尿液小分子量蛋白质检测检测的选择

尿液小分子量蛋白质检测检测的选择 l短小誓句 国外医茔盎生塑垡芏皇鳖壁芏坌煎主彗查差塑 /./ 尿液小分子量蛋白质检测的选择 第三军医大学检验系(400038)魏明竟 _ ‘‘, 近年来,临床上常用检测尿液小分子量蛋白质作 为肾小管痛变或损害的标志.实践证明,检测尿中一 些小分子量蛋白质对于糖尿病肾病,重盎属中毒及肾 毒性药物引起肾损害的早期发现具有重要意义.但尿 液小分子量蛋白质的种类很多,如何选择是个问题. 现就此谈几点看法. 1何谓小分子量蛋白? 通常是根据肾小球滤过膜的滤过状况,将血浆中 的蛋白质人为地分为大,中,小分子量蛋白质.大分子 量蛋白质是指分子量大干9万的蛋白质,如各类免疫 球蛋白,它们不能通过正常的肾小球滤过;中分子量 蛋白,常指分子量在4,9万的蛋白质,它们不易通过 肾小球滤过,如白蛋白,运铁蛋白等;小分子量蛋白通 常是指分子量<4万的蛋白质.这类蛋白质容易通过 肾小球蟪过,正常时在肾小管几乎全部被重吸收降 解,所以晟液蛋白质量极徽.一旦肾小管功能损伤,尿 液小分子量蛋白质排出量增多,即所谓肾小管性蛋白 晟. /蟛,2z 2尿液小分子量蛋白的种类及其主要特性 尿液小分子量蛋白质的种类报多,但含量均很 微,任何一种或几种小分子量蛋白排出增多,则称为 小分子量蛋白尿.小分子量蛋白尿多数情况下是肾小 瞢重吸收功能损伤的结果,但也有因血浆中某些小分 子量蛋白质浓度明显增加,如多发性骨髓瘤时的本周 蛋白(M,W,2.3万)产生增加,肌肉损伤时的肌红蛋 白(M,W1.6万)释放增加等,厚尿中的蛋白质浓度超 过肾小管重吸收能力,使终尿中这些小分子量蛋白质 排出增多,这种小分子量蛋白尿,则称为溢出性蛋白 尿或肾前性蛋白尿.本文仅就肾脏疾病相关的几种小 分子量蛋白质加以介绍. 2.1岛一擞球蛋白(岛一microglobulin;p2一m)一m是 由100个氨基酸组成的单链多肽,不合糖基,分子量 为1.18万,PI为5.7.一m作为HLA的轻链以非共 价键与重链结合存在于所有有核细胞面,尤其在淋 巴细胞和单核细胞存在丰富,在其免疫应答中,起重 要作用. (接上员) 除MRSA耐药特异基因MecA的存在,而无MRSA 感染症.因此,PCR捡出MecA基因,尚不能完全确 定其临床意义. Etest法是扩散法和稀释法原理相结合的产物, 此长塑料条含有连续的呈指数梯度变化的抗生素,具 有精确,可靠稳定性好的特点口],可用于多种细菌的 检测,尤其适合于用常规方法中具有弱点的领域.如 以诱导形式产酶的MRSA株,耐万古霉素的肠球菌 (VRE)等.Etest法已被证实在测定MRSA中是一种 与琼脂稀释法(金标法)一样有相当精确度的MIC药 敏测定方法[,其精确性,连续性和稳定性使其可作 为临床实验室检测MRSA的常规药敏方法的重要补 充.此法原理先进,操作简易,结果准确,不需仪器,检 测结果较其他方法更符合临床实际.唯一缺点是此法 价格昂贵. 目前,MRSA引起的癔染已;l起人们的关注,准 确,快速地诊断MRSA感染关键是选择合适的检测 方法[ta)15],从而为I斑床提供可靠的治疗依据并采取有 效的预防. 参考文献 1Jl!}剑辉.中华医学检验杂志,1998,21:79~81 2毛家都(整理).中华医学挂验杂志.1997,20:3l6,317 3SanchesIS.IntJInfectDis.1998.3:26,31 4RahimiAR.JAmGeriatrSoc,1998,46:1555,1557 5GirouE.C1inInfectDis.1998.27:543 6SuhHK.EurArch0t0rhin0lay”g0I,1998,255:347351 7ReardonCM.Burns.1998.24:393,397 8WangJ.JHospInfect,1998,39:221,2z5 9VanWamelWJJMedMicrobiol,1998,47:705,709 lOMirN.JClinMicrolioI,1998,36:986,989 ?HiramstsuKAmJMed,1998,104:75,105 lZPetersonAC,MiornerH,KammeC.JAntimicrobmI Chemotherapy.1996,37:445--456 13BakerCN,HuangMBtTenovcrFC.D{agnMicrobtoiIn fectDis,l994.19:167,170 l4ColemanKJAntimicrobChemothcr,1994.33:1091 15KauffmanCA,TerperningMStHeX,eta1.AmJMed, 1993.9413l7,378 (1999—03—01收稿l999—04一o2修回) .=?,/ 旌 圜外医学临床生物化学与检验擘分册2000年第21卷落l期 血中的岛一m由于其分子量小可自由通过肾小球 漓过膜.滤过系数达0.90,滤过负荷为260mg/d.滤过 的一m在近端肾小营几乎被完奎重吸收后降解,所 以尿中岛一m含量很微.屎中Prnl的排出量取决于肾 小管的重吸收能力和血中.Fit的浓度. 2.2Clara细胞蛋白(CIazacellprotein)aara细 胞蛋白固其分子量约为16kD,故简称为CC16.CC]6 主要由呼吸道Clara细胞(终末细支气菅无纤毛上皮 细胞)分泌,其产生量较恒定.其生理功能目前了解甚 少,据信可能是一个呼吸道自然分泌的免疫抑制物, 主要与免疫下调有关. 呼吸道内的CC16被动吸收入血后,由于其分子 量小,可自由从肾小球滤过,并在肾小营被重吸收降 解,所以尿液中CC16的排出量主要取决于肾小营重 吸收功能.但青春期以后男性泌尿生殖道也有CC16 分泌,而女性则无,固而尿液中CC16浓度的性别差异 较大. 2.3视黄醇结合蛋白(retlnolhindlngproteinIRBP) RBR由肝脏合成,与视黄醇结合以奎RBP(holo. RBP)形式分泌.人血浆RBP是一种单链蛋白,具有 球蛋白的电泳迁移率.分子量约2.1万,含有182个 氨基殴残基.健康人RBP产生量较恒定,成年人合成 事约为每日5mglkg体重 血浆中鲍大部分RBP与前白蛋白结合形成蛋白. 蛋白复合体,从而使这个小分子量的holo-RBP不能 通过肾小球滤过,当holo.RBP向目的脏器供给视黄 醇后变成脱视黄醇RBP(apo.RBP),与前白蛋白结合 的亲和性降低而解离,称作游离RBP,约占总RBP的 10.apo.RBP分子量小,可通过肾小球滴过,滴过系 数为0.60.滤过RBP在肾小管几乎被奎部重吸收降 解.屎中RBP的排出量取决于肾小营的重吸收琦能. 屎中的RBP主要为apo—RBP,但亦有少量holo—RBP. 实验证明两者与抗体的结合特性有差异,这在免疫分 析时应加以注意. 2.4a1一微球蛋白(al—rnlcroglohulinaI-m)aI-m是 一 种分子量约为3.0万的糖蛋白.台糖量为20左 右.PI4.5,5.0,为一种疏水配体结合蛋白.a1-m由肝 脏产生,其产生量较为恒定.在血液中,a1-m以两种形 式存在,即游离型和与IgA结合型,仅游离型~t1-rfl可 通过肾小球滤过,鲍大部分在肾小营重吸收降解.尿 液一m排出量主要取决于肾小营重吸收功能.但受 血清IgA浓度的影响. 3检测尿液小分子量蛋白质的意义 3.1肾小营病变和损害的早期诊断正常时,血浆 中的小分子量蛋白质通过肾小球滤过后,鲍大部分被 肾小营重吸收睁解,所以终尿中,小分子量蛋白质极 微.当各种原目造成肾小营损害时,那怕是轻微损害, 尿液小分子量蛋白质均有明显增加,可作为肾小管损 害的早期诊断和疗效评定的有用指标,有时比屎液酶 活性测定更为有效.目为尿液酶活性测定常受尿液中 酶抑制荆或激活荆浓度以及酶的稳定性影响,使酶活 性测定的精度较差. 3.2反映血液小分子量蛋白质的病理性增多如一 些恶性肿瘤(多发性骨髓瘤,慢性淋巴性白血病等)时 血液中微球蛋白增多;多发性骨髓瘤时本周蛋白增 多肌肉损伤时,肌红蛋白增多,这些小分子量蛋白质 通过肾小球后,在原尿中的浓度超过肾小营的重吸收 能力时.终尿中这些小分子量蛋白质亦可明显增加. 即所谓溢出性蛋白尿.固为尿液标本较血液标本容易 采集,临床上常是检测屎液中这些小分子量蛋白质来 反映血液中的病理性增多.但应注意,此时并不表明 肾小营的损害. 3.3反映肾小球的损害肾小球损害时尿液蛋白质 的主要特点是尿液中分子量蛋白质和大分子蛋白质 的明显增加,即所谓肾小球性蛋白尿.但同时亦有小 分子量蛋白质的明显增加小分子量蛋白质在肾小营 内的重吸收,大多数是通过胞饮作用进行.当原尿中 任何蛋白质明显增加时,即使肾小管重吸收功能良 好,小分子量蛋白质的重吸收都会受竞争性重吸收抑 制,使终尿中的小分子量蛋白质明显增多.固而检测 尿液小分子量蛋白质.不仅是反映肾小营损害的指 标,亦是反映肾小球损伤以及溢出性蛋白尿的灵敏指 标. 总之,屎液小分子量蛋白质的检测,?可用于各 类肾脏损害的早期诊断,常用于糖屎病肾病,商血压, 重盎属及药物性肾损害的早期诊断.?肾前性蛋白 屎,即溢出性蛋白尿的诊断.?肾性及肾后性蛋白屎 的鉴别诊断,如上,下尿路感染的鉴别诊断,上屎路薅 染时常有尿液小分子量蛋白质增多.而下尿路旖染 时,尿液小分子量蛋白质浓度多为正常.?判断肾秽 植的排斥反应,肾移植无排斥反应时,尿液小分子量 蛋白质浓度不高,当出现急性排斥反应,在排斥期前 数天即见尿液一些小分子量蛋白(如&一m)明显增加 在排斥高危期,定时测定有一定预示价值. 4检测尿液小分子量蛋白质项目的选择 常用屎液小分子量蛋白质项甚有多种,对肾琦能 损伤的诊断意义近似,临床应用时,可根据需要和实 验室条件选择1,2项实验即可.选择时应注意. 4.1检测方法及试剂盒供应尿液小分子量蛋白质 国外医学档床生物化荦与授验擘衙2000年第21卷第1期 浓度的临界值均很低,所用的检测方法多为检测灵敏 度较高的酶联免疫吸附分析(ELISA),放射免疫分析 (RIA)或颗粒增强免疫散射比浊法(PENIA)等.前两 种方法的试剂盒如一II1,{11一II1和RBP,国内已有供 应,可根据实验条件选用}后一种方法操作简便,快 速,测定精度高于前两法,但目前国内尚无成套试剂 盒供应. 4.2肾外疾病的影响肾外疾痨引起尿液中一n2 排出增多较紫见,如多发性骨髓瘤,慢性淋巴性自血 病,肝癌,肺癌,自身免疫性疾病以及一些病毒感染 (EB病毒,己肝病毒,丙肝病毒)时,血中一m可增 高,此时亦有尿液中一II1的排出增多,故尿液一m检 测对肾脏疾精诊薪的特异性较低.其他几种小分子量 蛋白质,其产生量较恒定,尿中的排出量受肾外目素 影响较小. 4.3尿液标本小分子量蛋白质的稳定性尿液中, 一 m在pH<:5.5时很不穗定,故尿液标本不宜采集 晨第一姨尿,因其在膀胱内贮留,可造成破坏.取得屎 液标本后应立即纠正尿液pH至中性,必要时可于测 47 定前日给受试者口服碳酸氢钠等碱性药物,使尿液 p,H~6.O.其他几种小分子量蛋白质在弱酸性尿液标 本中的稳定性较好,通常尿液标本在4”C可稳定一周, -- 20?可稳定一月以上. 从上看出,鉴于屎液中一II1的稳定性差,且受肾 外目素的影响,使检测尿液B.一II1的结果解释困难,欧 渊一些官家巳建议淘汰尿液iTt检测,代之以RBP 或一n2检测. 一m的产生量较恒定,尿液中~tl-n2的排出量较 少受肾外固素的影响,被认为是较特异的肾功能损伤 的诊断试验.在健康人及肾脏疾病时,尿中q—ii1浓度 较高以及在酸性尿液中的稳定性优于一II1和RBP, 这使~11-m浓度测定的准确性和重复性大为提高,在 临床应用中可大大减少实验误差.国内亦有尿液~t1-II1 测定的R1A和ELISA试剂盒供应,因而常被作为肾 脏疾病,包括肾小管损害和肾小球损伤诊薪首选检测 指标. (1999—11—03收稿) 应广大检验专业人员的要求,经上级有关部门批准,本部2000年5月左右拟出版《国外医学 临床生物化学与检验学分册》第21卷增刊.遵循本刊办刊宗旨的要求,征文内容可围绕临床生化 和临床检验学科的内容.重点选择实用性较强的新技术,新方法以及检验科常规检查中的技术改 革,国内外临床检验和临床生化领域发展的最新动态,以及国内外先进的仪器,试剂和检验科,实 验室诊断技术与管理学等内客进行撰稿. 征文形式可以是综述,文摘,论着,经验和病例报道等,每篇稿件限2000字以内,按本刊 正刊稿约要求书写. 为配合这次增刊的出版,本部同时拟举办”医学检验与临床实验诊断学”学术研讨会,时问5 , 6月,地点待定.正式开会通知提前一个月寄发,欢迎广大读者,作者积极投稿.来稿请寄:重庆 市瀹中区青年路44号,邮编:400010,国外医学编辑部陈新黔收.信封 上请注明”增刊征文”字样. 咨询电话;O23—63714519. 本刊编辑部