琥珀酸脱氢生成延胡索酸，脱下之氢可将蓝色的甲烯蓝还原成无色的甲烯白。这样，便可以显示琥珀酸脱氢酶的作用。 丙二酸的化学结构与琥珀酸相似，它能与琥珀酸竞争而和琥珀酸脱氢酶结合。若琥珀酸脱氢酶已与丙二酸结合，则不能再催化琥珀酸脱氢，这种现象称为竞争性抑制。如相对地增加琥珀酸的浓度，则可减轻丙二酸的抑制作用。 (三)实验材料与仪器: 1器材 大白鼠、手术剪、镊子、磁盘、匀浆器、量筒、烧杯、纱布、滤纸、试管及试管架、恒温水箱、电热水浴锅 2试剂 0.2mol/L琥珀酸溶液、0.02mol/L琥珀酸溶液、0.2mol/L丙二酸溶液、0.02mol/L丙二酸溶液、1/15mol/L磷酸缓冲液、0.02,甲烯蓝、液体石蜡。 (四)实验步骤: 1、酶提取液的制备:去大白鼠的肝脏、心脏、肾脏，用冷水洗3次，加入1/15mol/L磷酸缓冲液pH 在7.4。在匀浆器中进行匀浆，然后用纱布过滤，用干净的烧杯收集过滤的备用。 2、取试管6支，编号，在按图步骤操作， 各管溶液立即混均匀，沿试管壁加入液体石蜡，约0.5cm，各管置于37?的水浴中保温，切勿摇动试管，随时观察比较各试管颜色的变化，记录褪色时间。 (五)实验结果记录: 表1 (六)实验讨论: 1、酶提取液中有琥珀酸脱氢酶活性，表1所示，在试管1中没有抑制剂，但琥珀酸依然能脱氢，使得甲烯蓝反应得甲烯白。 2、各管的褪色有明显的时间差别，褪色时间随[I]/[S]逐渐增大，而增大。 3、丙二酸对琥珀酸脱氢酶抑制作用的类型是竞争性抑制，其特点:最大反应速率Vmax不变，米氏常数Km增大，竞争性抑制可以通过增大底物浓度来减轻抑制程度。 4、本实验中5号、6号试管的作用是做对照，5号试管和1号试管做对照，说明酶提取液中有琥珀酸脱氢酶的存在，6号试管中的酶提取液在100?的水浴加热煮沸过，所以琥珀酸脱氢酶是失活的。 【】 : 1、酶提取液的制备应操作迅速，以防止酶活性降低。 2、加入液体石蜡的作用是隔绝空气，以避免空气中的氧气对实验造成影响，因此加石蜡时试管壁要倾斜，注意不要产生气泡。3、37?水浴保温过程中，不能摇动试管，避免空气中的氧气接触反应溶液，使得还原型的甲烯白重新氧化成蓝色。 4.、37?水浴保温过程中，要注意随时观察各试管的褪色情况。 5、实验结果结束后，一定要洗干净试管内的液体石蜡。2010年10月9号 篇三:实验十 琥珀酸脱氢酶的作用及其竞争性抑制 实验十 琥珀酸脱氢酶的作用及其竞争性抑制 一、实验目的 1、掌握竞争性抑制概念及作用机理。 2、了解在无氧情况下观察脱氢酶作用的简单方法。 二、实验原理 存在于心肌、骨骼肌、肝脏等组织中琥珀酸脱氨酸，能使琥珀酸脱氢而成延胡索酸，脱 下氢可使甲烯蓝退色，还原为甲稀白。反应如下: 草酸、丙二酸等在结构上与琥珀酸相似，可与琥珀酸竞争与琥珀酸脱氢酸的活性中心结合。若酶已与丙二酸等结合，则不能再与琥珀酸结合而使之脱氢，产生抑制作用，且抑制程度取决于琥珀酸与抑制剂在反应体系中浓度的相对比例，所以这种抑制是竞争性抑制。 本实验通过观察在由不同浓度的琥珀酸与丙二酸组成的反应体系中使等量甲稀蓝退色反应时间，从而验证丙二酸对琥珀酸的竞争性抑制作用。这样，便可以显示琥珀酸脱氢酶的作用。 三、实验仪器、材料和试剂 1、仪器:恒温水浴锅，研钵或组织匀浆机 2、材料和试剂 (1)新鲜兔肝 (2) 0.10mol/L磷酸盐缓冲液(pH7.4):0.1mol/L NaH2PO4 19 ml 加0.1mol/L Na2HPO4 81ml。 (3)0.093 mol/L琥珀酸钠溶液:取琥珀酸钠1.5g溶于100 ml蒸馏水中。 (4)0.10 mol/L丙二酸钠溶液:取丙二酸钠1.5g(转 载于:wWw.xIeLw.com 写 论文 网:酶的竞争性抑制作用,实验报告)溶于100 ml蒸馏水中。 (5)0.02%甲稀蓝溶液。 (6)液体石蜡。 四、实验操作 新鲜兔肝立即剪碎，放于组织匀浆机中研碎，加入pH7.4的0.10 mol/L磷酸盐缓冲液，制备成200 g/L的肝匀浆液备用。取五支试管分别编号，按下表配制反应体系: 将各管溶液混匀后加一薄层液体石蜡后静置(此时不可摇动!)，观察各管中的颜色变化，并记录各管颜色完全变化的时间。 思考题: 1、抑制的分类及其特点, 2、本实验中液体石蜡起什么作用? 本实验需在无氧条件下进行,可加一层液体石蜡以隔绝空气。 3、各管中的反应体系配好后为什么不能再摇动?4、制备肝浆时用磷酸缓冲液，可否换用蒸馏水，为什么,