几种表面活性剂及营养物对虫生真菌孢子萌发的影响

几种面活性剂及营养物对虫生真菌孢子萌发的影响 几种表面活性剂及营养物对虫生真菌孢子 萌发的影响 安徽农业大学,1996t23C3):335--359 JournalofAnhulAgricuhuralUniversity 几种表面活性剂及营养物 对虫生真菌孢子要的影响'主堂望皇宣刘玉珍 (安徽农业大学森林利用学院,台肥230036) / , /摘要研究了球孢白僵茵,全电干绿僵茵和耪扣青霉在吐温一80度6种不同的洗衣 /.耪中的分散性度活力(以发芽率计).蛄幕表明.3种真茵在这些表面活性剂中的4}'-R~m敷盖 异不五着.白僵茵和绿僵茵在不同琅度的吐疆--80液中的发芽率多显着高于不加表面活性 剂的对照,但蟑僵茵在0.2吐疆液中显着低于对照.多敷洗表耪显着抑制3种真茵的萌发, 但白僵茵在0.1%和0.05白猫牌无泡超琅精洗衣耪中发芽率与时J目【盖异不豆暑.在5和 2葡萄耱液,2扣1蛋白胨液中.白僵茵孢干在后者发芽率最高. 关键词. 查苎堕苎型吐沮洗表耪塑:墨生 . 绿僵菌(Metarhiziumanisopliae)及粉拟青霉(Paecilomycesfarinosus)等,其分生孢 子都是疏水性的,因之,给生产应用带来很多困难,为了降低其表面张力,增加其在水 中的分散度,常在水悬液中加人表面活性剂.目前实验室使用的几种表面活性剂,例如 吐温--80(Tween--80)和特里通一100(Triton--100)等,由于售价高,且有的(如特 里通)对孢子有较强的杀伤力,因而在防治实践中很难被大规模应用在农业害虫防治 中,不少地方在孢子粉中加人洗衣粉作为表面活性剂.由于洗衣粉对孢子杀伤情况不明, 很难确定这一方法正确与否.本实验针对这一问比较了几种洗衣粉对白僵菌,绿僵菌, 拟表霉等几种虫生真菌孢子萌发率及分散度的影响,并探讨了几种营养物对虫生真菌孢 子萌发的作用,以便为生产提供使用依据. 1和方法 1.1材科 1.1.1茁种白僵菌B2从安徽泾县马尾松毛虫(Dendrolimuspuncatatus)幼虫上分离; 绿僵菌QRS455自菲律宾揭稻虱(Nilaparvatalugens)上分离}粉拟青霉RS3自美国苹 天幕毛虫(Malacosmaamericana)上分离. ? 本文系国家"八五"攻关项目85—18一?一O2专题. 收稿日期}1996?02?28 安徽农业大学 l?l?2表面活性剂吐温--80,上海试剂厂产}芳草加酶高级洗衣粉,合肥日用化工总 厂产;白猫无泡超浓缩高级洗衣粉.上海合成洗涤荆厂产;白猫中泡高级洗衣粉,上海 合成洗涤剂厂产;五洲高级洗衣粉,上海合成洗涤剂厂产;芳草洗衣粉,合肥日用化工 总厂产;飞鹿洗衣粉,合肥El用化工总厂产. 1.2方法 1.2-1分散力的测定以上7种表面活性剂均配制为0.2,0.1和0.053种浓度, 加入各种真菌孢子经震荡后配成孢子悬浮液.摇匀后0min,10mln和30min分别用滴管 从悬浮液上,中,下3层取样,均匀滴于洁净的载玻片上(控制液滴大小基本相同).风 干后镜检,用血球计数板计数,按以下公式计算分散指数(I): Z一(:差;:样本平均数) 当I<l,孢子均匀分布;I一1,孢子随机分布}I>l,孢子聚集分布. l-2-2孢子萌发率的测定在配制好的表面活性剂中加入蛋白胨,使其均含1蛋白 胨,灭菌后分别加放3种菌的分生孢子,摇匀后再用吸管滴在洁净的载玻片上,置于铺 有湿滤纸的培养皿湿室悬滴培养,18h后放人冰箱,逐次检查各处萌发率. 1.2-3营养物对孢子萌发率的影响将配制的2,5葡萄糖液,1,2蛋白胨液及 2葡萄糖+1蛋白胨等5种营养液分别灭菌,按上法加放真菌孢子,并测定其孢子萌 发率. 以上结果均用Duncan氏新复极差法,在0.05水平下检验各处理的差异显着性. 2结果 2.1几种表面活性剂分散力的比较 根据分散公式,求得了各表面活性剂在不同浓度下的分散指数.从试验结果(表1) 可见,绝大多数处理中,I值均小于1.在白僵菌中.只有0.2芳草洗衣粉0min,0.2 白猫无泡洗衣粉10min以及在拟青霉中0.2芳草洗衣粉30min,分散指数I大于1,孢 子呈聚集分布.这说明以上几种表面活性剂对这几种虫生真菌的孢子均有良好的分散作 用,且随处理时间不同无明显变化趋势.各处理浓度分散度差别不明显.在3种虫生真 菌中.白僵菌分散指数最大,分散性较差,拟青霉次之,而绿僵菌分散指数最小,分散 性较强. 2.2几种表面活性剂对孢子萌发率的影响 在供试的7种表面活性剂(表2)中,吐温--80对白僵菌和绿僵菌孢子萌发率多显 着高于对照,仅0.2吐温对绿僵菌不显着地低于对照,其余各处理(除白猫无泡洗衣 粉 0.1,0.05对白僵菌与对照差异不显着外)皆低于对照.因此,供试的6种洗衣粉作 为虫生真菌的表面活性剂对孢子萌发都有显着影响.根据表2可计算得出各表面活性剂 对3种虫生真菌孢子的抑制率.从计算结果(表3)可以明显看出,吐温--80对白僵菌 和绿僵菌孢子基本没有伤害,甚至可以提高萌发率,因而是分散这两种真菌的良好表面 活性荆,但对粉拟青霉则抑制率高,不宜使用. 供试的6种洗衣粉多不同程度地抑制3种真菌孢子的萌发,但比较而言,以白猫无 泡超浓缩洗衣粉影响最小,芳草加酶洗衣粉次之,五洲洗衣粉影响最大. 23卷3期李增智等几种表面活性jf!I及营养物对虫生真菌孢子萌发的影响 7种表面活性剂对于粉拟青霉的孢子萌发抑制率都很高,最低达52.23,因之均不 适宜,为此还需另外寻找新的表面活性剂用于实验及生产. 从供试的3种浓度比较,总体来看.0.05%的浓度对孢子发芽影响最小,3种浓度问 的差异都显着.从6种洗衣粉比较来看,越是高浓度的洗衣粉,对孢子的萌发抑制作用 越强. 表13种虫生真菌在3种浓度的不同表面活性剂中的分散系数 rablelDispersalindicesof3fungiin3concentrationsofdlf[eremurfacta?ts 2.3营养糟对孢子萌发率的影响 供试的5种营养液均不同程度地提高了3种虫生真菌孢子的萌发率(表4).5种营 养液中,以2的葡萄糖+1的蛋白胨效果最好,与对照相比?白僵菌,拟青霉和绿僵 菌的孢子萌发率分别提高117.55倍,23.57倍和19?36倍.其中以对白僵菌效果最明显 在2种葡萄糖溶液中,2萌发率明显高于5葡萄糖液;在2种蛋白胨溶液中,2种浓 358安徽农业大学1996年 度差异不明显.蛋白胨对3种虫生真菌孢子萌发的影响明显高于葡萄搪的影响,这 反映 了虫生真菌对营养的基本要求.虽然氮源对于孢子萌发是主要的,但是碳源也是不可缺 少的,在碳氮源俱全的混合营养液中,孢子萌发率均明显高于单一的营养液. 清水不具备虫生真菌孢子萌发的基本营养要求,因之不能用于作为孢子萌发及与孢 子萌发有关试验(例如菌株的毒力测定) 表23种虫生真菌在不周表面活性剂中的萌发率 Table2Dispersalof3fungiindifferentsurfactants 洼:小写字母表示在n一0.05的水平上差异显着性. 表37种表面活性剂对3种虫生真菌孢子萌发抑制率 Table3lnhibltio~lof7surfactantsongermination0{3funs/ 23卷3期李增智等几种表面活性剂及营养物对虫生真菌孢子萌发的影响359 3讨论 (1)吐温--80是一种良好的非离子型表面活性剂,它不带电荷,但却是良好的乳化 剂,一方面因为它可以同水生成水化物而发生强烈的水化+弥补了在提高电荷方面的不 足}另一方面这种活性荆能形成坚固的界面保护膜.所以,它不仅可以降低悬浮液的表 面张力,提高孢子在水中分散度,而且能够促进某些真菌孢子的萌发.在白僵菌和绿僵 菌的田间作业和室内生物测定中,均可用其作表面活性剂,使用浓度为0.05. (z)洗衣粉的主要成分是十二烷基苯磺酸钠,在水中可以形成极性的磺酸基,是一 种阴离子表面活性荆,可以提高真菌孢子在悬浮液中的分散度.但是,除白猫无泡高级 超浓缩洗衣粉外,各种洗衣粉均对3种虫生真菌孢子萌发有明显的抑制,不宜使用.在 生产急需情况下,可以考虑用白猫无泡超浓缩洗衣粉作为白僵菌的表面活性剂,使 用浓 度以0.05为宜. (3)在l蛋白胨和z葡萄糖混合液中,3种虫生真菌的孢子的萌发率最高,因此 可作为实验室常规培养基使用. ImpactofSomeSur{actantsandNutritions onConidialGerminationofEntomogenousFungi LiZengzhiXuanYanLiuYuzhen (AnhuiAgriculturalUniversity.Heki230036) AbstractInthepresentstudy,thedisperselity,viability(intermsofgermination)of theconidiaofBeauveriabassiana+Metarhiziumanisopliae,andPaecilomycesfarinosusindif— ferentconcentrationsofTween一80and6commoncommercialpowderdetergents.There- suitsshowedthatthedifferenceofdispersMindicesoftheconidiaofthe3fungiinthesesur- factantswasnotsignificant.ThegerminationratesindifferentconcentrationsofTween—— 800fB.bassianaandM.anisopliaeweremostlyhigherthanincontrolnottreatedinany surfactantwithanexceptionofM.ani~opliaein0.ZTween一80lowerthancontro1.A1一 mostalldetergentsinhibitedthegerminationsignificantlyexceptB.bassianainlowconcen— tratlonofonedetergent.ConidiaofB.bassianain5liquidmedia,5andzglucose,z and1peptone,and2glucoseplus1peptoneresultedinthehighestgerminationof the3fungi. KeywordsSur[actantTween--80DetergentGerminationEntomogenousfungi