血清胸腺因子(FTS)对荷瘤小鼠干扰素、白介素-2分泌的影响
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血清胸腺因子,FTS,对荷瘤小鼠干扰
素、白介素-2分泌的影响
(作者:___________单位: ___________邮编: ___________)
【摘要】 目的 观察 FTS对提高荷瘤动物干扰素,IFN-ν,、
白介素-2,IL-2,分泌的影响。方法 对荷瘤动物皮下注射不同剂量的
FTS后,取其血清,测定血清中IFN-ν的含量,并测定其脾细胞在ConA
刺激下分泌IL-2的含量。结果 与对照组比, FTS 2.5mg/kg、
1.25mg/kg能够使荷瘤小鼠血清中的干扰素含量显著提高,P0.01,,
同时也使脾细胞分泌IL-2的能力提高。结论 FTS能够刺激机体提高
分泌细胞因子的能力,对抗肿瘤有着积极的作用。
【关键词】 血清胸腺因子 干扰素 白介素-2 抗肿瘤
【Abstract】 Objective Observation the FTS to enhance the Dutch lump animal IFN-ν,IL-2 secretion influence.Methods After Dutch lump animal hypodermic injection different dosage of FTS, takes its blood serum, in the determination blood serum IFN-ν the content,
and determines its spleen cell to secrete IL-2 under the ConA stimulation the content. Results With the control group compared to,
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FTS 2.5 mg/kg, 1.25 mg/kg can cause in the Dutch lump mouse in
blood serum of the interferon content remarkable enhancement ,P
0.01,, simultaneously also causes the spleen cell to secrete IL-2
ability enhancement. Conclusion FTS can stimulate organism
enhancement secretory cell factor ability, the resistance tumor has
the positive function.
【Key words】 FTS; IFN; IL - 2; anti-tumor
据报道,血清胸腺因子,Thymulin,FTS,来源于胸腺组织,其氨
基酸序列为NH2/Glu-Ala-Lys-Ser-Gln-Gly-Ser-Asn,是一类小分子
肽,1,,对参与获得性和先天免疫的细胞FTS都能产生作用,2,,
在鸡模型中,FTS能参加IL-2R的
达,特别对CD4+ 细胞,它也
影响人IFN-ν受体的表达,使细胞更易被细胞因子刺激,3,,本文通
过研究FTS对荷瘤动物分泌IFN及IL-2的影响,了解FTS对免疫低
下机体的细胞因子的作用,从而为国内进一步研究FTS在抗肿瘤方
面的应用打下良好的基础。
1 材料与方法
1.1 药物与试剂 血清胸腺因子,FTS, ,批号060821,由深圳
市翰宇生物工程有限公司提供,其纯度为96%,冻干粉末,冷冻保存,临
用前取FTS 1mg,加1ml消毒生理盐水稀释为1mg/ml的原液,供
皮下注射用。阳性对照药为胸腺肽,冻干粉末,200mg/支,黑龙江迪
龙药业有限公司提供,批号20061001,小鼠干扰素-γELISA试剂盒,
晶美生物工程有限公司提供,批号20060529,刀豆蛋白A,ConA,,
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SIGMA公司提供,浓度为10μg/ml和30μg/ml,MTT,SIGMA公司提供,使用浓度为5mg/ml,20μl/孔。
1.2 瘤株 小鼠H22,取接种于小鼠的腹腔第7天的瘤株,配成106/ml瘤细胞悬液,接种于小鼠前肢腋窝皮下0.2ml/鼠。
1.3 动物 实验用体重18,20g的SPF级雄性昆明小鼠,C57 BL/6小鼠,6,8W 雄性,动物合格证号,SCXK京,2005-2006,,均由中国药品生物制品检定所实验动物中心提供。饲养观察2天后使用。实验动物室为无菌空气二级过滤,人工日光灯12h自动照明,恒温、恒湿送风,温度22,24?,相对湿度40%,45,。鼠笼具为塑料盒,不锈钢丝盖。
1.4 荷瘤动物模型 用18,20g的昆明小鼠皮下注射H22瘤株,24h后小鼠随机分组用于实验。
1.5 给药方法 分别取荷瘤小鼠,健康动物及免疫缺陷型动物各50只,均分为5组,分别按高、中、低3个剂量注射FTS,对照组注射NS,用胸腺肽做阳性对照,均皮下注射给药,每日给药1次,共给药14天。
1.6 小鼠IL-2的产生 将给药后的小鼠断颈放血,取脾置于无血清RPMI-1640培养液中去杂质,研磨成单个细胞后用100目筛及200目筛过滤,将滤液1000rpm,5min离心,取上清,除红细胞后,用无血清RPMI-1640培养液洗1次,最终用含10%小牛血清的RPMI-1640培养液配成0.5×107/ml,加入24孔细胞培养板中500μl/孔,同时加入等体积的ConA,10μg/ml,,37?,5%CO2,培养
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24h,取出2500rpm,20min离心,收取上清,除菌后,-20?保存备用。
1.7 小鼠胸腺细胞的制备 将C57 BL/6小鼠断颈放血,取胸腺置于无血清RPMI-1640培养液中去杂质,研磨成单个细胞后用100目筛及200目筛过滤,将滤液1000rpm,5min离心,去上清,除红细胞后,用含5% 小牛血清的RPMI-1640培养液洗二次,最终用含10%小牛血清的RPMI-1640培养液配成1.0×107/ml。
1.8 小鼠血清的制备 将给药后的小鼠从眼静脉丛取血,待凝固后分离血清,-20?保存备用。
1.9 检测指标 用酶标仪测定各组的OD值,IFN-ν测定用490nm,MTT测定用550nm。实验数据用x?s表示,组间比较用t检验。
2 结果
2.1 FTS对荷瘤小鼠IFN-ν分泌的影响 将给药后的小鼠血清稀释5倍和10倍,按IFN-νELISA测定试剂盒的要求,测定每个小鼠血清IFN-ν的含量,10倍稀释后的血清比5倍稀释后的血清测定结果要高,结果见表1。表1 荷瘤小鼠血清,10×,IFN-ν的含量注,与对照组比较,*P0.05, **P0.01,与胸腺肽比,??P0.01
由表1可见,与NS组比较,FTS 2.5mg/ml、1.25mg/ml可以极显著地增强荷瘤小鼠IFN-ν的分泌,P0.01,,比胸腺肽的刺激作用强,P0.01,。
2.2 FTS对荷瘤小鼠IL-2分泌的影响 将含IL-2的样品倍比稀释后加入96孔细胞板,100μl/孔,每稀释度3个复孔,再加入ConA, 30
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μg/ml,,20μl/孔,同时设ConA对照和培养液对照,培养72h,培养结束前4h加入MTT,按MTT测定法在550nm测OD值,结果见表2。 表2 FTS对荷瘤小鼠IL-2分泌的影响 由表2可见,与NS组比较,FTS 2.5,0.63mg/ml可以极显著地增强荷瘤小鼠IL-2的分泌活性,而胸腺肽与对照组比差异有显著性,但是比FTS要弱。
3 结论
生物反应调节剂是继三大常规手段,手术、放疗、化疗,治疗恶性肿瘤后的又一新的手段,4,,细胞因子是生物反应调节剂中最活跃的一群,大量资料表明,干扰素和白介素-2能够促进NK细胞的杀伤活性,抑制肿瘤细胞生长,是重要的抗肿瘤细胞因子,5,。从本文实验结果中看出,通过给荷瘤小鼠注射血清胸腺因子,FTS,,可以提高机体分泌干扰素、白介素-2的能力,P0.01,,从而加强了机体的抗肿瘤能力。胸腺肽是目前常用的免疫增强剂,大量用于肿瘤病人术后的治疗中,6,,从本文的实验中可以看出,FTS对细胞因子的激活能力比胸腺肽要强得多,P0.01,,但有效剂量要小52倍,所以将FTS开发成抗肿瘤新药是很有发展前景的,生物治疗已成为21世纪肿瘤治疗的主要方向和潮流,无疑可以在肿瘤综合治疗中发挥更重要的作用。
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FTS, attenuates cisplatin nephrotoxicity by suppressing
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