“血栓心脉宁片”抗血栓形成药效学研究

“血栓心脉宁片”抗血栓形成药效学研究 “血栓心脉宁片”抗血栓形成药效学研究 摘 要 研究目的: 研究血栓心脉宁片对急性血瘀模型大鼠血液流变学和改善体外血栓形成的影响及其对模型大鼠血浆血栓素A(TXA)、前列环素(PGI)、一氧化氮(NO)、血222 管性血友病因子(vWF)、内皮素(ET-1)、血管内皮生长因子(VEGF)及血小板α颗粒蛋白酶(GMP-140)含量的影响。 研究方法: Wistar大鼠随机分为空白对照组、模型组、血栓心脉宁片低、中、高剂量组、步长脑心通胶囊阳性对照组。将大鼠分组给药后应用冰水-肾上腺素双刺激法建立大鼠急性血瘀模型，测定心脉宁片作用后模型大鼠血液流变学、体外血栓形成的影响及其对模型大鼠血浆血栓素A(TXA)、前列环素(PGI)、一氧化氮(NO)、222 血管性血友病因子(vWF)、内皮素(ET-1)、血管内皮生长因子(VEGF)及血小板α颗粒蛋白酶(GMP-140)含量的影响。 研究结果: 血栓心脉宁片高、中、低剂量组对急性血瘀大鼠全血黏度及血浆粘度均有明显的改善作用，且均有抑制其体外血栓形成的作用，以中剂量组效果最为明显，与步长脑心通胶囊具有相似的作用。血栓心脉宁低、中、高剂量组均可显著降低急性血瘀大鼠血浆TXA、、GMP-140、vWF、ET-1及VEGF含量，而使血浆PGI、22NO含量明显升高，以中剂量组效果最为明显。 结论: 血栓心脉宁片具有改善急性血瘀大鼠血液流变学的作用;具有抑制体外血栓形成的作用;通过降低血瘀大鼠血浆TXA、、GMP-140、vWF、ET-1及VEGF2 含量及增加血浆PGI、NO含量，在分子水平上具有抑制血栓形成的作用。 2 实验动物与材料 1. 动 物 Wistar大鼠60只，雌、雄各半，体重200g-220g，由吉林大学基础医学院试验动物中心提供，质量合格证号:SCXK-(吉)2009-0001。 2(实验药品与试剂 血栓心脉宁片，由吉林华康药业股份有限公司提供，国药准字Z20030145，产品批号:041101; 步长脑心通胶囊，陕西步长制药有限公司，国药准字Z2025001，产品批号:110764; 盐酸肾上腺素注射液，上海禾丰制药有限公司出品，批号:110302; 大鼠血栓素A2(TXA2)ELISA检测试剂盒，购自北京鼎国生物技术有限公司的R&D Systems 分装试剂盒，批号:20110701A; 大鼠前列环素(PGI2)ELISA检测试剂盒，购自北京鼎国生物技术有限责任公司的R&D Systems 分装试剂盒，批号:20110701A; 大鼠一氧化氮(NO)ELISA检测试剂盒，购自北京鼎国生物技术有限责任公司的R&D Systems 分装试剂盒，批号:20110701A; 大鼠内皮素(ET-1) ELISA试剂盒，购自北京鼎国生物技术有限责任公司的R&D Systems 分装试剂盒，批号:20110701A; 大鼠血浆α颗粒膜蛋白(GMP-140)ELISA检测试剂盒，购自北京鼎国生物技术有限责任公司的R&D Systems 分装试剂盒，批号:20110701A; 大鼠血管性血友病因子(vWF) ELISA 检测试剂盒，购自北京鼎国生物技术有限责任公司的R&D Systems 分装试剂盒，批号:20110701A; 大鼠血管内皮生长因子(VEGF) ELISA 检测试剂盒，购自北京鼎国生物技术有限责任公司的R&D Systems 分装试剂盒，批号:20110701A。 3. 仪 器 LT电子天平(深圳市力源检测仪器有限公司);TDL80-2B飞鸽牌离心机(哈尔滨东联电子技术开发有限公司);KES-900B型血流变检测仪(无锡康尔生仪器公司);体外血栓形成仪(北京科临易检信息技术有限公司);DHG-9053A型电热恒温干燥箱(上海医用恒温设备厂);瑞士帝肯TECAN SUNRISE 酶标仪。 1 研究方法 1. 动物分组与给药 取血栓心脉宁片，配成浓度为3.5%(g/v)、7.0%(g/v)、14.0%(g/v)高、中、低3个剂量的供试药液;步长脑心通胶囊，配成浓度为8.0%(g/v)的阳性对照药液;肾上腺素，配成浓度为0.1%的溶液;水合氯醛，配成浓度为10%的溶液。 自试验动物中心引入Wistar大鼠后，适应性饲养一周，室温22?-25?，湿度40%-60%。将大鼠按体重随机分为6组，每组10只，雌、雄各组均分，分组为:正常对照组、血瘀模型组、血栓心脉宁片高剂量组1.40 g/kg、中剂量组0.70 g/kg、低剂量组0.35 g/kg，步长脑心通颗粒阳性对照组0.80 g/kg。 试验过程中正常对照组正常饲养，血瘀模型组给水10 mL/kg，各给药组均给予10 mL/kg供试药液。每日上午9时灌胃给药，连续给药7天。 2. 急性血瘀模型的制备 第6天灌胃给药后30 min，除正常对照组外，其余各组动物均皮下注射0.1%肾上腺素0.8 ml/kg，2 h后于冰水中浸泡5 min，再过2h后给予同剂量的肾上腺素以复制急性血瘀模型。 3. 血液流变学指标的测定 大鼠复制急性血瘀模型后，禁食不禁水12 h，第7天末次给药30 min后，腹腔注射10%水合氯醛3 ml/kg 麻醉，腹主动脉取血，置于肝素抗凝管中。取其中全血1 ml置于血流变检测仪，测定全血低切(20/s)、中切(60/s)及高切(150/s)黏度，余下全血离心10 min(3000 r/min)，取上层血浆 1 ml测定血浆黏度(140/s)。 4. 体外血栓形成试验 大鼠复制急性血瘀模型后，禁食不禁水12 h，第7天末次给药30 min后，大鼠腹腔注射10% 水合氯醛3 ml/kg 麻醉，腹主动脉取血1.8 ml，注入硅胶管中，迅速密封，置于体外血栓形成仪上旋转15min，倾出血栓，在滤纸上吸干残血，测量血栓长度及血栓湿重，再将血栓置于烘箱50 ?烘干后称量其干重。 5. 血浆TXA含量的测定 2 大鼠复制急性血瘀模型后，禁食不禁水12h，第7天末次给药30 min后，腹腔注射10%水合氯醛3 ml/kg 麻醉，腹主动脉取血，置于肝素抗凝管中。3000 r/min离心30 min，吸取上层血浆按照大鼠血栓素A2(TXA) ELISA检测试剂盒说明2 2 进行操作，测定大鼠血浆TXA含量。 2 6. 血浆PGI含量的测定 2 大鼠复制急性血瘀模型后，禁食不禁水12h，第7天末次给药30 min后，腹腔注射10%水合氯醛3 ml/kg 麻醉，腹主动脉取血，置于肝素抗凝管中。3000 r/min离心30 min，吸取上层血浆按照大鼠前列环素(PGI)ELISA检测试剂盒说明书进2 行操作，测定大鼠血浆PGI含量。 2 7. 血浆NO含量的测定 大鼠复制急性血瘀模型后，禁食不禁水12h，第7天末次给药30 min后，腹腔注射10%水合氯醛3 ml/kg 麻醉，腹主动脉取血，置于肝素抗凝管中。3000 r/min离心30 min，吸取上层血浆按照大鼠一氧化氮(NO)ELISA检测试剂盒说明书进行操作，测定大鼠血浆NO含量。 8. 血浆ET-1含量的测定 大鼠复制急性血瘀模型后，禁食不禁水12h，第7天末次给药30 min后，腹腔注射10%水合氯醛3 ml/kg 麻醉，腹主动脉取血，置于肝素抗凝管中。3000 r/min离心30 min，吸取上层血浆按照大鼠内皮素(ET-1) ELISA试剂盒说明书进行操作，测定大鼠血浆ET-1含量。 9. 血浆GMP-140含量的测定 大鼠复制急性血瘀模型后，禁食不禁水12h，第7天末次给药30 min后，腹腔注射10%水合氯醛3 ml/kg 麻醉，腹主动脉取血，置于肝素抗凝管中。3000 r/min离心30 min，吸取上层血浆按照大鼠血浆α颗粒膜蛋白(GMP-140)ELISA检测试剂盒说明书进行操作，测定大鼠血浆GMP-140含量。 10. 血浆vWF含量的测定 大鼠复制急性血瘀模型后，禁食不禁水12h，第7天末次给药30 min后，腹腔注射10%水合氯醛3 ml/kg 麻醉，腹主动脉取血，置于肝素抗凝管中。3000 r/min离心30 min，吸取上层血浆按照大鼠血管性血友病因子(vWF) ELISA 检测试剂盒说明书进行操作，测定大鼠血浆vWF含量。 11. 血浆VEGF含量的测定 大鼠复制急性血瘀模型后，禁食不禁水12h，第7天末次给药30 min后，腹腔注射10%水合氯醛3 ml/kg 麻醉，腹主动脉取血，置于肝素抗凝管中。3000 r/min 3 离心30 min，吸取上层血浆按照大鼠血管内皮生长因子(VEGF) ELISA 检测试剂盒说明书进行操作，测定大鼠血浆VEGF含量。 研究结果 1. 对急性血瘀模型血液流变学的影响 血液流变学主要是通过观测血液的粘度、粘弹性、流动、凝集等流变性和红细胞的变形及聚集、血小板的聚集等指标来研究血液和血管的宏观与微观流变性的规律。血液流变性质的异常，将会引起机体血液循环障碍，是促血栓形成的高危因素。通过对血液流变性的检测，对某些疾病的发生、发展、转归以及预后提出了可靠的依据。血栓心脉宁片及步长脑心通颗粒对急性血瘀大鼠的影响见1。基于血液流变学对机体血液和血管流变性的间接反映，本实验结果表明: 急性血瘀模型组与正常对照组比较，其全血低、中、高切黏度及血浆黏度均明显增加(P<0.05，P<0.01)，表明大鼠急性血瘀模型造模成功。 与急性血瘀模型组比较，血栓心脉宁片中剂量组0.70 g/kg和高剂量组1.40 g/kg组可使血瘀模型大鼠全血低、中、高切粘度及血浆黏度显著降低(P<0.01)，低剂量组0.35 g/kg可使血瘀模型大鼠全血低、中、高切粘度及血浆黏度明显降低(P<0.05)。表明血栓心脉宁片有明显改善急性血瘀模型大鼠的血液流变学作用。 与急性血瘀模型组比较，步长脑心通组0.80 g/kg可使急性血瘀模型大鼠全血低、中、高切粘度及血浆粘度显著降低(P<0.05，P<0.01) 表1 血栓心脉宁片对大鼠血液流变学的影响(?s，n=10) 剂量全血黏度(mPa/s) 血浆粘度组别 (mg/kg) (mPa/s)140/s 20/s 60/s 150/s 空白对照组 - 9.81?0.45** 5.55?0.27** 3.76?0.17 * 0.86?0.05** 血瘀模型组 - 10.45?0.39 6.00?0.30 4.07?0.22 1.22?0.18 350 10.08?0.54* 5.73?0.34* 3.87?0.18 * 0.93?0.04** 血栓心脉宁片 700 9.39?0.63** 5.33?0.42** 3.61?0.28** 0.83?0.06** 1400 9.56?0.44** 5.44?0.23** 3.75?0.13** 0.85?0.10** 步长脑心通组 800 9.65?0.57** 5.55?0.47 * 3.79?0.33 * 0.86?0.11** 与模型组相比 *P<0.05， **P < 0.01 4 2(对急性血瘀模型体外血栓形成的影响 血栓形成与心脑血管病、脉管炎及糖尿病等多种疾病密切相关。血栓形成实验是血液的流动性、粘滞性及凝固性等多种血液流变学因素的体现。体内血栓的形成是一个复杂的综合过程, 它与组织的出血、血管粥样斑块及硬化程度等有关, 与血小板的数量和活化程度、粘附聚集性有关, 也与纤维蛋白原等凝血因子的数量和质量有关。体内血栓形成难以清楚地观察到, 给血栓及抗血栓研究带来困难。为了研究血栓形成的机制, Chandler发明了一种体外血栓检测装置, 在以一定角速度旋转的血栓环(环状塑料圆管) 内注入一定量的未抗凝新鲜血液(近半环), 旋转一定时间后, 可在下弯月面附近形成血栓。这种体外人工形成的血栓经组织学研究证明, 同体内的动脉血栓有类似的组织结构。体外血栓形成实验是模拟体内血栓形成过程制备成模拟血栓, 通过测定体外血栓形成长度、血栓湿重和干重, 可借以推测在体血管内凝血形成血栓的可能程度, 对辅助与血栓形成有关的某些疾病的诊断、治疗、预防和药物研究有重要意义。 血栓心脉宁片及步长脑心通颗粒对急性血瘀大鼠体外血栓形成的影响见表2。结果表明: 与正常对照组比较，急性血瘀模型组的大鼠体外血栓形成长度、血栓湿重及血栓干重均明显增加(P<0.01)，说明大鼠急性血瘀模型造模成功。 与急性血瘀模型组比较，血栓心脉宁片高剂量组1.40 g/kg、中剂量组0.70 g/kg、低剂量组0.35 g/kg均可使血瘀模型大鼠血栓形成长度、血栓湿重及血栓干重显著降低(P<0.01)，表明血栓心脉宁片能明显抑制急性血瘀模型大鼠体外血栓的形成。 与急性血瘀模型组比较，步长脑心通组0.80 g/kg可使急性血瘀模型大鼠体外血栓形成长度、血栓湿重及血栓干重明显降低(P<0.01)。 表2 血栓心脉宁片对大鼠体外血栓形成的影响(?s，n=10) 组别 剂量 血栓长度(mm) 血栓湿重(mg) 血栓干重(mg) 空白对照组 - 13.42?1.45** 56.00?8.47** 14.42?1.36** 血瘀模型组 - 22.12?1.78 96.76?7.80 23.30?1.93 350mg/kg 17.22?0.58** 76.22?3.65** 18.32?0.54** 血栓心脉宁片 700mg/kg 13.22?0.24** 54.86?1.82** 14.34?0.32** 1400mg/kg 14.48?0.57** 60.98?1.40** 15.40?0.14** 阳性对照组 800mg/kg 13.85?0.45** 59.02?1.20** 14.98?0.35** 5 与模型组相比 *P<0.05， **P < 0.01 3. 对血浆TXA含量的影响 2 血栓素A2 (TXA)是细胞膜释放的花生四烯酸代谢的主要产物, TXA主要在22血小板生成, 可引起微血管收缩、血小板凝聚和血栓形成。正常生理状态下, 完整无损的血管内皮细胞具有抑制血小板在其表面粘附聚集和活化、抗血栓功能, 在循环血液中TXA的浓度对血管舒缩, 血小板聚集及血栓形成起着重要的调节2 作用。 血栓心脉宁片对急性血瘀模型大鼠血浆TXA2的影响见表3，结果表明: 与正常对照组比较，血瘀模型组大鼠血浆TXA含量明显增加(P<0.01)。2 与血瘀模型组比较，血栓心脉宁片低剂量组0.35g/kg、中剂量组0.7g/kg、高剂量组1.4g/kg可使血瘀模型大鼠血浆TXA含量显著降低(P<0.01)，其中中剂量组2 最为显著，步长脑心通胶囊组0.80 g/kg与中剂量组无差异，表明血栓心脉宁片有明显降低血瘀模型大鼠血浆TXA含量的作用，从而引起血管舒张，抗血小板2 凝聚，以达到抗血栓形成的作用。 表3 血栓心脉宁片对急性血瘀模型大鼠血浆TXA2的影响(?S，n=10) 组别 剂量(g/kg) TXA2(pg/ml) **正常对照组 - 59.7?19.3 血瘀模型组 - 86.7?14.9 *血栓心脉宁片 0.35 69.8?17.8 ** 0.7 29.6?18.1 ** 1.4 48.6?22.1 **阳性对照组 0.8 40.2?13.6 与模型组相比 *P<0.05， **P < 0.01 4. 对血浆PGI含量的影响 2 前列环素(PGI)是细胞膜释放的花生四烯酸代谢的主要产物, PGI主要在血22管壁生成,其作用主要是强力扩张微血管, 抗血小板凝聚, 防止血栓形成。 正常生理状态下, 完整无损的血管内皮细胞具有抑制血小板在其表面粘附聚集和活化、抗血栓功能，在循环血液中PGI 的含量对血管舒缩, 血小板聚集及血栓形2 成起着重要的调节作用。 血栓心脉宁片对急性血瘀模型大鼠血浆PGI的影响见表4，结果表明: 2 与正常对照组比较，血瘀模型组大鼠血浆PGI含量明显降低(P<0.01)。与2 血瘀模型组比较，血栓心脉宁片低剂量组0.35g/kg、中剂量组0.7g/kg、高剂量组 6 1.4g/kg可使血瘀模型大鼠PGI含量明显增加(P<0.05)，其中中剂量组最为显著，2 步长脑心通胶囊组0.80 g/kg与中剂量组无差异，表明血栓心脉宁片有明显增加血瘀模型大鼠血浆PGI含量的作用，从而通过扩张微血管, 抗血小板凝聚, 防止2 血栓形成。 表4 血栓心脉宁片对急性血瘀模型大鼠血浆PGI2的影响(?S，n=10) 组别 剂量(g/kg) PGI(pg/ml) 2 正常对照组 - 65.4?13.2 ** 血瘀模型组 - 31.3?4.3 血栓心脉宁片 0.35 37.4?6.6 * 0.7 46.2?3.5 ** 1.4 40.3?7.4 ** 阳性对照组 0.8 47.2?12.1 ** 与模型组相比 *P<0.05， **P < 0.01 对血浆NO含量的影响 5. 一氧化氮(NO)具有广泛的生物学效应, 是维持血管舒张的重要物质。在机体内一氧化氮是由血管内皮细胞NO 合成酶( NOS) 催化L-精氨酸和氧分子反应生成的，其主要作用是介导血管平滑肌舒张;抑制血管平滑肌的增殖，从而防止动脉硬化及动脉斑块的形成;抑制血小板的活化和聚集。有研究表明，内皮细胞产生NO降低时，血管壁易于被血小板粘附，并受血小板崩解所释放的物质损伤，最终导致血栓形成。 血栓心脉宁片对急性血瘀模型大鼠血浆NO的影响见表5，结果表明: 与正常组比较，血瘀模型组大鼠血浆NO含量明显减低(P<0.01)。与血瘀模型组比较，血栓心脉宁片低剂量组0.35g/kg、中剂量组0.7g/kg、高剂量组1.4g/kg可使急性血瘀模型大鼠血浆NO含量明显增加(P<0.05)，其中中剂量组最为显著，步长脑心通胶囊组0.80 g/kg与中剂量组无差异，表明血栓心脉宁片有明显增加血瘀模型大鼠血浆NO含量的作用，从而促进血管舒张，抑制血小板活化和聚集，防止血栓形成。 7 表5 血栓心脉宁片对急性血瘀模型大鼠血浆NO的影响(?S，n=10) 组别 剂量(g/kg) NO(umol/ml) 正常对照组 - 12.8?2.5 ** 血瘀模型组 - 6.7?1.4 血栓心脉宁片 0.35 7.9?1.0 * 0.7 11.3?1.1 ** 1.4 9.2?1.7 ** 阳性对照组 0.8 10.3?1.2 ** 与模型组相比 *P<0.05， **P < 0.01 6. 对血浆ET-1含量的影响 内皮素(ET-1) 是血管内皮细胞分泌的迄今所知作用最强、持续最久的缩血管活性多肽。具有强烈缩血管, 诱导血小板聚集和血栓形成作用而造成血管损害。在生理情况下，ET与血管内皮细胞舒张因子(EDRFs)二者相互制约维持动态平衡, 血管内皮细胞舒张因子可抵消ET-1的强缩血管作用, 控制机体的血压与局部血流。因此测定体内ET水平的变化对血栓形成有积极意义。 血栓心脉宁片对急性血瘀模型大鼠血浆ET-1的影响见表6，结果表明: 与正常组比较，血瘀模型组大鼠血浆ET-1含量明显增加(P<0.01)。与血瘀模型组比较，血栓心脉宁片低剂量组0.35g/kg、中剂量组0.7g/kg、高剂量组1.4g/kg可使急性血瘀模型大鼠血浆ET-1含量明显降低(P<0.01)。其中中剂量组最为显著，步长脑心通胶囊组0.80 g/kg与中剂量组无差异，表明血栓心脉宁片有明显降低血瘀模型大鼠血浆ET-1含量的作用，从而通过抑制血管收缩达到抗血栓形成的作用。 表6 血栓心脉宁片对急性血瘀模型大鼠血浆ET-1的影响(?S，n=10) 组别 剂量(g/kg) ET-1(pg/ml) 正常对照组 - 37.4?6.7 ** 血瘀模型组 - 51.3?6.7 血栓心脉宁片 0.35 36.2?6.3 ** 0.7 25.0?7.6 ** 1.4 31.9?6.0 ** 阳性对照组 0.8 28.5?7.3 ** 与模型组相比 *P<0.05， **P < 0.01 8 7. 对血浆GMP-140含量的影响 GMP-140 是血小板α颗粒膜蛋白，是一种分子量为14000 的粘附蛋白, 富含有半胱氨酸, 高度糖化的整合蛋白质。 GMP-140位于静止血小板颗粒膜上, 当血小板受刺激活化时随α颗粒内容物的释放而与质膜融合, 能持久存在于活化血小板质膜表面, 具有介导活化血小板或内皮细胞与多种不同类型白细胞相互粘附的功能。只有在活化的血小板表面表达,并可释放至血浆中。GMP-140 可促进单核细胞的识别, 清除活化的血小板并参与血小板的互相作用, 参与炎症与血栓形成，是目前最具特异性血小板活化的分子标志物, 血浆中GMP-140含量变化能反映体内循环系统血小板活化程度及血栓倾向。 血栓心脉宁片对急性血瘀模型大鼠血浆GMP-140的影响见表7，结果表明: 与正常组比较，血瘀模型组大鼠血浆血浆GMP-140含量明显增加(P<0.01)。与血瘀模型组比较，血栓心脉宁片低剂量组0.35g/kg、中剂量组0.7g/kg、高剂量组1.4g/kg可使急性血瘀模型大鼠血浆GMP-140含量明显减低(P<0.01)。其中中剂量组最为显著，步长脑心通胶囊组0.80 g/kg与中剂量组无差异，表明血栓心脉宁片有明显降低血瘀模型大鼠血浆GMP-140含量的作用，从而通过减少血小板活化而达到抗血栓作用。详见表7。 表7 血栓心脉宁片对急性血瘀模型大鼠血浆GMP-140的影响(?S，n=10) 组别 剂量(g/kg) GMP-140(ng/ml) 正常对照组 - 1.4?0.2 ** 血瘀模型组 - 2.4?0.5 血栓心脉宁片 0.35 1.6?0.5 ** 0.7 1.1?0.3 ** 1.4 1.6?0.4 ** 阳性对照组 0.8 0.7?0.3 ** 与模型组相比 *P<0.05， **P < 0.01 8. 对血浆vWF含量的影响 血管性血友病因子vWF是由血管内皮细胞和巨核细胞合成的一种糖蛋白, vWF为一种高分子蛋白质, 在血中含量为5,10nm/ L。在内皮细胞受到刺激时释放至血浆, VWF 可与胶原等结合而发生构形改变, 导致血小板粘附。血浆vWF升高可作为内皮细胞受损的标志。它可参于凝血促进血小板粘附, 诱发血栓形成。 9 血栓心脉宁片对急性血瘀模型大鼠血浆vWF的影响见表8，结果表明: 与正常组比较，血瘀模型组大鼠血浆血浆vWF含量明显增加(P<0.01)。与血瘀模型组比较，血栓心脉宁片低剂量组0.35g/kg、中剂量组0.7g/kg、高剂量组1.4g/kg可使急性血瘀模型大鼠血浆vWF含量明显降低(P<0.05)。其中中剂量组最为显著，步长脑心通胶囊组0.80 g/kg与中剂量组无差异，表明血栓心脉宁片有明显降低血瘀模型大鼠血浆vWF含量的作用，提示药物可减低血管内皮细胞损伤程度，抑制血小板粘附，从而防止血栓形成。 表8 血栓心脉宁片对急性血瘀模型大鼠血浆vWF的影响(?S，n=10) 组别 剂量(g/kg) vWF(pg/ml) 正常对照组 - 950?67 ** 血瘀模型组 - 1203?166 血栓心脉宁片 0.35 1074?54 * 0.7 886?173 ** 1.4 931?89 ** 阳性对照组 0.8 901?98 ** 与模型组相比 *P<0.05， **P < 0.01 9. 对血浆VEGF含量的影响 目前已知多种生长因子和细胞因子具有促进血管生成的作用，然而在众多的血管生成因子中，VEGF是最有力的血管生成因子，它通过和血管内皮细胞的特异性受体结合，具有强大的促内皮增殖、促血管生成作用。其它血管生成因子的血管生成作用是全部或部分通过增强VEGF的表达及生成作用实现的。通过测定血管内皮生长因子，来研究血栓心脉宁通过提高血管内皮细胞的VEGF表达来促进血管的生成,改善血栓造成的组织缺血。 血栓心脉宁片对急性血瘀模型大鼠血浆VEGF的影响见表9，结果表明: 与正常组比较，血瘀模型组大鼠血浆血浆VEGF含量明显升高(P<0.01)。与血瘀模型组比较，血栓心脉宁片低剂量组0.35g/kg、中剂量组0.7g/kg、高剂量组1.4g/kg可使急性血瘀模型大鼠血浆VEGF含量降低(P<0.05)。其中中剂量组最为显著，步长脑心通胶囊组0.80 g/kg与中剂量组无差异，表明血栓心脉宁片有明显降低血瘀模型大鼠血浆VEGF含量的作，提示药物可有效减低血管损伤程度，因此血管内皮增殖及血管生成相对较少。 10 表9 血栓心脉宁片对急性血瘀模型大鼠血浆VEGF的影响(?S，n=10) 组别 剂量(g/kg) VEGF(pg/ml) 正常对照组 - 80.3?16.0 * 血瘀模型组 - 98.2?12.2 血栓心脉宁片 0.35 77.9?23.2 * 0.7 56.2?12.4 ** 1.4 70.8?23.7 ** 阳性对照组 0.8 62.4?13.4 ** 与模型组相比 *P<0.05， **P < 0.01 结 论 血栓心脉宁片具有改善急性血瘀大鼠血液流变学的作用;具有抑制体外血栓 形成的作用;通过降低血瘀大鼠血浆TXA、、GMP-140、vWF、ET-1及VEGF2 含量及增加血浆PGI、NO含量，在分子水平上具有抑制血栓形成的作用。 2 11