黑泥对小鼠皮肤胶原蛋白和毛发生长的影响

黑泥对小鼠皮肤胶原蛋白和毛发生长的影响 黑泥对小鼠皮肤胶原蛋白和毛发生长的影 响 第35卷第2期 2005年4月 日用化学工业 ChinaSurfactantDeter~ent&Cosmetics Vo1.35No.2 April2005 黑泥对小鼠皮肤胶原蛋白和毛发生长的影响 邵邻相,巩菊芳,赵安尔,姚飞跃 (浙江师范大学化学与生命科学学院,浙江金华321004) 摘要:研究黑泥对小鼠皮肤和毛发生长的作用.将黑泥涂抹于小鼠脱毛皮肤部位,观察涂抹部位毛发生长 情况,35d后取涂抹部位皮肤,测定SOD活性,胶原蛋白和丙二醛量,扫描电镜观察毛发表面结构.结果 表明:黑泥能明显增加小鼠皮肤中胶原蛋白的量,提高皮肤中SOD的活性,有降低皮肤中I大j二醛量的趋 势,促进毛发生长,增加毛发表面光滑度.黑泥具有延缓皮肤衰老,促进毛发生长和提高毛发质量的作用. 关键词:化妆品添加剂;黑泥;皮肤;毛发;胶原蛋白;超氧化物歧化酶 中图分类号:TQ658;0629文献标识码iA文章编号:1001—1803(2005)02—0088一o3 黑泥是取自山西运城盐湖的天然矿物泥,其主要 成分为硫酸盐,硅酸盐,氯化物等.以色列黑泥的成 分以氯化物为主,加入硫酸盐,用于治疗风湿性关节 炎和皮肤病等慢性疾病…1.在国外,除了对治疗一些 慢性疾病有研究外,黑泥在化妆品方面也有一定的研 究.MaorZ和YehudaS[2J的研究表明黑泥能使皮肤表 面变得更加光滑.国内对黑泥的研究很少,在化妆品 中应用更少.因此,黑泥具有研究意义和开发价值. 1和方法 1.1材料,试剂与仪器 黑泥由运城南风洗涤化妆品有限公司提供;ICR 小鼠,清洁级,由金华市实验动物饲养中心提供.硫 代巴比妥酸(TBA),邻苯三酚为Sigma公司产品;羟 脯氨酸,氯胺T,过氯酸,对二氨基苯甲醛和乙二胺 四乙酸二钠等均为国产分析纯.7521紫外分光光度 计;Beckman低温高速离心机. 1.2动物处理 ICR小鼠72只(7周,8周,23.2g4-2.6g),雌 雄各半.先分雌雄,按体重随机分为A,B,c和D 组.A组分为2小组(12只/组),Al组雌鼠,A2组 雄鼠;B组分为2组(12只/组),B1组雌鼠,B2组 雄鼠;C组(12只)雌雄各半;D组(12只)雌雄 各半.饲养在小鼠IVC独立通气笼具中,自由饮食. 小鼠背部脱毛,暴露约4cm2皮肤,A组为涂质 量分数70%黑泥的对照组,需在脱毛处涂水;B组 小鼠涂质量分数为70%黑泥,每次涂上黑泥15min后 用清水洗净,每隔2d涂1次,共12次;C组为涂质 量分数5%黑泥的对照组,需涂质量分数为15%甘 油;D组涂质量分数为5%黑泥(内含l5%甘油), 1次/d.小鼠经涂黑泥35d后处死,立刻取涂抹部位 皮肤用于测定SOD活性,胶原蛋白和丙二醛的量. 1.3胶原蛋白的测定 小鼠皮肤中胶原蛋白量的测定,按文献[3]中 的方法进行. 1.4SOD活性和丙二醛量的测定 小鼠处死后,迅速取暴露部位皮肤.按1:1Q, (1破肤组织加入l0rnI蒸馏水)匀浆.取100匀浆 液用于丙二醛量的测定;一部分在4?下 10000r?min离心10min,上清液用于s0D活性的 测定.邻苯三酚自氧化法-4J测定SOD的活性;MDA— TBA比色法测定丙二醛的量. 1.5毛发长度评分及测量 按文献[6]法对小鼠进行毛发长度评分及测量. 自涂黑泥后,每日对每只小鼠脱毛区新毛生长状况评 分1次,连续观察16d.评分标准:无毛生长,0分; 浅毛生长满脱毛区,1分;新生毛长度及密度为未脱 毛区的一半,2分;新毛生长与未脱毛区无差别,3 分.涂黑泥试验第16d,每只小鼠背部脱毛区相同位 置取毛l0根,放大镜下用游标卡尺量长度. 1.6扫描电镜观察 取涂黑泥试验第16d小鼠毛发,用无水乙醇清 收稿日期:2OO4—06—25;修回日期:2004—11—18 基金项目:浙江师范大学横向课资助项目(200406) 作者简介:邵邻相(1962一),男(汉),浙江人,副教授,硕士,联系电话:(0579)2283400. ? 88? 第2期邵邻相等:黑泥对小鼠麈原堡自墨生堡 洗,自然干燥,粘在有双面胶的样品载物台上,SBC—II 离子溅射仪中进行真空喷镀,置于KYKY一1000B扫描 电子显微镜下观察.通过WD一5扫描电镜联机图像分 析系统,在1000倍,2000倍下数码拍照,电脑保存. 1.7统计方法 统计数据用Excel软件进行t检验. 2结果 2.1黑泥对小鼠皮肤中SOD活性和丙二醛量 的影响 由表1可见,涂质量分数为7O%黑泥组和5% 黑泥组小鼠皮肤中SOD活性与各自的对照组比较, 有明显增加的趋势.其中,涂7O%黑泥雌性小鼠皮 肤中SOD活性明显高于对照组.与各自的对照组比 较,涂7O%和5%黑泥的小鼠皮肤中丙二醛量有降 低的趋势.说明黑泥对小鼠皮肤具有抗衰老的作用. 表1黑泥对小鼠皮肤中SOD和丙二醛的影响(n=12,?S) Tab.1EffectsofblackmudonSODactivityandMDA contentinskinofmice(n=12,?S) 注:1)与对照组旱比较,P<0.05. 2.2黑泥对小鼠皮肤中胶原蛋白的量和黑泥 对小鼠毛发生长的影响 由表2知,涂质量分数70%黑泥组和5%黑泥组 的小鼠皮肤中羟脯氨酸和胶原蛋白量都明显高于各自 对照组(P<0.05).提示黑泥有延缓皮肤衰老的作用. 表2黑泥对小鼠皮肤中胶原蛋白质量分数的影响 (n=12,?S) Tab,2Effectsofblackmudoncollagencontent,inskin ofmice(n=12,互?S) 注:1)与对照组早比较,P<0.05;2)与对照舍比较,P<0.01 3)与对照组(15%甘油)比较,P<0.05 与 涂黑泥第16d对小鼠新生毛长度测量结果见表 3.质量分数7O%黑泥组雌性小鼠新生毛长度明显高 于对照组(P<0.05);70%黑泥组雄性小鼠新生毛 长度更明显高于对照组(P<0.01);5%黑泥+ 15%甘油组小鼠新生毛长度比对照组也有增长的趋 势.通过毛发长度评分,来衡量脱毛区新生毛的生长 过程(图1),也表明黑泥能促进小鼠新生毛的生长. 表3黑泥对小鼠毛发生长的影响(n=12,?) Tab.3Effectsofblackmudonhairgrowthinmice(n=l2,?s) 组别长度/em 对照早 70%黑泥早 对照舍 70%黑泥舍 对照(15%甘油) 5%黑泥+l5%甘油 0.86?0.20 0.91-t-O.16) 0.12 0.63? 0.75?0162) 0_86?0.19 0.87?0.18 注:1)与对照组旱比较,P<0.05;2)"fjj组比较,P<0.001. +70%黑泥 +70%黑泥S — e-对照组(水) 一对照组(水)S +5%黑泥+15%甘油一对照组(15%油 图1黑泥对小鼠毛发生长过程的影响 Fig.1Effectsofblackmudonhairgrowthprocessinmice 2.3小鼠新生毛发的表面结构 通过扫描电镜观察,对照组雄性小鼠毛鳞片形状 不规则,表面较粗糙,有裂痕,边缘有不同程度的缺 刻(图2中A,对照鼠毛,×1000);涂质量分数 7O%黑泥的雄性小鼠毛鳞片尖部呈等腰三角形,底 部宽度大于尖部,表面较光滑,毛鳞片边缘较平滑 (图2中B,7O%黑泥舍鼠毛,×1000).对照组 (涂l5%甘油)雄性小鼠毛鳞片呈尖顶的等腰j角 形,表面粗糙并且有一定程度的缺失,边缘有许多齿 轮状的缺刻(图2中C,对照(15%甘油)鼠毛, ×1ooo);涂5%黑泥(含15%油)的雄性小鼠毛鳞 片呈尖顶的等腰三角形,毛鳞片问有较浅的沟槽窄隙, 表面较光滑,边缘较平滑(图2中D,5%黑泥+ 15%甘油鼠毛,×1000).黑泥对雌性小鼠表面结构 ? 89? 与日用化学工业第35卷 的作用与对雄性小鼠的作用相似(图片省略). —?? 一 3讨论 ??I一 ??—一 一图2扫描电镜图 Fig.2Scanningelectronmicroscope 细胞氧化代谢产生的超氧阴离子自由基是引起机 体衰老的主要因素之一.自由基是一类高活性的物 质,可直接或间接发挥氧化剂的作用,损伤生物膜成 分或生物大分子,从而影响膜的结构和功能.自由基 氧化细胞膜上的不饱和脂肪酯形成过氧化脂质,过氧 化脂质经过氧化分解生成丙二醛,丙二醛与蛋白质, 肽类或脂类聚合,交联形成脂褐素(老年色素)堆积 在溶酶体中,引起细胞的衰老和死亡.SOD是体内重 要的抗氧化酶,能清除超氧负离子自由基,从而保护 机体细胞和组织不受损害,延缓机体衰老进程J.实 验结果表明:黑泥能提高SOD的活性,具有降低丙 二醛量的趋势,说明黑泥具有延缓皮肤衰老的作用. 哺乳动物和人类皮肤的老化与皮肤中羟脯氨酸和 胶原蛋白的量有着密切的关系,随着年龄的增长,皮 肤中羟脯氨酸和胶原蛋白的量逐渐降低,使皮肤显得 干燥,产生皱纹,失去弹性和光泽J.实验结果表 明:黑泥能明显增加皮肤中胶原蛋白的量,说明黑泥 具有延缓皮肤衰老的功效. 黑泥能提高毛发的生长速度,而且能减少毛鳞片 边缘的缺刻,增加毛发的光滑度,使毛发更有光泽, 说明黑泥具有促进毛发生长和提高毛发质量的作用. 实验中也观察到,由于小鼠的性别差异,黑泥使 用剂量的轻重以及黑泥作用时间的不同,使得皮肤中 SOD活性和丙二醛的量与对照组比较不具有统计学的 意义,这也说明,虽黑泥具有延缓皮肤衰老的作用, 但也需要一定的剂量和一定的作用时间才能发挥效 用. 参考文献: l1JHALEVYS,SUKENICS.Differentmodalitiesofspatherapyforskin diseaseattheDeadSeaarea[J].ArchivesofDermatology.1998,134 (11):1416—1420. L2jMAORZ,YEHUDAS.Sksros~thingeffectsofDeadSeamhxerals: ComparativepmfilometricevaluationofskinsurfacelJJ.Intemational JournalofCosmeticScience,1997,19(3):105—110. [3]邵邻相,赵铁军.佛手提取液对小鼠皮肤胶原蛋白含量影响的研 究[J].13用化学工业,2003,33(3):157—162. [4]谢卫华,姚菊芳,袁勤生.邻苯j酚自氧化测定超氧化物歧化酶 活性的改进[J].医药工业,1988,19(5):217—219. [5]李仪奎,王钦茂.中药药理实验方法学(第一版)[M].上海: 上海科学技术出版社,1991.203—204. [6]陈勤.中药美容保健品的研究与开发[M].北京:中国医药科 技出版社,1991.205—206. 7]方允中.自由基生命科学进展[M].北京:原子能出版社, 1993.46—51. [8]陈勤.中药美容保健品的研究与开发[M].北京:中国医药科 技出版社,1999.152—155. Effectsofblackmudoncontentofcollagenofskin andgrowthofhairinmice SHA0Lin-xiang,GONGJu—fang,ZHA0An-er,YA0Fei-yue (CollegeofChemistryandLifeScience,ZhejiangNormalUniversity,Jinhua321004,China) Abstract:I1heeffectsofblackmudonthecontentofcollagenofskinandthegrowthofhairofmicewerestudied.Theskin onthebackofmicewasshavedtopicallyandsmearedwithblackmudfor35d.Thentheactivityofsupemxidedismutase (SOD),thecontentofmalondialdehyde(MDA)andcollagenintheskinofmiceweremeasuredandthesurfacestructureof hairwasobservedusingSEM.TheresultsshowthatthecontentofcollagenandtheactivityofSODinskinofmicealeobvi. ouslyincreased,andthecontentofMDAinskinofmicehasadecreasingtendency.Italsosignificanflypromotesthegrowth ofhair,andimprovessmoothnessofthehairofmice. Keywords:additivesofcosmetics;blackmud;skin;hair;collagen;supemxidedismutase ? 90?