影响酶促反应的因素实验报告

影响酶促反应的因素 实验报告-不同因素对酶的影响 实验报告 课程名称:生物化学实验(甲) 指导老师: 成绩: 实验名称:酶的基本性质实验——底物专一性剂、激活剂和抑制、最适温度 实验类型: 分离鉴定实验同组学生姓名:一、实验目的和(必填) 三、主要仪器设备(必填) 五、实验数据记录和处理 七、讨论、心得 二、实验和原理(必填) 四、操作方法和实验步骤 六、实验结果与分析(必填) ?.酶的基本性质——底物专一性 一、实验目的和要求 1. 了解酶的专一性。2. 掌握验证酶的专一性的基本原理及方法。3. 学会排除干扰因素，设计酶学实验。二、实验基本原理 酶是一种具有催化功能的蛋白质。酶蛋白结构决定了酶的功能——酶的高效性，酶催化的 反应(酶促反应)要比相应的没有催化剂的反应快103-1017 倍。 酶催化作用的一个重要特点是具有高度的底物专一性，即一种酶只能对某一种底物或一类底物起催化作用，对其他底物无催化反应。根据各种酶对底物的选择程度不同，它们的专一性可以分为 下列几种: 1.相对专一性一种酶能够催化一类具有相同化学键或基团的物质进行某种类型的反应。2.绝对专一性:有些酶对底物的要求非常严格只作用于一种底物，而不作用于任何其他物质。如脲酶只能催化尿素进行水解而生成二氧化碳和氨。如麦芽糖酶只作用于麦芽糖而不作用其它双糖，淀粉酶只作用于淀粉，而不作用于纤维素。3.立体异构专一性有些酶只有作用于底物的立体异构物中的一种，而对另一种则全无作用。如酵母中的糖酶类只作用于D-型糖而不能作用于L-型的糖。 本实验以唾液淀粉酶、蔗糖酶对淀粉、蔗糖水解反应的催化作用来观察酶的专一性。采用Benedict试剂检测反应产物。 Benedict试剂是碱性硫酸铜溶液，具有一定的氧化能力，能与还原性糖的半缩醛羟基发生氧化还原反应，生成砖红色氧化亚铜沉淀。 Na2CO3+ 2H2O2NaOH + H2CO3 CuSO4+ 2+ Na2SO4 还原糖(—CHO or —C=O)+ 2Cu(OH)2 Cu2O(砖红色或黄色) + 2H2 与Benedict试剂无呈色反应。 淀粉被淀粉酶水解，产物为葡萄糖;蔗糖和棉子糖被蔗糖酶水解，其产物为果糖和葡萄糖，它们都为具有自由半缩醛羟基的还原糖，与Benedict试剂共热，即产生红棕色Cu2O沉淀。本实验以此颜色反应观察淀粉酶、蔗糖酶对淀粉和蔗糖的水解作用。 三、实验材料与试剂 1、实验材料? 蔗糖酶(样品?);? 新鲜唾液(含唾液淀粉酶);2、实验试剂? 蔗糖酶液蔗糖酶液(样品?)加蒸馏水适当稀释，备用;? 唾液淀粉酶液(学生自制)取0.5mL唾液至25ml量筒中，用蒸馏水(稀释)到25ml，用棉花过滤备用。唾液稀倍数因人而异，可稀释50, 400倍，甚至更高;? 5%蔗糖(A.R.)溶液;? 0.5%淀粉溶液(含0.3%NaCl);? Benedict试剂 ;四、实验器材与仪器 1.漏斗， 2.脱脂棉花; 3.恒温水浴(37?，100?); 4.量筒;5.试管;6.烧杯;7.吸量管。 五、实验操作方法和步骤 ? 检查试剂 取3支试管，按下操作: 注:1、检查目的:试剂是否有干扰因素存在。2、也可对蔗糖酶液、唾液淀粉酶液进行检查是否也有干扰因素存在，请自己设计。?淀粉酶的专一性 取三支试管，按下表操作: 注:可增加一组唾液淀 粉酶液 经100?加热3min 处理后的样品对照组。?蔗糖酶的专一性取三支试管，按下表操作: 注:可增加一组蔗糖酶液 经100?加热3min处理后的样品对照组。 六、结果分析讨论 各试管观察结果依次是: (一):1号蓝绿色，2号蓝色， 3号蓝色 Benedict试剂是碱性硫酸铜溶液，具有一定的氧化能力，能与还原性糖的半缩醛羟基发生氧化还原反应，生成砖红色氧化亚铜沉淀。3只试管都为蓝色说明几只试管中都没有果糖和葡萄糖，说明在不加酶时，淀粉和蔗糖不易水解。试剂无干扰因素的存在。(1号试管是蓝绿色可能是因为有少部分的淀粉水解) (二):1号土黄色，2号黄绿色，3号蓝色 加入唾液淀粉酶，1号试管底物是淀粉，所以很容易水解成葡萄糖，与Benedict试剂共热，即产生红棕色Cu2O沉淀。所以1号颜色变化比较大。(2号可能是因为蔗糖在37?恒温水浴中也有少部分水解，所以颜色变化，但变化不明显。)总的来看可以看出唾液淀粉酶只对淀粉有催化活性，不能催化蔗糖水解，具有对淀粉的底物专一性。3号是对照。 (三):1号蓝色， 2号红棕色，3号蓝色 加入蔗糖酶，2号试管底物是蔗糖，所以很容易水解成果糖和葡萄糖，与Benedict试剂共热，即产生红棕色Cu2O沉淀。所以2号颜色变化比较大。(1号可能是因为淀粉在37?恒温水浴中也有部分水解，所以有颜色变化，但变化不明显。)从这三支试管看出蔗糖酶只对蔗糖的水解 有催化作用，对淀粉无催化作用，具有对蔗糖的底物专一性。3号是对照。 七、思考题1(观察酶专一性实验为什么要设计这3组实验, 每组各有何意义,蒸馏水有何用, 第一组作为整个实验的空白对照组，检测 Benedict 试剂对实验结果的颜色有何影响，排除干扰因素的存在。第二组作为检测淀粉酶的专一性实验组，第三组作为检测蔗糖酶的专一性的实验组。蒸 馏水作为每一个组中的空白对照，与组内其余两组进行对照。 2(将酶液煮沸10min后，重做二、三的操作，观察有何结果, 各试管都为蓝色，因为酶在煮沸过程中 已经变性，失去催化活性，故不能催化各自对应底物的水解反应。 3(在此实验中，为什么要用0.5%淀粉(0.3%Na Cl)溶液,0.3%NaCl的作用是什么, 0.3%NaCl 中的Cl 是作为激活剂激活唾液淀粉酶的活性，使实验结果不至于因为唾液淀 粉酶的活性不足而导致不同。 八、注意事项1.试管要干净，所有试剂加量准确，加好试剂后要摇匀。2.使用试剂时不要人为造成试剂间的互相污染;试剂用好瓶盖要立即盖好，防止试剂间的互相污染。以免实验结果的错误。 - ?. 影响酶活性的因素——激活剂和抑制剂 一、实验目的和要求 1. 了解激活剂和抑制剂对酶促反应速度的影响。2. 学习检定激活剂和抑制剂影响酶促反应速度的原理和方法。二、实验基本原理 在酶促反应过程中，酶的活性常受某些物质的影响，有些物质能使酶的活性增加，称为激活剂;某些物质它们并不引起酶蛋白变性，但能使酶分子上的某些必需基团(主要是指酶活性中心上的一些基团)发生变化，因而引起酶活力下降，甚至丧失，致使酶反应速度降低，称为酶的抑制剂。 酶的激活剂种类: 1、一些简单的无机离子，如Mg2+、Cl-等; 2、一些中等大小的有机分子，如抗坏血酸等也是激活剂，它们对某些含巯基的酶具有激活作用; 3、有些酶的催化作用易受某 些抑制剂的影响，因而能除去抑制剂的物质也可称为激活剂，如EDTA能除去重金属，因而能解除重金属对酶的抑制作用。4、具有蛋白质性质的大分子物质，这些激活剂是指可对某些无活性的酶原起作用的酶。 酶的抑制剂有许多种:如重金属离子(Ag+、Hg2+、Pb2，、Cu2，等)、CO、氯化物、H2S、砷化物、氟化物、生物碱、有机磷农药等都是抑制剂。少量的激活剂或抑制剂就能影响酶的活性，而且常具有特异性。值得注意的是激活剂和抑制剂不是绝对的，各种激活剂对酶的作用是不同的。 本实验利用淀粉被水解的不同阶段产物与碘有不同颜色反应，定性观察唾液淀粉酶在酶促反应中激活或抑制现象。淀粉经酶促水解为葡萄糖的不同阶段的产物与碘作用的颜色反应如下: 本实验中，Cl-为唾液淀粉酶的激活剂; Cu2+为唾液淀粉酶的抑制剂。 利用淀粉被水解的不同阶段产物与碘有不同的呈色反应，定性 观察唾液淀粉酶在酶促反应中激活和抑制现象。 淀粉 + 碘 蓝色 淀粉 + 淀粉酶水解产物 + 颜色变化 水解的程度是通过水解混合物遇碘溶液所呈现的颜色之变化来判断的。 三、实验材料与试剂 1、实验材料新鲜唾液2、实验试剂? 唾液淀粉酶(学生自制)取唾液1ml至25ml量筒中，用蒸馏水稀释至25ml，用棉花过滤备用。唾液稀释倍数因人而异，可稀释50,400倍，甚至更高。? 0.1% 淀粉溶液? 1.0% 氯化钠溶液? 1.0% 硫酸铜溶液? 1.0% 硫酸钠溶液? 碘化钾-碘液四、实验器材与仪器 1.试管及试管架2.量筒3.漏斗4.脱脂棉花5.点滴板6.吸量管7.恒温水浴(37?) 五、实验操作方法和步骤 取试管4支，按下表操作: 注意: ?找出准确的保温时间，是本实验是实验能否成功的关键步骤之一，唾液淀粉酶液浓度可根据个人情况而定，通过37?水浴溶保温计时，反应时间最好在8,15min以内，只有确定准确的保温时间才能进行实验。 (2) 加入酶液后，务必充分摇匀，保证酶与全部淀粉液接触的 反应才能得到理想的颜色梯度变化结果。(3)碘化钾–碘液不要过早地加到点滴板上，以免碘液挥发，影响显色效果。 六、结果分析讨论1号试管为蓝紫色，2号为浅黄色，3号为褐色，4号为浅褐色。 试管 1 中颜色最深，说明 CuSO 4 可以抑制淀粉酶的活性;试管 2 中颜色最浅，基 本呈碘色，故淀粉酶活性最高，说明 NaCl 可以激活淀粉酶的活性;试管 3、4 中颜色基本 一致，且深浅居于试管1、2 之间，淀粉酶活性一般，说明Na+、SO 4 2- 对淀粉酶活性都没有 影响。故总体上看，可以得出Cl - 是唾液淀粉酶的激活剂，Cu 2+ 是唾液淀粉酶的抑制剂。 七、思考题1. 激活剂可分哪几类,本实验中NaCl、硫酸铜是属于哪种类型, 激活剂可分为:简单无机离子、中等大小有机分子、能除去抑制剂的物质、具有蛋白质性质的大分子物质等。NaCl 属于简单无机离子;CuSO4 属于重金属抑制剂。 2. 本实验中，1，2，3，4管各有何用意,为什么要设计第3管和第4管, 1 管可观察抑制剂对反应影响的现象，2管可观察激活剂对反应影响的现象，第3管可以将1管中的Na 和2 管中的SO4 对反应的影响去除，4管作为空白对照。 3. 抑制剂与变性剂有何不同,试举例说明。 抑制剂只改变酶的催化活性，并不使蛋白质变性，其影响是可逆的;变性剂破坏了蛋白质的高级结构，使蛋白质变性，并且多数变性剂的影响是不可逆的。如:Cu 是唾液淀粉酶的抑制剂，但 如果将Cu 去除淀粉酶的活性又可以变为正常水平。八、注意事项1.试管要干净，所有试剂加量准确，加好试剂后要摇匀。2.使用试剂时不要人为造成试剂间的互相污染，以免实验结果的错误。3.试剂用好瓶盖要立即盖好，防止试剂间的互相污染。4.两种淀粉不要弄错。5.激活剂抑制剂实验中，注意运用点滴板(显色板)来控制保温时间; 如1，2，3，4管颜色反应无明显差别，可能是唾流淀粉酶活力太高或太低，若酶活性太高可将酶稀释后重做;若酶活性太低，可延长保温时间或增加酶的浓度。 2+2++2- ?. 影响酶活性的因素——温度，最适温度测定 一、实验目的和要求 1. 了解温度对酶活力的影响;2. 学习测定最适温度的原理和方法; 二、实验基本原理 酶的催化反应受温度影响很大，每一种酶所催化的反应，在一定条件下，仅在某一温度范围内表现出最大的活力，即反应速度最大时的温度，这个温度称为该酶促反应的最适温度，高于或低于最适温度时，反应速度逐渐下降。因此，酶促反应与温度的关系，用酶活力对温度作图，通常具有钟罩形曲线特征。 温度与酶活力的关系测定是选择一定的条件，把底物浓度、酶浓度、反应时间、pH等固定在最适状态下，然后在一系列不同温度条件下，进行反应初速度测定，以酶反应初速度对温度作图，可以得一个 钟罩形的曲线，即为温度—酶活性曲线，在某温度有一酶活力最大值，这个温度即为最适温度。 实验?利用唾液淀粉酶为试验对象，在0?,65?之间选择不同的温度，进行酶活力测定。根据淀粉被唾液淀粉酶水解的程度的不同，遇碘呈现颜色的变化来判断酶活力的大小及最适温度。 实验?采用蔗糖酶为试验对象，在室温至75?之间选择不同温度进行酶活力测定。蔗糖酶的活力常以其反应产物还原糖(葡萄糖)的生成量来表示。测定还原糖的方法很多，本实验选择3,5–二硝基水扬酸法测定还原糖量。在碱性条件下，3,5–二硝水杨酸与还原糖溶液共热后被还原成红色氨基化合物，并在一定浓度范围内，还原糖的量与反应溶液所呈棕红色物质颜色 篇二:实验 影响酶促反应速度的因素 实验 影响酶促反应速度的因素 一、实验目的 通过本实验了解温度、PH、激活剂、抑制剂对酶促反应速度的影响。 二、实验原理 唾液淀粉酶催化淀粉水解生成各种糊精和麦芽糖。淀粉溶液与碘反应呈蓝色;糊精根据分子大小，与碘反应分别呈蓝、紫、红、无色等不同的颜色;麦芽糖不与碘呈色。唾液淀粉酶的活性受温度、酸碱度、抑制剂与激活剂等的影响。 温度:温度降低，酶促反应减弱或停止;温度升高，反应速度加快。当上升至某一温度时，酶促反应速度达最大值，此温度称 为酶的最适温度。由于酶的化学本质是蛋白质，温度过高会导致蛋白质构象的改变，因此如果温度继续升高，反应速度反而会迅速下降甚至完全丧失。 酸碱度:唾液淀粉酶最适pH为pH6.9，高于或低于酶的最适pH值，都将引起酶活性的降低，过酸或过碱的反应条件可使酶活性丧失。 抑制剂与激活剂:酶的活性常受某些物质的影响，能增加酶的活性称为酶的激活剂:降低酶活性且不使酶蛋白变性的称为酶的抑制剂。如Cl-为唾液淀粉酶的激活剂，Cu2+为唾液淀粉酶的抑制剂。 根据上述性质，可以用碘检查淀粉是否水解及其水解程度，间接判断唾液淀粉酶是否存在及其活性大小。 三、试剂及器材 1.试剂: 1,淀粉溶液，1,氯化钠溶液，1,硫酸铜溶液，1,硫酸钠溶液，碘液，磷酸氢二钠(0.2mmol/L), 柠檬酸溶液(0.1mmol/L)。 2.器材: 试管，试管夹，恒温水浴锅(37?),吸管，滴管，试管架。 四、实验操作: 1.收集唾液:实验者先将痰咳尽, 用自来水漱口, 清除口腔内食物残渣, 再含蒸馏水约15 mL, 作咀嚼咕漱运动, 3min后吐入小烧杯中备用。 2.观察温度对酶促反应速度的影响 取试管3支，编号1,2,3，按下表操作: 3. 观察pH对酶促反应速度的影响( 2)取试管3支，编号1,2,3，按下表操作: 4观察激活剂和抑制剂对酶促反应速度的影响 取试管4支，编号1,2,3,4，按下表操作: 五、实验结果及分析 六、思考题 影响酶促反应速度的因素有哪些,它们如何影响酶的活性, 篇三:影响酶促反应速率的因素和实验设计及分析理论 影响酶活性和酶促反应速率的因素 1.温度和pH对酶活性和反应速率的影响 ?请描述两条曲线，解释两图中A、B、C三点。 2.底物浓度和酶浓度对反应速率的影响 底物浓度和酶浓度会影响_____________，但不影响________。 相应的曲线。 3.其他曲线的分析 ?已知温度对某酶促反应速率的影响如左图，请在右图中画出 实验设计的基础知识 一、完整实验包括的内容 目的、原理、材料用具、步骤、结果及结论 二、实验题型 完整设计、评价补充、补充完善(原理、步骤)、结果分析与结论的得出 三、生物实验设计及分析理论 1.变量(课本P79) 自变量、因变量和检测指标、无关变量 2.实验原则 ?对照原则:只研究自变量对因变量的影响，怎么做, 设置对照实验(对照原则) ?单一变量原则 设计对照实验的最基本的要求是什么, 实验的各组之间，只允许自变量不同，无关变量相同适宜，即遵循单一变量原则。其中，对无关变量控制，要相同适宜。 遵循以上两个原则的目的主要是消除无关变量对结果的影响，使结果只受实验变量的影响。 ?平行重复原则 为了避免偶然因素(实质也是无关变量)对实验的影响，可以采取:1?对每种特定条件下的小组多设置几个;2?或者增加材料个体数，如多粒种子、多株植株、多个个体;3?对于需测量数值的检测指标，重复测量求平均值。 ?科学性原则 实验设计的原理、方法、过程等要科学，能够进行实际操作。 3.对照实验的类型 ?对照实验一般包括对照组和实验组 一般来说，对照组是指实验结果事先已知的，或者自然常态条件下的一组实验。对照组一般不给自变量处理(如喷洒等量蒸馏水，饲喂不含生长激素的饲料)或不处理(如验证光是光合作用的条件，对照组放在正常有光的条件下，不做遮光处理) ?空白对照、自身对照、相互对照 在一个实验中,若对照组是单独存在的一个组，此对照组称空白对照组，含有空白对照组的整个实验称空白对照实验。没有空白 对照组的实验称为对比实验。 在同一实验对象上先后进行不同的处理，形成自身对照。实验组和其他实验组之间相互形成对照，称为相互对照。 四、实验题解答策略(无论哪种题型都实用) 1.抓变量的分析(关键) ?确定自变量、因变量、无关变量 从题目(文字、图、表、曲线)、提供材料用具、操作过程、实验目的、原理出发 ?注意因变量和观测指标之间的关系 ?控制自变量和因变量: 遵循“对照”、“单一变量”、“等量”等原则 ?实验课题或目的及其结论的表达 实验课题或目的:探究 自变量 对 因变量 的影响;或者探究 自变量 与 因变量 之间的关系。 实验结论:自变量对因变量有 什么样的 影响;或者在一定范围内随着 自变量 的 什么样的变化，因变量 怎么变 2.抓实验过程分析 实验步骤的一般表述:第一步:取材、分组、编号;第二步:进行实验处理，控制自变量;第三步:相同且适宜条件下培养或放置;第四步:检测、观察、记录 3.实验结果及结论分析 ?探究实验的结果预测:探究性实验的结果和结论不止一种。表述的一般句式是“如果??(现象1)，则??(结论1)，如果??(现象2)，则??(结论2)”，且结果和结论必须符合逻辑关系。 ?验证实验结果预测结果是唯一的。 ?分析结果得出结论 前提是找出自变量和因变量，使得结论与实验目的保持一致。 表述要规范、完整、准确，表述技巧前面已经总结。