血脂灵胶囊质量标准研究

血脂灵胶囊质量研究 【摘要】 目的建立血脂灵胶囊的质量标准。采用薄层色谱,TLC, 对制何首乌、山楂、决明子进行定性鉴别～用高效液相色谱,HPLC, 测定制何首乌中2～3～5～4’ 四羟基二苯乙烯 2 O β D 葡萄糖苷的含量。结果薄层色谱中～供试品溶液色谱在与对照药材 或对照品色谱相应位臵上出现相同颜色的斑点～阴性无干扰,HPLC 中～2～3～5～4’ 四羟基二苯乙烯 2 O β D 葡萄糖苷在 0，0.82 μg范围内线性关系良好,r=0.999 9,～平均回收率为97.4%。 结论薄层色谱法呈现斑点清晰、特异性强～可用于血脂灵胶囊的鉴别, 高效液相色谱法简便快速、精密度高、准确度好～可用于该药的质量 控制。 【关键词】 血脂灵胶囊, 薄层色谱, 高效液相色谱, 2～3～5～ 4’ 四羟基二苯乙烯 2 O β D 葡萄糖苷 Quality Standard for Xuezhiling Capsules Abstract:ObjectiveTo establish the quality standard for Xuezhiling Capsules(MethodsRadix polygoni, Multiflori preparata～Fructus crataegi～Semen cassiae were identified by TLC(The contents of 2,3,5,4’ Tetrahydroxystilbene 2 O β D glucoside in Radix polygoni Multiflori preparata was determined by HPLC(ResultsSpots obtained from the test solutions had the same color in reference solution and medical material in the same location～and the blank solution had no interference(The linear range of albiflorin was from 0 to 0.82μg,r=0.9999,～the averge recovery was 97.4%(ConclusionIn TLC～ the spots are very clear and specific to identify the herbal medicine in Xuezhiling Capsules(It is simple ～quick～highly precise and accurate for HPLC to control the quality of Xuezhiling Capsules( Key words:Xuezhiling Capsules, TLC, HPLC, 2,3,5,4’ Tetrahydroxystilbene 2 O β D glucoside 血脂灵胶囊的处方来源于国家名医吴士元验方血脂灵片～由制 何首乌、山楂、决明子、泽泻组成。该方具有活血降浊、润肠通便的 功效～用于淤浊内盛而致的高脂血症。原剂型标准中只有何首乌、山 楂的定性鉴别。为了更好地控制药品质量～本研究改进了山楂的薄层 色谱鉴别～增加了决明子的薄层色谱鉴别～并采用反相高效液相色谱 法测定本品中2,3,5,4’ 四羟基二苯乙烯 2 O β D 葡萄糖 苷的含量。 1 仪器与试药 日本岛津高效液相色谱仪～LC,10AD泵～SPD,10A型检测器～电子天平,北京多利斯天平有限公司,。乙腈为色谱纯～其余试剂均为分析纯。2,3,5,4’ 四羟基二苯乙烯 2 O β D 葡萄糖苷对照品购自中国生物制品检定所～批号为110844-200505。 血脂灵胶囊,自制,。缺味阴性样品:按处方分别配成相应的缺味处方药～模拟制剂～加相应辅料制备。药材均购自南京医药同乐药业有限公司。 2 方法与结果 2.1 定性鉴别 2.1.1 何首乌的TLC鉴别取胶囊5粒～取内容物～加甲醇300 ml～超声处理30 min～滤过～滤液蒸干～残渣加稀盐酸10 ml使溶解～臵水浴上加热30 min～再用乙醚提取2次～15 ml/次～合并乙醚液～挥干～残渣加乙醚1 ml使溶解～作为供试品溶液。另取何首乌对照药材0.5 g～同法制成对照药材溶液。再取缺制何首乌的阴性样品～同供试品溶液的制备方法～制成阴性对照溶液。吸取上述3种 溶液各10 μl～分别点于同一硅胶G薄层板上～以石油醚(30，60?) 甲酸乙酯 甲酸(15?5?1)的上层液为展开剂～展开～取出～晾干～喷以5,硫酸乙醇溶液～在110?烘约5 min。供试品色谱中～在与对照药材色谱相应的位臵上～显相同颜色的斑点～阴性对照色谱无干扰。见图1。 2.1.2 山楂的TLC鉴别取胶囊内容物5 g～加甲醇50 ml～超声处理30 min～滤过～滤液蒸干～残渣加水25 ml使溶解～用10%盐酸调节pH值至2～用醋酸乙酯振摇提取2次～25 ml/次～合并醋酸乙酯液～蒸干～残渣加甲醇1 ml使溶解～作为供试品溶液。另取齐墩果酸对照品～加甲醇制成每毫升含1 mg的溶液。再取缺制山楂的阴性样品～同供试品溶液的制备方法～制成阴性对照溶液。吸取上述供试品溶液10 μl～对照品溶液5 μl～阴性对照溶液10 μl～分别点于同一硅胶G薄层板上～以甲苯 醋酸乙酯 甲酸,15?2?1,为展开剂～展开～取出～晾干～喷以10%硫酸乙醇溶液～在105?加热至斑点显色清晰。供试品色谱中～在与对照品色谱相应的位臵上～显相同颜色的斑点～阴性对照色谱无干扰。见图2。 2.1.3 决明子的TLC鉴别取胶囊内容物5 g～加氯仿50 ml～加热回流30 min～滤过～滤液蒸干～残渣加甲醇1 ml使溶解～作为供试品溶液。另取决明子对照药材1 g～同法制成对照药材溶液。再取缺制决明子的阴性样品～同供试品溶液的制备方法～制成阴性对照 溶液。吸取供试品溶液10 μl～对照品溶液5 μl～阴性对照溶液10 μl～分别点于同一硅胶G薄层板上～以石油醚,60，90?, 醋酸乙酯 甲酸,15?2?1,的上层溶液为展开剂～展开～取出～晾干～臵紫外光灯,365 nm,下检视。供试品色谱中～在与对照药材色谱相应的位臵上～显相同颜色的荧光斑点～阴性对照色谱无干扰。见图3。 2.2 定量分析 2.2.1 色谱条件kromasil 100-5C18,4.6 mm×250 mm,5 μm,,流动相为乙腈?水(22?78),流速:1 ml/min,检测波长:320 nm柱温:35?,理论塔板数按2,3,5,4’ 四羟基二苯乙烯 2 O β D 葡萄糖苷峰计算应不低于2 000。 2.2.2 溶液的制备 对照品溶液的制备:精密称取2,3,5,4’ 四羟基二苯乙烯 2 O β D 葡萄糖苷对照品适量～加稀乙醇制成每毫升含40μg的溶液～即得。 供试品溶液的制备:取本品装量差异项下的内容物～研细～取 粉末约0.2 g～精密称定～臵于具塞锥形瓶中～精密加入稀乙醇25 ml～称定重量～超声处理30 min～放冷～再称定重量～用稀乙醇补足减失的重量～摇匀～滤过～即得。 图1 何首乌的TLC 色谱图,略, 图2 山楂的TLC 色谱图,略, 图3 决明子的TLC色谱图,略, 阴性对照品溶液的制备:取不含制何首乌的阴性制剂～同供试品溶液方法制备阴性对照溶液并测定。结果阴性无干扰～见图4，6。 图4 对照品HPLC色谱图,略, 2.2.3 线性关系考察精密称取2,3,5,4’ 四羟基二苯乙烯 2 O β D 葡萄糖苷对照品11.382 mg～臵25 ml量瓶中～加稀乙醇溶解并稀释至刻度～摇匀,分别精密吸取该对照品溶液,浓度为455.3 μg/ml,2.0～4.0～5.0～7.0～6.0～9.0 ml～臵50 ml量瓶中～加稀乙醇稀释至刻度～摇匀～分别精密吸取10 μl～注入液相色谱仪～峰面积。以峰面积Y对进样量X,μg,进行线性回归～2,3,5,4’ 四羟基二苯乙烯 2 O β D 葡萄糖苷在0，0.82μg范围内线性关系良好～回归方程为:Y=5 266 501.911 1X+1 345.508 6～r=0.999 9,n=6,。 图5 血脂灵胶囊HPLC色谱图,略, 2.2.4 精密度实验取本品内容物0.2 g～按供试品溶液的制备方法制备～按已确定的色谱条件重复进样5次～测定峰面积积分值～计算RSD为0.84%。 2.2.5 稳定性实验精密吸取同一供试品溶液10 μl～分别于制备后0～3～6～9～12 h进样测定～结果表明～样品溶液在12 h内基本稳定～样品峰面积的RSD为0.15%。 图6 阴性对照HPLC色谱图,略, 2.2.6 重复性实验取同一批号样品5份～按供试品溶液的制备方法制备～进样测定～求得样品含量的RSD为0.66%～表明重复性良好。 2.2.7 回收率实验精密称取已知含量的一批样品,含量1.974 8 mg/粒,约0.1 g～臵具塞锥形瓶中～分别精密加入2,3,5,4’ 四羟基二苯乙烯 2 O β D 葡萄糖苷对照品稀乙醇溶液,0.455 3 mg/ml,1.5 ml～挥干～按供试品溶液的制备方法制备及上述色谱 条件测定～结果平均回收率为97.42%～RSD为0.45%。结果见表1。 表1 加样回收率测定结果,略, 2.2.8 样品含量取3批样品～按供试品溶液的制备方法制备成供试品溶液～测定样品含量。结果见表2。 表2 3批样品含量测定结果,略, 3 讨论 本品薄层色谱鉴别均作了阴性对照实验～结果阴性无干扰、专属性强～其中山楂鉴别原采用熊果酸为对照品～经反复实验发现对应斑点Rf值并不一致～现改用齐墩果酸作为对照品～试验结果对应斑点一致～阴性无干扰。 制何首乌是血脂灵处方中的君药～2,3,5,4’ 四羟基二苯乙烯 2 O β D 葡萄糖苷为其主要有效成分。现代研究表明2,3,5,4’ 四羟基二苯乙烯 2 O β D 葡萄糖苷类化合物具有抗衰老、提高免疫功能、防治动脉硬化及保肝作用。本法采用反相高效液相色谱法测定2,3,5,4’ 四羟基二苯乙烯 2 O β D 葡萄糖苷的含量～能较好地控制该制剂质量。 曾对样品提取溶剂进行考察～分别采用乙醇超声、50%乙醇超声、50%乙醇加热回流3种提取方法～经测定～乙醇超声含量较低～而50%乙醇超声和50%乙醇加热回流结果相近～故采用较简便的超声提取方法。 【参考文献】 ,1, 国家药典委员会.中国药典～?部,S,(北京:化学工业出版社～2005:123( ,2, 中华人民共和国卫生部药典委员会(卫生部药品标准〃中药成方制剂,第17册,S,(1998:105(