瓦松愈伤组织诱导研究

瓦松愈伤组织诱导研究 DOC格式,方便您的复制修改删减 瓦松愈伤组织诱导研究 (作者:___________单位: ___________邮编: ___________) 【摘要】 目的探讨影响瓦松愈伤组织诱导因素,建立瓦松愈伤组织培养方法。方法采用组织培养方法,比较不同外植体、pH、温度、植物生长物质种类及其配比对瓦松愈伤组织诱导的影响。结果在培养基MS上,叶片的诱导率高达80%以上,茎和根难以诱导愈伤组织,诱导率近10%;不同pH差异不明显;愈伤组织诱导适宜温度为25?;6-BA 1.0 mg?L-1 +NAA 0.1 mg?L-1 诱导率最高。结论瓦松愈伤组织的培养的外植体为叶,适宜培养基为MS+ 6-BA 1.0 mg?L-1 + NAA 0.1 mg?L-1 (pH 5.8),培养温度为25? ,光照12 h?d-1,光照度1200 Lx。 【关键词】 瓦松; 愈伤组织; 诱导 瓦松为景天科植物瓦松Orostachyd fimbriatus (Turcz.) Berger或晚红瓦松O. erudescens (Maxim.) Ohwi的全草。全国各地均有分布,生于屋顶瓦缝中或岩石上,又被誉为“房上仙子”。瓦松具有清热解毒,止血,利湿,消肿等功效,用于治疗吐血、鼻衄、血痢、疟疾、痔疮、湿疹、痈毒、疔疮等症[1]。由于瓦松市场需求量巨大,价值较贵,野 DOC格式论文,方便您的复制修改删减 生资源有限,目前该药材原料,提取物和制剂的原料供应完全依赖于野生资源,过量的采挖,使野生瓦松资源短缺并濒临灭绝,为了对其野生资源进行有效保护和可持续开发利用,作者对瓦松愈伤组织的诱导进行了研究,为培养出瓦松新药源提供物质基础。 1 材料与仪器 1.1 材料瓦松新鲜植株,采自新疆伊犁,经九江学院医学院药学教研室高春华教授鉴定为景天科植物瓦松Orostachyd fimbriatus (Turcz.) Berger的全草。不同外植体比较研究取叶片、茎和根为试验材料;不同pH值、温度、不同种类和浓度的植物生长物质等比较研究取叶片作为试验材料。 1.2 仪器与试剂MGC-250型光照培养箱(上海一恒科技有限公司);YXQGCZ型电热式蒸汽消毒器(山东新华医疗器械厂);ESCO超净工作台(新加坡ESCO公司);PP-15E PH计(德国赛多利斯集团);萘乙酸(NAA)和6-苄基嘌呤(6-BA),均为生化制剂;蒸馏水为超纯水(自制);其它实验所需的试剂均为分析纯。 2 方法 2.1 材料处理新鲜瓦松植株用自来水冲洗干净,用75%的乙醇浸泡10min,用无菌水冲洗后,再放入0.1%HgCl2 溶液中浸泡2,3 min,用无菌水反复冲洗后,在无菌条件下,用无菌手术刀于滤纸上将植株按叶片、茎和根三部分分别切成0.5 cm左右长的小段,接种到MS诱导培养基上,每个实验培养5瓶,每瓶接种5个。 2.2 培养基与培养条件培养基,以MS为基础的固体培养基, DOC格式论文,方便您的复制修改删减 附加不同浓度的6-BA,NAA组成各种培养基,pH值均调至5.8,加入蔗糖30 g?L-1,琼脂5 g?L-1,121?高压灭菌15 min。培养条件,不同外植体(设叶片,茎,根)、pH(设5.2,5.5,5.8,6.1,6.4)、温度(设15?,20?,25?,30?),光照12 h?d-1,光照度1 200 Lx。比较实验均采用MS + 6-BA 1.0 mg? L-1+NAA 0.1 mg?L-1培养基;不同种类和水平植物生长物质及其配比对愈伤组织诱导影响实验选用2因素3水平正交设计L9(34)。所有实验培养温度均为25.0??0.5?(温度试验除外),外植体为叶片(外植体试验除外),3,5 d后持续观察愈伤组织诱导结果。 2.3 成愈率的计算成愈率(%)=(产生愈伤组织的块数/接种的块数)×100% 3 结果 3.1 不同外植体对愈伤组织诱导的影响第6天在叶片外植体的切口处观察到愈伤组织的生长,诱导率高达80% 以上;用茎或根作为外植体难以诱导出愈伤组织,诱导率很低,只有10%左右。因此确定叶片为瓦松诱导愈伤的最佳外植体。 3.2 不同pH对愈伤组织诱导的影响从表1可知,偏低的pH对愈伤组织生长较为有利,出愈率高,但从愈伤组织生长质量方面看,不同pH差异不明显,诱导的愈伤组织均呈绿色,质量好。表1 不同pH对愈伤组织诱导的影响 3.3 不同温度对愈伤组织诱导的影响不同温度对愈伤组织诱导的影响结果见表2。从表2可以看出,25?愈伤组织诱导率最高,为 DOC格式论文,方便您的复制修改删减 92%,而且质量较好,诱导的愈伤组织呈现绿色;15?最低,成愈率仅为52%,生长缓慢。因此选取培养的温度为25?。表2 不同温度对愈伤组织诱导的影响 3.4 不同植物生长物质种类及其配比对愈伤组织诱导的影响结果见表3。结果表明2种激素对愈伤组织诱导作用中,6-BA的作用较比NAA的作用强,6-BA 2个浓度中,1.0 mg? L-1 作用比0.5 mg? L-1 强,而NAA的2个浓度的作用较为接近,6-BA 1.0 mg? L-1 + NAA 0.1 mg?L-1较适合愈伤组织的诱导。 4 讨论 药用植物愈伤组织诱导受很多因素的影响,其作用程度和大小因植物种类不同而不同。影响景天科植物愈伤组织诱导的主要因素有外植体、植物生长物质种类及其配比等、pH、温度、光照等[2,4]。本实验表明,外植体和植物生长物质是影响瓦松愈伤组织诱导较为关键的因素。外植体中,叶片诱导率较高,达80%以上,而茎和根难以诱导愈伤组织诱导,这与文献报道[5,6]景天科属植物大花红景天愈伤组织诱导选用的外植体为叶或叶柄,而根和茎难诱导率低下的实验结果一致,这可能与瓦松叶片肉质肥厚多汁,营养储备多,而茎和根较细(0.5 mm),营养储备少,伤面又较小等有关。植物生长物质种类及其配比试验中,6-BA对瓦松愈伤组织诱导效果好,说明在瓦松愈伤组织诱导及继代培养中宜使用6-BA。通过4因素3水平正交实验证明,在培养基MS+6-BA 1.0mg?L-1 +NAA 0.1 mg?L-1上,瓦松愈伤组织诱导效果最好。文献报道。温度和pH对瓦松愈伤组织诱导 DOC格式论文,方便您的复制修改删减 也有一定的影响。本实验表明,pH对瓦松愈伤组织诱导作用很接近,与文献一致,温度对瓦松愈伤组织诱导作用不是很明显,20,25,30?的愈伤组织诱导率很接近,愈伤组织诱导最适温度为25?,诱导率可达92%,30?诱导率也可达到88%,随着温度的降低,诱导率则逐渐下降,15?时仅为64%。表3 不同植物生长物质种类和水平及其配比对愈伤组织诱导的影响 为了缓解压力,并对其野生资源进行有效保护,作者对瓦松愈伤组织的诱导进行了研究。今后应对瓦松愈伤组织诱导及继代培养、组织快繁以及毛状根培养等进行深入的研究,并将对培养出的各组织化学成分进行分析,以期提供利用组织培养方法和生物技手段获得瓦松资源的途径。 【参考文献】 [1] 国家药典委员会. 中国药典,?部[S].北京,化学工业出版社,2005:47. [2] 安桂花,许明子,李美善,等.植物激素对高山红景天试管苗愈伤组织诱导的影响[J]. 延边大学农学学报,2007,29(3),153. [3] 赵银萍,李发荣,张九东,等. 杂景天愈伤组织诱导及红景天苷测定[J]. 西北植物学报,2007,27(8),1679. [4] 刘剑锋,阎秀峰,李 霞,等. 高山红景天叶片愈伤组织诱 DOC格式论文,方便您的复制修改删减 导与植株再生[J]. 东北林业大学学报,2007, 35(2):33. [5] 白玛玉珍,李宝海,次仁措姆. 大花红景天愈伤组织的诱导[J]. 西藏科技,2008,2:74. [6] 沙 红,唐 芳,高 燕,等. 大红红景天愈伤组织的诱导及植株再生体系的建立[J]. 新疆农业大学学报, 2008,31(3):58.