新生儿促甲状腺素定量检测试剂盒(酶联免疫吸附法)说明...
新生儿促甲状腺素定量检测试剂盒(酶联免疫吸附法)说明书
目录
? 产品名称
? 包装规格
? 预期用途
? 检验原理
? 主要组成成分
? 储存条件及有效期
? 适用仪器
? 样本要求
? 检验方法
? 参考值(参考范围)
? 检验结果的解释
? 检验方法的局限性
? 产品性能指标
? 注意事项
? 参考文献
? 生产企业
? 医疗器械生产企业许可证编号
? 医疗器械注册证书编号 ? 产品
编号
? 说明书批准及修改日期
1
产品名称
通用名:促甲状腺素定量检测试剂盒(酶联免疫吸附法)
英文名称:TSH ELISA Kit
包装规格
96人份/盒 480人份/盒
预期用途
用于定量检测采集在S&S 903# 滤纸上的新生儿血样本中促甲状腺素(TSH)的浓度,适用于新生儿甲状腺功能低下的筛查。
促甲状腺素(TSH)是由垂体前叶分泌的一种糖蛋白,是调节甲状腺功能活动的主要激素。主要作用是促进甲状腺激素的合成与分泌。TSH受下丘脑分泌的促甲状腺素释放激素(TRH)控制,还受甲状腺素(T3、T4)的影响,即负反馈作用。血液中甲状腺素浓度升高时,下丘脑减少TRH 的释放,垂体分泌的TSH减少,甲状腺素的释放也随之减少。血液中TSH的正常浓度很低,却维持着甲状腺的正常功能。
在我国,甲状腺功能低下的发病率约1/3000左右。主要发病原因有先天性甲状腺发育异常,先天性甲状腺激素合成障碍,TSH不足或孕妇服用抗甲状腺的药物等造成。通过筛查及时发现、早期诊断、适当治疗,即可避免发生智力损伤。在新生儿甲状腺功能低下的筛查方面,检测TSH水平被认为是较灵敏的、可行的方法。但在甲状腺功能低下的确诊中同时还需要做其它试验,如血清T3、T4、TSH等。
检验原理
96孔微孔板包被抗-β-hTSH-抗体,与被分析物中的TSH抗原β位点结合,辣根过氧化物酶标记的抗-hTSH抗体与抗原的其他位点结合,形成“三明治”的抗原抗体复合物,催化底物TMB转化成蓝色的物质,终止后呈黄色,在波长450nm处有吸收峰,颜色的深浅与样品中TSH抗原的浓度呈正比,通过酶标仪测定最后产物的吸光度(OD值)。根据OD值,判断反应体系中被分析物的浓度。
主要组成成分
新生儿促甲状腺素定量检测试剂盒(酶联免疫法)组成
名称 96人份/盒 480人份/盒 包装
酶结合物(辣根过氧化物酶标记的抗hTSH抗体) 12 ml /瓶 60 ml /瓶
终止液(2M HSO ) 12 ml /瓶 60 ml /瓶 24
样品缓冲液(Tris-HCl缓冲液) 白色塑料瓶或无色玻璃瓶 12ml/瓶 60 ml /瓶
浓缩洗液20?(Tween 20) 60ml/瓶 300 ml /瓶
底物A (柠檬酸盐缓冲液) 10ml/瓶 50 ml /瓶
底物B (TMB) 棕色塑料瓶或玻璃瓶 10ml/瓶 50 ml /瓶
96孔包被板(包被抗-β-hTSH-抗体) 1块 5块 铝箔袋
*1份 5份 TSH标准血片A,F(0、5、10、25、60、150µU/ml) 铝箔袋 质控血片C1、C2 1份 5份
盖膜 2张 10张
说明书 1份
* 注:标准品或质控品的浓度若有改变,将在试剂盒内放通知单,同时电话通知。
储存条件及有效期
储存条件 2,8?,防止冷冻。
有效期 12个月。试剂盒开启后可在2,8?保存6周。
适用仪器
酶标仪。本说明中的技术参数使用美国DYNEX公司生产的CB 372型酶标仪。使用波长450?10nm。
样本要求
按照卫生部规定的“新生儿采血常规”采取足跟血。
2
检验方法
1. 检测前将试剂盒、样本先放在室温(18,25?)平衡;
2. 浓缩洗液与蒸馏水1:20稀释,稀释后2,8?可保存1个月; 3. 打下直径3mm标准品、质控品和样本血片放入相应的微孔中; 4. 每孔加样品缓冲液100µl,充分混匀,盖膜后放入4?孵育18,20小时; 5. 洗板
弃去包被板中孵育的混合物在吸水纸上拍干。每孔加洗液350µl,洗板之间浸泡约10秒或振荡5
秒,弃去,重复上述操作5次,洗完后在吸水纸上拍干直至没有潮气。 6. 每孔加酶结合物100µl,混匀,盖膜,37?孵育1小时后重复洗板程序。 7. 每孔加底物混合液100µl(底物A和底物B在使用前15,60分钟等体积混合在一起,避光待用),
盖膜后放入37?孵育15分钟。
8. 每孔加终止液100µl混匀,终止反应。在30分钟内读取OD值,酶标仪波长使用450nm。
结果计算
1. 手工计算:
? 计算标准品、质控品和样本平均OD值。
? 建立标准曲线,使用标准品的OD值与其相对应的浓度绘制标准曲线。OD值为纵轴(Y 轴),浓度
为横轴(X轴)。
? 样品的TSH浓度:首先在Y 轴上查找样品对应的OD值,横向延伸至标准曲线,以标准曲线上的
点拉垂直线与X轴相交,得出TSH浓度值。
2. 利用酶标仪所带的软件,自动计算样品浓度值。
3. 计算公式:Lin-Lin或 Log-Log
参考值(参考范围)
参考值 ?10.8µU/ml(97.5,百分位数)。
对696例正常新生儿血斑样品检测促甲状腺素并统计频数分布,见图1。
图1 696例正常新生儿血斑样品的TSH含量分布图
696例正常新生儿血斑促甲状腺素含量分布图
180120.0%
160100.0%140
12080.0%
10060.0%频数80累计频率6040.0%
4020.0%20
0.0%0
0~
1~促甲状腺浓度 2~
每个实验室应建立自己的正常参考值范围。 3~
注:本试剂盒得出的结果为血清值(全血值,血清值?2.22)。 4~
检验结果的解释 5~
a) 质控品的结果必须控制在要求范围之内,否则实验结果不符合可接受范围视为无效。 6~
b) 实验结果仅仅是患者临床的一个部分,只有与所有的临床诊断吻合,才能做出最终诊断。 7~
8~
9~ 3
10~
11~
12~
13~
14~
>15
c) 实验结果不能单独决定患者的治疗。
检验方法的局限性
a) 出生后72小时采血,避免因生理性增高而产生假阳性。
b) 含叠氮纳化物不能用于酶反应。
产品性能指标
1. 标准曲线的线性范围 0,150μU/ml(非精确值,以实际试剂盒内标定值为准),R值?0.99。
2. 批内精密度:CV不大于15 %
3. 批间精密度:CV不大于20 %
4. 准确性:回收率为85,,119,
5. 灵敏度:最低可检出限小于2.2µU/ml
6. 特异性:与HCG、LH、FSH无交叉反应,TSH表观浓度,5µU/ml 注意事项
1. 不同批号的试剂不可混用;超出有效期的试剂不可使用。仅用于体外诊断。
2. 避免接触终止液(0.5M HSO),以免皮肤腐蚀和烧伤。 24
3. 自备实验材料:酶标仪、双蒸水、移液器、移液槽及吸头、吸水纸、一次性手套。
4. 所有试剂、样本应视为有潜在的生物危害,实验结束应采用高压、消毒液等浸泡处理。 参考文献
? 卫生部《卫生部关于印发〈新生儿疾病技术规范〉的通知》,附件2。
? 黄雨三主编《新生儿疾病筛查与临床诊断治疗技术操作规范全书》2005,2:111-119
? Travis, J. C., et al.1979.Methods of Quality Control and Clinical Evaluation of a Commercial
Thyroxin and Thyrotropin Assay for Use in Neonates. Clinical Chemistry. 25:735.
? F.Delange, 1998. Screening for Congenital Hypothyroidism Used as an Indicator of the
Degree of Iodine Deficiency and of its Control. Thyroid Vol.8: No.12. 生产企业
企业名称:北京协和洛克生物技术研究开发中心
地址:北京市海淀区恩济庄18号院4-2-302
邮政编码:100036
电话:010,51295656
传真:010,88140690
网址:www.unionluck.com.cn
医疗器械生产许可证编号
京药管械生产许20040085号
医疗器械注册证书编号
注册产品标准编号
说明书批准及修改日期
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新生儿促甲状腺素定量检测试剂盒(酶联免疫分析法)说明书
96人份/盒
480人份/盒
医疗器械生产许可证编号:京药管械生产许 号
医疗器械注册证书编号:
注册产品标准编号:
北京协和洛克生物技术研究开发中心
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