医学检验毕业论文-阴沟肠杆菌Ampc酶“纸片法”与“三维法”比较

医学检验毕业论文-阴沟肠杆菌Ampc酶“纸片法”与“三维法”比较 四川大学本科毕业论文 阴沟肠杆菌Ampc酶“纸片法”与“三维法”比较 医学检验专业 指导老师 学生 【摘要】:目的: 探讨诊断性试验“纸片法”是否可以在临床上应用于检测阴沟肠杆菌Ampc酶。方法: 用纸片法和三维法分别检测阴沟肠杆菌的Ampc酶 结果: 通过对34株阴沟肠杆菌产Ampc酶情况的统计学检验～“纸片法”与金标准“三维法”敏感度和特异度相差很大。结论: 诊断性试验 “纸片法” 与金标准“三维法”一致性差～不适合用于临床 诊断 【关键词】:纸片法 阴沟肠杆菌 三维法 Ampc酶 [Abstract] OBJECTIVE: We wanted to discover a simple means to investigate AmpC enzyme produced by Enterobacter Cloacae and give an aid to choosing proper medicines for patients. METHODS: We used the “modified three dimensional extract test” and “scrip method” separately investigate AmpC enzyme. RESULTS: through statistically analyzed data on 34 strains of Enterobacter Cloacae，the sensitivity and specificity of “scrip method” is badly different from that of “modified three dimensional extract test”. CONCLUSION: “scrip method” is not fit for clinical diagnostics . 阴沟肠杆菌广泛分布于自然界、人体皮肤、医院等环境，是医院感染的重要病原菌之一，随着广谱抗菌药物的大量应用，多重耐药的阴沟肠杆菌引起的严重感染日渐上升，此菌可产生BUSH I型头孢菌素酶(Ampc酶)，导致对多种B内酰胺酶抗菌药物的耐药。是阴沟肠杆菌对多种B内酰胺酶类抗生素耐药的主要机制，我们用纸片法检测实验室分离出来的34株阴沟肠杆菌的Ampc酶，以期用简便方法代替繁琐的三维方法，应用于临床。 【材料和方法】 1.1材料 1.11实验菌株 收集2004年10月28日—12月28日四川大学华西附一院微生物实验室分离出的34株阴沟肠杆菌。鉴定方法采用MicroScan WalkAway-40型自动微生物分析仪的NC21卡，完成各试验菌株的生化反应测定。 1.12标准菌株 1 标准菌株 菌 株 产 酶 E.cloacae 029 野生型(普通诱导型) E.cloacae 029M 去阻遏持续高产型 ATCC25922 大肠埃希菌标准菌株 以上菌株均由北京协和医院惠赠 1 四川大学本科毕业论文 1.13 纸片 头孢西丁 (Cefoxitin disc,FOX,OXOID) 纸片 批号: (30μg/片) 无菌纸片 1.14 培养基 M-H琼脂粉 肉汤 兔血平板 1.2方法 1.21 纸片法: 取相当于0.5麦氏单位的标准大肠埃希菌ATCC25922菌液，接种涂布于M-H平板，平板中心贴一FOX纸片，另取无菌纸片浸润0.5麦氏单位待测阴沟肠杆菌和对照菌株，贴于距离FOX纸片0.5mm处，24小时过夜，观察结果，倘若浸有菌液的纸片周围有大肠埃希菌生长，则产Ampc酶。 预期阳性结果: 1.23 粗酶提取物的制备 将细菌接种于10m1胰大豆蛋白陈肉汤，35?摇床200r,min振荡培养4,6h，4000rpm离心30min，去除上清液，收集沉淀于2m1的离心管，于一80?反复冻融5次，再用0(01mol,L的磷酸盐缓冲液(PH7(0)1(5m1悬浮，旋涡混匀，14000rpm，4?离心30min，弃沉淀，吸取上清液并划MH平板，培养阴性后保存于冰箱备用。 1.24 三维试验 在MH平板上涂布0.5麦氏单位的大肠埃希菌ATCC25922菌液，将头孢西丁纸片贴于平板中央，从距离纸边缘5mm处用灭菌刀片由里到外放射性地划一裂缝，在裂缝中加入40u1的待检菌粗酶提取物，以阴沟肠杆菌029和029M作为阴性和阳性对照，35?培养18—24h，如果头孢西丁纸片抑菌环有向内凹陷的现象或裂缝与抑菌环交界处出现扩大的长菌区域，提示产AmpC酶检测阳性。 【结果】 2.1 三维试验结果见图, 2 四川大学本科毕业论文 图3:去阻遏持续高产AmpC酶检测 结果示意图 狭缝内加入粗提酶40 μL “三维法”34株阴沟肠杆菌检出AmpC酶11株，检出率为32,，作为质控对照 的阴沟肠杆菌029M结果阳性，阴沟肠杆菌029结果阴性 表2 纸片法和三维法实验结果 编029M 029 14550 10030 10976 10606 13543 10230 10033 10040 14575 13592 号 纸+ - + + + + + - + + + + 片 三- - - - + + - - - + - + 维 编14318 13614 12718 13604 10090 42632 42634 43167 43390 43772 43699 44603 号 纸+ - + - - + + - - - + - 片 三- + - + - + - - - + - - 维 编44731 45749 46327 46149 46542 20646 4787 11463 11467 11391 11390 4340 号 纸+ + + + + - - - - - - - 片 三- + - + - - - - - - + - 维 3 四川大学本科毕业论文 表3 34株阴沟肠杆菌两种方法检测Ampc酶结果 三维法阳性 三维法阴性 合计 纸片法阳性 7 12 19 纸片法阴性 4 11 15 总计 11 23 34 2通过上面四格表，运用配对的x检验统计分析如下: H“纸片法”和“三维法”总体检出率相同，及B=C 0 H “纸片法”和“三维法”总体检出率不同，及B?C 1 α=0.1 已知b=12, c=4,b+c<40, 22 X=(|12-4|-1) /12+4=3.06 2差X界值表，得P<0.1,按α=0.1，拒绝H，接受H，差别有统计学意义 01 纸片法的准确度 AC=(7+11)/34*100%=53% 纸片法的敏感度 SN=7/7+4=64% 纸片法的特异度 SP=11/12+11=46% 因此，”纸片法”不适合用于临床实践 【讨论】 工作中用分子生物学检测AmpC酶还不现实，而用三维法检测AmpC酶，虽然准确度较高，但非常繁琐，因此我们用纸片法检测AmpC酶希望能找到更简便，而且可用于临床的方法，为临床合理使用抗生素提供依据。 然而我们在用纸片法检测AmpC酶时，方法非常不稳定，且失败三次之多，成功的一次，和金标准“三维方法”比较，准确度，敏感度和特异度都很差，说明纸片法检测AmpC酶，不适合应用于临床。 试验中，我们继续又探讨用粗酶提取物代替0.5麦氏单位待测阴沟肠杆菌和对照菌株，用来做“纸片试验”，结果16株菌都没取得很好效果。 4 四川大学本科毕业论文 【参考文献】 [1] 陈 勤 张 嵘 金亚平 张正良 朱百荣 周 俊 肠杆菌科细菌去阻遏持续高产AmpC酶的检测与ampD基因突变的研究 检验医学教育2003年3月第10卷第1期 [2] 周志慧 李兰娟 俞云松 裘云庆 马亦林 两种检测阴沟肠杆菌 Ampc 酶方法的比较 中华检验医学杂志 2002年 3 月第 25 卷第 2 期 [3] 原英 徐英春 陈民钧 介绍一种同时存在 Ampc 酶和超广谱B 内酞胺酶的检测方法 中国抗感染化疗杂志 2003 年 2 月 28 日第 3 卷第 1 期 [4] 陈民钧 细菌耐药检测 powerpoint [5] 刘江华 朱晓玲 戚琳 张学军 K—B法和三维分析法测定阴沟肠杆菌AmpC酶结果分析 中华医院感染学杂志2003年第13卷第4期 [6] 周志慧 李兰娟 俞云松 裘云庆 马亦林 两种检测阴沟肠杆菌Ampc酶方法的比较 中华检验医学杂志2002年3月第25卷第2期 5