清热通下中药对胆管炎大鼠肠屏障保护 和炎症反应调控的研究

清热通下中药对胆管炎大鼠肠屏障保护 和炎症反应调控的研究 清热通下中药对胆管炎大鼠肠屏障保护 和炎症反应调控的研究 【关键词】 清热通下中药 ,摘要, 目的: 探讨清热通下中药在急性胆管炎治疗中对肠黏膜屏障保护和炎症调控的作用。方法: 60只SD大鼠分为3组，每组20只。模型组(A组)制作急性胆管炎模型;治疗组(B组)制作急性胆管炎模型并喂清热通下中药治疗;假手术组(C组)仅剖腹后缝合。取血检测细胞因子、炎症介质、内毒素和细菌移位等指标。结果: A组白细胞介素6(interleukin6, IL6)、白细胞介素8(interleukin8, IL8)、肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factorα, TNFα)、血清C反应蛋白(C reactive protein, CRP)和一氧化氮(nitric oxide, NO)明显高于B组和C组(P0.01)，IL2则显着低于B组和C组(P0.01);A组的血清内毒素和肝、脾、肠系膜淋巴结细菌移位数显着高于B组和C组(P0.01)。结论: 具有清热通下作用的中药在治疗急性胆道感染中具有保护肠黏膜屏障、降低血清内毒素和调节机体炎症反应的作用。 ,关键词, 清热通下中药; 胆管炎; 细胞因子; 炎症介质 Impact of antipyretic and purgative herbs on intestinal mucosal barrier and inflammatory response in treatment of acute cholangitis in rats ABSTRACT Objective: To investigate the effects of antipyretic and purgative herbs on intestinal mucosal barrier and inflammatory response in the treatment of acute cholangitis. Methods: Sixty SD rats were randomly divided into group A (untreated group, acute cholangitis was induced, n=20), group B (treatment group, acute cholangitis was induced and treated with antipyretic and purgative herbs, n=20) and group C (sham operation group, n=20). At the third or fifth day after operation, the rats were sacrificed and sampled. The serum endotoxin, cytokines and inflammatory mediators were tested and the numbers of labeled bacteria in the liver, spleen and mesenteric lymph nodes translocated from the gut were assayed. Results: As pared with group A, the serum content of endotoxin, IL6, IL8, TNFα, CRP and NO was significantly lower and that of IL2 was significantly higher, and the translocated numbers of labeled bacteria from gut were reduced in both group B and group C(P0.01). Conclusion: Antipyretic and purgative herbs can play therapeutic roles in the treatment of acute biliary tract infections, including the protection of intestinal mucosal barrier from bacterial translocation, reduction of serum endotoxin content and regulation of inflammatory response. KEY WORDS antipyretic and purgative herbs; cholangitis; cytokines; inflammatory mediators 近年，随着对重症感染研究的不断深入，国内外学者更加注重保护机体防御功能和调节机体适度炎症反应在抗感染治疗中的地位。稳定和保护机体天然屏障以及调控炎症时机体体液性因子与细胞因子的平衡，正成为提高外科重症感染治疗效果的重要研究方向。急性胆管炎是外科常见和危重感染性疾病，迄今为止，手术和抗生素疗法是治疗这一疾病的主要手段，其病死率和病残率还很高。以往中西医结合治疗急性胆道感染的临床实践已经显示，清热通下中药具有较为理想的疗效，尤其在缓解症状、减少并发症和加速康复等方面作用显着,1,。中医中药在治疗急性胆道感染中的独特作用正引 起临床上广泛关注。本研究旨在探讨清热通下中药在胆道感染时对机体肠黏膜防御屏障和全身炎症反应的干预作用。 1 材料与方法 1.1 实验动物与分组 选择SD大鼠60只，雌雄各半，体质量225,245 g，随机分为3组，每组20只(上海中医药大学实验动物中心提供，纯系清洁级动物)。模型组(A组)大鼠参照龚建平等,2,的方法，将胆总管结扎，同时向胆总管内注入致病性大肠杆菌，制作大鼠急性胆道感染模型，手术后喂生理盐水。清热通下中药治疗组(B组)大鼠同上造模，手术后喂清热通下中药锦红片悬液。假手术组(C组)大鼠剖腹后缝合，手术后喂生理盐水。 1.2 实验材料 1.2.1 药物 锦红片系已故中医名家顾伯华教授和着名中西医结合外科专家徐长生教授的经验方，主要成分为红藤、蒲公英、生大黄。由上海中药制药一厂提供锦红片干粉，以蒸馏水配成含干粉110 mg/ml的悬混液，用于动物灌胃。 1.2.2 标记细菌 由上海卫生防疫站提供菌株，菌株置于肉汤培养基中培养并配制成菌液。大肠杆菌‎‎O111B4(菌液浓度5×109 cfu/ml)用于实验动物胆总管内注入，制作急性胆道感染模型。大肠杆菌O55B5(菌液浓度5×109 cfu/ml)用于实验动物灌胃，作为标记菌检测肠道细菌移位数。 1.2.3 试剂与仪器 鲎试剂内毒素定量检测试剂盒，上海市医学化验所提供;灭菌肉汤琼脂培养基，FMG182放射线免疫γ计数器，上海中医药大学龙华医院中心实验室提供;CPS2型超声粉碎机，上海超声波仪器厂生产;,85?超低温冰箱，美国Harris公司产品;LXJ?型离心沉淀机，上海医用分析仪器厂生产;免疫化学定量仪，美国Beckman公司产品;一氧化氮(nitric oxide, NO)试剂盒，南京建成生物工程研究所提供;白细胞介素6(interleukin6, IL6)、白细胞介素8(interleukin8, IL8)、肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factorα, TNFα)放射免疫分析测定盒，北京北方生物技术研究所提供;ELISA试剂盒，深圳晶美生物工程有限公司提供。 1.3 实验方法 1.3.1 造模方法 动物以戊巴比妥钠25 mg/kg腹腔注射麻醉，腹部备皮，以新洁尔灭酊消毒皮肤，无菌条件下进入腹腔，游离胆总管，双重结扎胆总管，向胆总管近端内注入大肠杆菌O111B4 1 ml/kg，缝合创口。假手术动物同样在无菌条件下打开并缝合腹腔，但不结扎胆总管，也不予标记菌注入。实验动物分别于手术后第3和第5天处死取材，于取材前24 h予大肠杆菌O55B5 7 ml/kg灌胃。 1.3.2 给药方法 模型组大鼠造模后每天以生理盐水10 ml/kg灌胃2次。中药组大鼠造模前1天予锦红片悬液10 ml/kg灌胃1次，造模当天以相同剂量锦红片悬液灌胃1次，并于灌胃后4 h造模，方法同模型组。造模后每天以相同剂量锦红片悬液灌胃2次。假手术组大鼠手术后每天以生理盐水10 ml/kg灌胃2次。 1.3.3 取材方法 各组动物均以戊巴比妥钠25 mg/kg腹腔注射麻醉，再次在无菌条件下进入腹腔，于后腔静脉处抽取血标本，用于血清内毒素、细胞因子和炎症介质等检测;取肝、脾、回肠及盲肠肠系膜等组织供标记细菌移位检测。 1.4 检测指标 1.4.1 细胞因子检测 血清IL2测定采用ELISA法，根据ELISA试剂盒说明步骤操作测定。血清IL 6、IL8和TNFα采用放射免疫分析法测定，根据各自的放射免疫分析测定盒说明的步骤检测。 1.4.2 炎症介质 血清C反应蛋白(C reactive protein, CRP)采用Beckman免疫化学定量仪自动测定，NO采用硝酸还原酶法测定。 1.4.3 血清内毒素测定 采用鲎试剂定量测定各组动物血清内毒素含量。 1.4.4 标记菌检测 取各组动物的肝、脾、回肠及盲肠肠系膜(其中含有肠系膜淋巴结)，称重后分别加10倍重生理盐水稀释，置于超声匀浆机中制成10%组织匀浆，各取0.1 ml置于肉汤培养基培养24 h，统计标记大肠杆菌O55B5菌落数。 1.5 统计学方法 实验数据应用SPSS统计软件进行单因素方差分析。 2 结 果 2.1 细胞因子 实验第3天C组IL2含量显着高于其他两组，A组最低(P0.01)，见1。至第5天时，各组IL2均有下降趋势，但B组仍显着高于A组1234下一页