【word】 PPARγC161-T基因多态性与冠脉粥样硬化的相关性

【word】 PPARγC161-T基因多态性与冠脉粥样硬化的相关性 PPARγC161-T基因多态性与冠脉粥样硬化 的相关性 心脏杂志(ChinHeartJ)2007,19(4)?431? PPAR~C161一T基因多态性与冠脉粥样硬化的相关性 张英梅.,李兰荪.,陆松鹤,苏海霞,沈敏.,张殿新.,王海昌. (第四军医大学:1.西京医院心内科,2.军事预防医学系流行病学教研室,陕西西安710032) 摘要:目的明确冠状动脉硬化患者过氧化物酶体增殖物激活受体(PPAR)C161.T基因多态性与冠状动脉狭窄 的关系.检测161例冠状动脉硬化患者和103名正常对照的血压,体质量指数(BMI),腰围,血脂,空腹血糖 (FBG),餐后2h血糖(2hBG),聚合酶链反应限制性片断多态性方法测定PPARC161-T基因多态性.结果冠状 动脉硬化组腹围,显着高于对照组(P<0.01).2hBG亦高于对照组(P<0.05),冠状动脉硬化组PPAR~/CC型显 着高于对照组(P<0.05),CT型显着低于对照组(P<0.01).结论PPARC161-T与冠状动脉粥样硬化有关联. 关键词:冠状动脉粥样硬化;过氧化物酶体增殖物激活受体;基因多态性 中图分类号:R541.4文献标识码:A文章编 号:1009-7236(2007)04-431-03 Relationshipbetweenperoxisomeproliferatorsactivatedreceptorgamma C161-Tgenepolymorphismandcoronaryarteryatherosclerosis ZHANGYing—mei,LILan-31.in,LUSong-he,SUHai—xia,SHENn,ZHA NGDian—xin,WANGHai— chang (DepartmentofCardiology,XijingHospital,FourthMilitaryMedicalUniversity,Xian710033, Shaanxi,China) Abstract:AIMTostudywhetherPPAR’yC161-Tpolymorphismwasassocia tedwithcoronaryartery atherosclerosis.METHODSPolymerasechainreactionrestrictedfragmentslengthpolymorphismWas usedtostudythedistributionofthePPAR’yC161一 Tpolymorphismin161coronaryheartdisease(CHD) patientsand103normalcontrols.RESULTSWaistlinewassignificantlyhigherinCHDpatientscom— paredwiththoseincontrol(P<0.01)while2hBGwassignificantlyhigherinCHDpatients(P< 0.05).ThefrequenciesoftheCCweresignificantlyhigherinCHDcomparedwiththoseincontrol(P< 0.05)whilethefrequenciesoftheCTweresignificantlylowerinCHDpatients (P<0.01). CONCLUSIONPPAR,yC161-Tpolymorphismisassociatedwithgenesisa nddevelopmentofcoronary arteryatherosclerosis. Keywords:coronaryarteryatherosclerotic;peroxisomeproliferatorsactivat edreceptor;genepolymor- phism 过氧化物酶体增殖物激活受体(PPAR)是一种 甾体激素受体,是能被脂肪酸样化合物过氧化物酶 体增殖剂和脂肪酸激活的核转录因子,属于配体激 通讯作者:李兰荪,主任医师,教授,主要从事冠心病的诊断 及治疗研究Email:Lilansun@sina.COIltl 作者简介:张英梅,住院医师,硕士生 Email:zhangym197951@126.com 活的核受体超家族成员之一.PPAR.y具有多种生 物学效应,在脂肪细胞分化,糖,脂代谢,动脉粥样硬 化(AS)形成,炎性反应中起重要作用.人动脉硬化 缺损处有PPAR.y达,而正常动脉PPAR.y表达极 少?J,在早期动脉硬化病变中可见PPAR.y在血管平 滑肌细胞中高表达,提示PPAR’y参与AS的病理过 程j.但PPAR,yC161一T与冠状As的发生,发展是 心脏杂志(ChinHeartJ)2007,19(4) 否有关联尚无报道. 1对象和方法 1.1对象选取2005年11月,2006年4月在西 京医院心脏内科行冠状动脉造影检查的年龄45, 7O岁患者,将病例之间无亲缘关系,急性炎症,感染 或创伤,严重肝肾功能不全及应用激素者排除本实 验后,纳入本实验的研究对象共计264例.将研究 对象分为两组:冠状动脉硬化组和正常对照组.冠 状动脉硬化组纳入标准:直径法测量主要冠脉1支 或1支以上狭窄I>50%.冠状动脉硬化组患者161 (男105,女56)例,年龄(534-15)岁.对照组纳入 标准:直径法测量所有主要冠脉狭窄<50%.正常 对照组共计103(男65,女38)例,年龄(524-16)岁. 两组之间性别,年龄均无显着差异. 1.2临床指标的检测所有受试者测血压,体质 量,体质量指数(BMI),腰围,三酰甘油(TC),总胆 固醇(TG),高密度脂蛋白(HDL.C),低密度脂蛋白 (LDL-C),空腹血糖(FBG),餐后2h血糖(2hBG). 1.3冠状动脉造影方法常规经股动脉或桡动脉 途径.左冠状动脉至少投照4个体位,右冠状动脉 至少投照2个体位. 1.4PPAR~/基因多态性检测基因多态性检测采 用PCR限制性片断长度多态性(PCR.RFLP):取肘 静脉血2ml,注入5Ol肝素抗凝离心管,摇匀,离 心后取细胞成分采用天为时代DNA提取试剂盒进 行DNA抽提(得DNA产物7O1).PPAR基因型 的测定:以基因组DNA作为模板进行PCR扩增, PCR引物序列根据Premer3Output软件设计,上游 引物5TGAATGTGAAGCCCA1TrGAA3;下游引物: 5GAGCGGGTGAAGAAGACTCATG13(引物由北京 三博生物公司合成).PCR反应体系25l,10× PCR缓冲液25l,上游引物和下游引物(10ixmol/ L)各1Ixl,DNTPs(10mmol/L)2,基因组DNA 0.5Ixg,Tag聚合酶1.25u(1U=16.67nkat). PCR循环参数按94~C5min;94~C45s;53?45s; 72?45s,35循环;72~C5min扩增目的基因.限制 性内切酶PamcI酶切PCR产物:PCR产物lOl, 内切酶PaineI1.5l,10×缓冲液2l,37?消化 16h.30g/L琼脂糖凝胶电泳,以Marker作为DNA 片断大小的标准物,5OV恒压电泳40min.经特异 性限制内切酶消化后,紫外观测电泳条带分子量 CC:150,50bp;CT:200,150,50bp;Tr:200bp.等 位基因频率计算采用平衡法:C=CC+1/2CT;T= 1Tr+l/2CT 1.5统计学分析计量资料以4-s表示,两组间 比较采用t检验;多组间各项指标比较采用单因素 方差分析,两两比较用LSD检验;基因型及等位基 因频率用x检验,相关因素采用logistic逐步回归 分析;所有数据采用SPSS13.0软件进行分析,以Jp ?O.05定义为有统计学意义. 2结果 2.1一般临床资料冠状动脉硬化组腹围(P< 0.01),2hBG(P<0.05)均显着高于对照组,其余无 显着性差异(见表1). 表1冠状动脉硬化组与对照组生化指标比较(?s) 与对照组比较,P<0.05,P<0.0l.1mmHg=0.133kPa. 2.2冠状动脉硬化组与对照组的PPAR基因型的 比较两组基因型均以CC型为主,CT型次之,两 组比较基因型分布有显着性差异(P<0.05).冠状 动脉硬化组CC型频率显着高于对照组(P<0.05), CT型显着低于对照组(P<0.01,见表2).冠状动 脉硬化组等位基因c,T的频率分别为86.4%和 13.6%,对照组等位基因C,T的频率分别为8O.1% 和19.9%,两组之间c,T频率无显着差异. 表2冠状动脉硬化组与对照组PPAR,/基因型分布比较 [例(%)] 与对照组比较,P<0.05,P<0.0l. 2.3冠状动脉狭窄与PPAR~/基因多态性的关系 心脏杂志(ChinHeartJ)2007,19(4)?433? 以冠脉狭窄程度是否?50%为因变量,以性别,年 龄,收缩压,舒张压,FBG,2hBG,TG,TC,LDL—C, HDL—C和PPAR~/基因型等为自变量,采用逐步lo— gistic回归方法筛选出冠状动脉硬化独立的危险因 素,在Ot=0.05的水平上,拟合主效应模型,由表3 表3与冠状动脉硬化相关的多因素logistic回归分析结果 可以看出入选主效应模型的变量包括腹围,年龄,收 缩压,2hBG,FBG,CT基因型,LDL.C,TG,它们即为 排除混杂后与冠状动脉硬化发病显着相关的独立危 险因素(见表3). 3讨论 人类PPA脚基因定位于染色体3p25,含有9个 外显子,6号外显子全长249bp,其中的第159,164 位基因序列为CACGTG,是限制性核酸内切酶Pamc I的识别位;当第161位的C突变为T后,PamcI 酶不能识别并酶切该处.PPAR基因在调节胰岛 素作用,糖及脂肪代谢,及脂肪细胞的特异性分化中 发挥重要作用,目前正成为当今研究热点.目前已 有多项研究观察了不同PPAR基因多态型与糖尿 病,肥胖,高血压的关系.有研究发现PPAR基因 Pro12Ala及C1431T变异者体重指数增加—J. PPAR其他位点基因多态性与肥胖,胰岛素抵抗相 关已有较多报道_5J.Schneider等还发现PPAR Pro12Ala基因多态性与体内脂蛋白脂肪酶活性有 关.最近研究表明PPAR~,C161一T与颈AS程度相 关].目前已有研究表明PPAR基因其他位点如 Prol2Ala与冠状动脉硬化明显相关.以上的研究 均表明PPAR~,C161一T基因多态性可能与冠状AS有 关.本研究结果显示PPAR~/C161一T变异杂合子cT 基因型在冠状动脉硬化组显着低于对照组,而CC 基因型则明显高于对照组,基因型的不同可以作为 冠状动脉硬化的独立影响因素.总之,本研究发现 PPAR~,C161一T基因变异在冠状AS的发生,发展过 程可能起重要作用. 参考文献: [1]MarxN,SukhovaG,MurphyC,eta1.Macroph~esinhumanather- omaContainPPAR:differentiation—dependentperoxisomalprolifera— tots—activatedReceptor一(PPAR一)expressionandreductionof MMPOactivitythroushPPAR3’activatedinmononuclearphagocyte invitro[J].AmJPathol,1998,153(1):l7—23. [2]LawRE,GoetzeS,XiXP,eta1.ExpressionandfunctionofPPAR一 inratandhumanvascularsmoothmu$clecells[J].Circulation, 2000,101(11):1311—1318. [3]DoneyA,FischerB,FrweD,ela1.HaplotypeanalysisofthePPAR3’ Prol2AlaandC1431Tvariantsrevealsopposingassociationswith bodyweight[J].BMCgenet,2002,3:21. [4]LeiHH,ChenMH,YangWS,eta1.Peroxisomeproliferators—acti— vatedreceptorgammaProl2Alagenevariantisstronglyassociated withlargerbodyssintheTaiwanesc[J].Meta~lism,2000,49 (1O):1267—1270. [5]WeissEP.Endurancetraining—inducedchangesintheinsulinre— sponsetooralgluco~areassociatedwiththeperoxisomeproliferator— activatedreceptor—gamma2Prol2Alagenotypeinmenbutnotin women[J].Metabolism,2005,54(1):97—102. [6]SchneiderJ,KreuzerJ,HamannA,Theproline12alaninesubstitu— tionintheperoxisomeproliferator-activatedreceptor—gamma2gene isassociatedwithlowerlipoproteinlipaseactivityinvivo[J].D/abe— tes,2002,51(3):867—870. [7]闫振成祝之明沈成义,等代谢综合征PPAR3’C-161T基因多态 性与颈动脉损害的相关研究[J].中华医学杂志,2004,84(7): 543—547. [8]PischonT,PaiJK,MansonJE,eta1.Peroxisomeproliferator—acti— ratedreceptor一3’P12Apolymorphismandriskofcoronaryheartdisea— seinUSmenandwomen[J].ArteriosclerThrombVascBiol,2005, 25(8):1654—1658. (收稿日期:2006—10—12;接受日期:2006?11-06)