【doc】骨形成蛋白4对大鼠牙乳头细胞生物学行为的影响

【doc】骨形成蛋白4对大鼠牙乳头细胞生物学行为的影响 骨形成蛋白4对大鼠牙乳头细胞生物学行为 的影响 ? 192?2006年02月第23卷第02期PraeJMed&Pharm.Vol23,2006-02No.02 骨形成蛋白4 对大鼠牙乳头细胞生物学行为的影响 惠光艳?贾文敏?李鑫? (?济南军区青岛第一疗养院口腔科,山东青岛266071; 0山东省口腔医院牙体痛科,山东济南25OooO) 【摘要】目的观察骨形成蛋白4(BMP4)对体外培养的大鼠牙乳头细胞增殖及分化的影响,为探讨 BMP4在牙胚发生发育中的调控作用奠定基础.方法体外培养胚胎13d的大鼠牙乳头细胞.利用MIrI. 法和测定细胞内碱性磷酸酶含量检测BMP4对大鼠牙乳头细胞增殖及分化的影响.结果BMP4能抑制 牙乳头细胞的增殖,并能促进细胞分泌碱性磷酸酶(P<0.O1).BMP4具有抑制大鼠牙乳头细胞增 殖.并促进牙乳头细胞成熟分化的调控作用. 【关键词】骨形成蛋白4牙乳头细胞细胞生物学 【中图分类号】Q343【文献标识码】A Theinfluenceofbonemorphogenetieprotein4onbiologicalbehaviorofdentalpapillacells: An experimentalstudyHUIGuang-yan,JIAWen-rain.UXin+Dept.ofDentistry,theFirstSanat oriumof JinanMilitaryRe,on.Qingdao266071,China 【Abstract】ObjectiveToobselwetheeffectsofbonemorphageneticprotein4(BMP4)onproliferation anddifferentiat/onofdentalpapillacellofratandexploretheroleofBMP4inregulationoftoothgerms development.MethodsDentalpapillacellsextractedfromratemb~oaged13dayswereculturedin vitro.TheproliferationanddifferentiationeffectsofBMP4onthecellswereexaminedbyMTrmethod andleveldetectionofalkalinephosphataseofthecells.ResetBMP4couldsignlficanflyinhibitdental papillacellsproliferationandstimulateALPaseactivityfP<O.o1).ConclusionBMP4playsanimportant regulationroleininhibitingproliferationandpromotingdifferentiationofdentalpapillacells. 【Keywords】BonemorphogeneticproteinDentalpapillaceilsBiologicalbehavior 牙胚发育是由上皮一间充质的相互作用启动 的,上皮一间充质的相互诱导可调节牙胚形态的发 生和细胞的分化.这是一个由众多细胞因子参与调 控的有序的细胞反应事件.已有研究显示骨形成蛋 白(Bonemorphogenetieprotein,BMP),家族成员 BMP2,4,6,7在牙胚的发育过程中都有不同程度的 达【11.本研究检测了BMP4对体外培养的牙乳头 细胞增殖,分化的影响,旨在探讨BMP4对牙齿发 育的调控作用模式. 1和方法 1.1仪器,试剂及动物C0孵箱,酶联免疫检测 仪,倒置显微镜和照相系统(Olympus,Japan);96孔 细胞培养板,DMEM细胞培养基,波形丝蛋白,角蛋 白,第?因子抗体均为日本DAKO公司产品(工作 浓度1:100);碱性磷酸酶(ALPase),MTT试剂盒; BMP4(Sigma,USA).实验动物为SD系大鼠. 1.2牙乳头间充质细胞的原代培养,纯化和传代 ? 基础研究? GD13dSD大鼠乙醚麻醉下处死,剖官取胚鼠头部, D—hanks液体中分离上,下额骨并漂洗3次,无菌条 件下剪开牙槽嵴黏膜,暴露牙胚并取出,分离牙乳 头组织,剪成lmm.大小组织块,均匀铺于培养瓶底 部进行原代培养.培养液为含10%胎牛血清的 DMEM培养基,加适量青霉素和链霉素,使二者的终浓度均为l00U/ml.利用上皮细胞和间充质细胞 对胰酶的耐受时间不一致来纯化牙乳头间充质细 胞.培养5代后用于实验. 1.4牙乳头间充细胞的来源鉴定制备原代培养 细胞第4代细胞甩片,ABC免疫组化法进行波形丝 蛋白,角蛋白,第?因子单抗的免疫组化染色,鉴定 细胞来源. 1.5牙乳头间充质细胞生长特性观察,制备细胞玻 片鉴定过的第5代细胞传代后,以2.5g/L胰酶消 化后调整细胞浓度至2x104/ml接种于24孔细胞培 养板中,每孔lml,每48h取3孔,胰酶消化后用计 ?194?2006年02月第23卷第02PraeJMed&Pharm.Vd23,2006-02No. 牙齿发育早期调控牙胚始基的发生,更具有诱导牙 乳头细胞成熟分化的功能,预示它在牙齿发育全过 程中可能起的重要作用. 参考文献 1FengJQ.ZhongJ,TanX,et,11.Identificationofcis—DNAregions controMngBMP4expressionduringtoothmorphogenesisinvivo. JournalofDentalResearchAdvances.2002,81(1):6 2YamashiroT,TummersM,ThedeffI.Expressionofhonemorpho- geneticproteinsandMsxgenesduringrootformation.Journalof DentalResearchAdvances,2oD3.82(3):172 3TabataMJ,FujiiT.Bonemorphogeneticprotein4isinvolvedin cuspformationinmolartoothgermofmice.EuropeanJ?m日1of OralScience.2002,110(2):114 4TaraR,AmST,ZhangY,eta1.AntagonisticsignalsbetweenBMP4 andFGF8definetheexpressionofFitxlandPitx2inmouse tooth—formingarflage.DevelopmentBiology,2000,217(2):323 【收稿日期:2005—1o_l3】【本文编辑:韩仲琪王庆法1 心血康抗血管内皮细胞凋亡的实验研究 孙惠文?粱绪国?潘其兴?张梅? (@山东大学齐鲁医院心血管内科,山东济南250o12; 嘲台市毓璜顶医院保健科,山东烟台264001) 【摘要】目的采用血管紧张索?(Ang?)诱导血管内皮细胞凋亡,探讨心血康对其 所致内皮细胞凋亡 的作用.方法在原代培养的人脐静脉内皮细胞(HUVECs)中,给予不同浓度的心血 康作用2h后,再予 Ang?作用18h诱导内皮细胞凋亡,采用透射电镜技术,琼脂糖凝胶电泳及流式细 胞术等方法检测凋亡内 皮细胞的超微结构,DNA梯形图和凋亡峰百分率.结果经Ang?作用过的血管内 皮细胞透射电镜下可 见凋亡小体;与Ang?诱导组相比,经DNA琼脂糖凝胶电泳有显着变化,DNA的梯 状图谱消失,消失程度 与心血康的浓度有关,浓度越大消失愈明显;流式细胞术显示DNA直方图上G1峰 左侧的凋亡峰明显降 低.凋亡百分率与诱导组相比,具有显着性差异(P<0.05).结论心血康有抑制Ang ?诱导的血管内皮细 胞凋亡的作用. 【关键词】心血康内皮细胞凋亡DNA琼脂糖凝胶电泳流式细胞术 【中图分类号】R329.25【文献标识码】A Theanti--endotheliumapoptosisroleofXinXueKang:AnexperimentalstudySUNHui— wen,HANG XU— guo,PanQi-~ng,eta1.DepartmentofCardiology,QiluHospital,ShandongUniversity,Jinan250012,China 【Abstract】 ObjecfiveInducingapoptoticexperimentalmodelinendothelialceHsbyangiotensin? fAng lI)tostudyeffectofXinxuekangonthisapoptosis.MethodsXinxuekangatdifferentconcentrationwas putinculturedhumanumbilicalveinendothelialcensrespectivelyinvitrofortwohours.Andthen,Ang lIWRSaddedtobeincubatedfor18ho 山.Themierostructure.DNAladderandapoptoticrateof apoptotieeelswereobservedbytransmissionelectronmicroscope,agarosegelelectmphoresisandflow cytometer.ResultsTheapoptoticbodyinHUVECsinducedbyAngl1wasshowedundertransmission electronmicroscope.ComparedwiththegroupinducedbyAngII,thedisappearanceofDNAladderwas confirmedwhenXinxuekangwa$addedtothereactionsystemofcndotheliumapoptosis.Thelevelof DNAdisappearancewasassociatedwiththeconcentrationofXinxuekanginthereactionsystem.The higherconcentrationofXinxuekangwas,themoreevidentdisappearanceofDNAwas.Theapoptoticpeak intheleftofGIpeakdeclinedobviouslybyfloweytometer.ComparedwiththegroupofAng ?.the differenceissignificant<O.05),ConclusionXinxuekanghasanabilitytoinhibittheapopt osisof endotheliuminducedbyAng?. 【Keywords]XinxuekangEndothelialceUsapoptosisAgarosegelelectmphoresisFlowcyt ometer 细胞凋亡可发生于各组织细胞,对细胞的正常 分化成熟和发育具有重要的调节意义.实验研究表 明,血管内皮细胞凋亡具有促凝作用,能促发和加 重动脉粥样硬化病变[1].血管紧张素1I(Ang1I)对于 ? 基础研究? 血管内皮细胞呈浓度依赖性促进其凋亡[21,同时还 能增加内皮细胞或内膜的通透性,促进动脉粥样硬 化的形成[31. 地奥心血康是由我国特有的药用植物中提取