07第七章 芳香胺类药物的分析

07第七章 芳香胺类药物的分析 第七章 芳香胺类药物的分析 本章: 本章: 芳胺类 芳烃胺类:苯乙胺类、 芳烃胺类:苯乙胺类、苯丙胺类 一、芳胺类 一)、结构分析 对氨基苯甲酸酯类: 对氨基苯甲酸酯类: NH2 NH2 HCl 一)结构分析 R1N H C O NHC4H9 HCl O R2 COOC2H5 COOCH2CH2N(C2H5)2 COOCH2CH2N(CH3)2 苯佐卡因 H2N 盐酸普鲁卡因 盐酸丁卡因 CONHCH2CH2N(C2H5)2 . HCl 盐酸普鲁卡因胺 一、芳胺类 酰胺类: 酰胺类: NHCOCH3 R3 R1 R4 一)结构分析 NH C O R2 NHCOCH3 NHCOCH2N(C2H5)2 CH3 CH3 . OH OC2H5 HCl 对 乙酰氨基酚 非那西汀 盐酸利多卡因 一、芳胺类 O CH3COHN S O 一)结构分析 NHCOCH3 醋氨苯砜 C H3 N HC O C H3 C 4H 9 N . HCl 盐酸布比卡因 一、芳胺类 )、鉴别 二)、鉴别 重氮化1(重氮化-偶合反应 NH2 + NaNO2 + HCl COOCH2CH2N(C2H5)2 HO NaOH OH N=N 二)鉴别 N2Cl + NaCl + H2O COOCH2CH2N(C2H5)2 + NaCl + H2O COOCH2CH2N(C2H5)2 一、芳胺类 二)鉴别 芳仲胺基:可以发生亚硝酸钠反应 芳仲胺基: NHC4H9 + NaNO2 HCl + NaCl + H2O COOCH2CH2N(CH3)2 ON NC4H9 COOCH2CH2N(CH3)2 一、芳胺类 2(三氯化铁反应 NHCOCH3 3 + FeCl3 OH 二)鉴别 NHCOCH3 [ ] O - Fe + 3 HCl 3 一、芳胺类 3(水解反应 例1 NH2 NaOH NH2 二)鉴别 + C2H5OH COOC2H5 C2H5OH + 4 I2 + 6 NaOH COONa CHI3 + 5 NaI + HCOONa + 5 H2O 一、芳胺类 例2 NH2 NH2 二)鉴别 NH2 . HCl NaOH + HOCH2CH2N(C2H5)2 COOCH2CH2N(C2H5)2 COONa HCl NH2 NH2 COOCH2CH2N(C2H5)2 . HCl COOH HCl COOH 一、芳胺类 4. 与重金属离子反应 与铜、 1)与铜、钴离子反应 二)鉴别 中与CuSO 利多卡因: 利多卡因:Na2CO3中与CuSO4生成蓝紫色 转溶氯仿中显黄 色 CH3 CH3 NHCOCH2N(C 2H5)2 + Cu ++ CH3 NCOCH2N(C 2H5)2 CH3 Cu CH3 (C 2H5)2NCH2CON CH3 一、芳胺类 二)鉴别 利多卡因: 利多卡因:与CoCl2反应生成亮绿色细小钴 盐沉淀 CH3 NHCOCH2N(C2H5)2 + CoCl2 CH3 CH3 CH3 NCOCH2N(C2H5)2 (C2H5)2NCH2CON CH3 Co CH3 一、芳胺类 2)羟肟酸铁盐反应 二)鉴别 芳酰胺结构? 芳酰胺结构?浓H2O2 ?煮沸 ?羟肟酸 ?+FeCl3 羟肟酸铁(呈色) ?羟肟酸铁(呈色) 一、芳胺类 N H2 + H 2O 2 C O N H C H 2 C H 2 N (C 2 H 5 ) 2 N H2 二)鉴别 + H 2O C O N C H 2 C H 2 N (C 2 H 5 ) 2 OH FeCl N H2 3 [ ] OH Fe 3 + 3HCl C O N C H 2 C H 2 N (C 2 H 5 ) 2 一、芳胺类 3)与汞离子反应 二)鉴别 盐酸利多卡因 ?HNO3 +HgNO3 ? 煮沸 ? 显黄色 对氨基苯甲酸酯类: 对氨基苯甲酸酯类:显红色或橙黄色 一、芳胺类 )、杂质检查 三)、杂质检查 三)杂质检查 1、乙酰氨基酚的 杂质检查 合成路线: 合成路线: OH Fe粉 还还 NO2 N H2 N HC O C H 3 OH 乙 乙乙 OH 一、芳胺类 一般杂质: 一般杂质: 三)杂质检查 酸度、氯化物、硫酸盐、 酸度、氯化物、硫酸盐、重金属 水分、炽灼残渣 水分、 特殊杂质 : 乙醇溶液的 澄清度与颜色、 乙醇溶液的澄清度与颜色、有关物质 对氨基酚 一、芳胺类 ? 乙醇溶液澄清度与颜色 Fe粉 Fe粉:乙醇混浊 对氨基酚: 对氨基酚:氧化有色 三)杂质检查 1.0g?10ml乙醇 应澄清， 乙醇， 取1.0g?10ml乙醇，应澄清，无色 浑浊， 浑浊，与1号浊度液比较 显色，与棕红色2号或橙红色2 显色，与棕红色2号或橙红色2号标准比色 液比较 一、芳胺类 有关物质: ? 有关物质: 三)杂质检查 对氨基酚、对氯乙酰 苯胺 对氨基酚、 O-乙酰基对酰氨基酚 偶氮苯、 偶氮苯、氧化偶氮苯 苯醌、 苯 醌、醌亚胺等 一、芳胺类 三)杂质检查 TLC: TLC: 硅胶GF254 板:硅胶GF254 展开剂:氯仿-丙酮-甲苯(13?5?2) 展开剂:氯仿-丙酮-甲苯(13?5?2) 检视: 检视:254nm 样液配制:取本品1.0g?乙醚5ml? 1.0g?乙醚5ml?振摇提取 样液配制:取本品1.0g?乙醚5ml?振摇提取 ?提取液点样 对照液:50μg/ml对氯乙酰苯胺的乙醚液 对照液:50μg/ml对氯乙酰苯胺的乙醚液 点样: 点样:各40μl 规定: 规定:供试液显杂斑与对照液主斑比不得更大更深 一、芳胺类 ? 对氨基酚 三)杂质检查 对氨基酚: 对氨基酚:亚硝基铁氰 化钠碱性下显蓝色 对乙酰氨基酚:无 对乙酰氨基酚: 一、芳胺类 三)杂质检查 样品:1.0g?甲醇(1?2)20ml溶解 样品:1.0g?甲醇(1?2)20ml溶解 :1.0g?甲醇 ?1ml碱性亚硝基铁氰化钠?放置30min 1ml碱性亚硝基铁氰化钠 放置30min 碱性亚硝基铁氰化钠? 对照:(对乙酰氨基酚1.0g，对氨基酚50μg) 对照:(对乙酰氨基酚1.0g，对氨基酚50μg) :(对乙酰氨基酚1.0g 50μg 甲醇(1?2)20ml溶解 ?甲醇(1?2)20ml溶解 1ml碱性亚硝基铁氰化钠 放置30min 碱性亚硝基铁氰化钠? ?1ml碱性亚硝基铁氰化钠?放置30min 一、芳胺类 三)杂质检查 2、盐酸普鲁因注射液中杂质检查 检查:对氨基苯 甲酸，TLC TLC法 检查:对氨基苯甲酸，方法TLC法 (限量1.2%) 限量1.2%) 1.2% _ H2N COOH CO2 H2N O O 一、芳胺类 )、含量测定 四)、含量测定 四)含量测定 亚硝酸钠滴定法(重 氮化法) 1、亚硝酸钠滴定法(重氮化法) 1)原理: 原理: NO2 Zn+HCl H / 水水 NHCOR + NaNO2 NH2 2HCl [Ar-N2]Cl - +NaCl +2H2O NH2 一、芳胺类 测定的主要条件: 2)测定的主要条件: 四)含量测定 (1)反应速度与药物结构的关系 苯环:吸电基(, (,SO COOH,, ?苯环:吸电基(,SO3,,NO2,,COOH,,X) 反应速度加快(对位最快) 反应速度加快(对位最快) 苯环:供电基( OR) ?苯环:供电基(-CH2R, -OH, -OR) 反应速度降低(对位最慢) 反应速度降低(对位最慢) 一、芳胺类 重氮化反应机制: 重氮化反应机制: 四)含量测定 NaNO2+HCl?HNO2+NaCl HNO2+HCl?NO+Cl-+H2O 水解 NO+Cl- ArArAr-NHAr-NH2?HCl ? Ar-NH2 ? Ar-NH-NO HCl 分子重排 HCl ? Ar-N=NAr-N=N-OH ? [Ar[Ar-N?N]+Cl- 一、芳胺类 四)含量测定 (2)反应速度与酸的种类及酸度的关系 HBr>HCl>H2SO4 HNO2+HBr ?NO+Br-+H2O HNO2+HCl ?NO+Cl-+H2O 300倍 K1>K2 300倍 一、芳胺类 四)含量测定 酸度: 酸度: 芳伯氨基:酸的摩尔比为1:2.5,6 芳伯氨基:酸的摩尔比为 , 酸度不足: 酸度不足:偶氮氨基物 N2Cl - NH2 + N=N NH +HCl 酸度太高:阻碍氨基游离、 酸度太高:阻碍氨基游离、亚硝酸分解 一、芳胺类 四)含量测定 (3)反应速度与温度的关系 温度?，反应速度?，HNO2分解?重氮盐分解? [Ar-N2]+Cl-+H2O?Ar-OH + N2?+ HCl O?Ar[ArJP、USP、 JP、USP、BP:<15? Ch.P:室温(10,30?) Ch.P:室温(10,30?) 滴定管尖端插入液面下2/3处 滴定管尖端插入液面下2/3处，一次加入近终 2/3 点体积 一、芳胺类 四)含量测定 (4)反应速度与滴定速度的关系 分子反应， 分 子反应，速度较慢 滴定不宜过快， 滴定不宜过快，近终点更要慢滴 1d后需搅拌 后 需搅拌1 5min， 加1d后需搅拌1,5min，确定终点 一、芳胺类 3)终点指示方法 四)含量测定 (1)外指示剂法(淀粉碘化钾) 外指示剂法(淀粉碘化钾) 2NaNO2+2KI+4HCl?I2+2NO+2KCl+2NaCl+2H2O 一、芳胺类 外指示剂存在问: 外指示剂存在问题: 未达终点: ?未达终点: KI ?光、空气?/? ? ? ? O2 HCl ? 外试时， ?外试时，试样损失 四)含量测定 遇淀粉显蓝色) I2(遇淀粉显蓝色) 一、芳胺类 (2)内指示剂法 四)含量测定 0.5,中性红水溶液(紫红色? 蓝色) 0.5,中性红水溶液(紫红色?蓝色) 电位法(USP) (3)电位法(USP) 甘汞甘汞-铂电极系统 过量,滴定NaNO 过量,滴定NaNO2电位突跃 一、芳胺类 四)含量测定 永停滴定法(死停法)(Ch.P) )(Ch.P (4) 永 停滴定法(死停法)(Ch.P) 两个相同的铂电极 外加一个小电压( 50mv) 外加 一个小电压(Ch.P 50mv) 观察滴定过程中电极间电流变化 确定滴定终点 一、芳胺类 仪器装置: 仪器装置: 四)含量测定 一、芳胺类 电极反应: 电极反应: 四)含量测定 阴极: ?NO， 阴极: HNO2 ，H，，e ?NO，H2O 阳极: NO， 阳极: NO，H2O?HNO2，H，，e 缺点: 缺 点:电极易钝化 HNO3+FeCl3试液或铬酸液 温热活化5 温热活化5,10min 一、芳胺类 2、溴量法 苯乙胺类药物中介绍 3、非水滴定法 四)含量测定 侧链氮具有弱碱性， 侧链氮具有弱碱性，非水碱量法 二、苯乙胺类 一)、结构分析 一)结构分析 R1 CH CH NH OH R3 R2 HX R1 二、苯乙胺类 R1 HO HO HO HO 一)结构分析 R3 HX 名称 肾上腺素 CH(OH)COOH CH(OH)COOH R2 -CH3 -H -H -H -H -H -H -H -CH(CH3)2 HO HO HO HO HO HCl HCl HCl 酒石酸 去甲肾上腺素 盐 酸去氧肾上腺素 盐酸异丙肾上腺素 盐酸多巴胺 -H 二、苯乙胺类 )、鉴别 二)、鉴别 1(三氯化铁反应 2(氧化反应 二)鉴别 酚羟基可被I 酚羟基可被I2、H2O2、铁氰化钾 二、苯乙胺类 二)鉴别 I 异丙肾上腺素 ?2 /偏酸性 异丙肾上腺素(红) ?? ? 异丙肾上腺素( ? 肾上腺素 ?I 2 肾上腺素红(血红色) ?? 肾上腺素红(血红色) .56 反应极慢(无色) 去甲肾上腺素 ?I?pH 3?? 反应极慢(无色) 2 / ? 6 2/ ?I?pH?? 去甲肾上腺素红 ?.5 二、苯乙胺类 利用此反应区别: 利用此反应区别: 二)鉴别 甲:pH3.5邻苯二甲酸氢钾缓冲液 pH3.5邻苯二甲酸氢钾缓冲液 pH6.5邻苯二甲酸氢钾缓冲液 乙:pH6.5邻苯二甲酸氢钾缓冲液 肾上腺素: 肾上腺素:均为红色 去甲肾上腺素:甲无色、 去甲肾上腺素:甲无色、乙红色 二、苯乙胺类 3.甲醛3.甲醛-硫酸反应 甲醛 形成醌式有色物 二)鉴别 4.脂肪伯胺反应(Rimini试验) 4.脂肪伯胺反应(Rimini试验) 脂肪伯胺反应 试验 脂肪伯胺 ?亚硝基铁氰化钠试液 ?????? ?? ? ? ? ? ? 红紫色 ? 丙酮数滴 / Na 2CO3少许 脂肪伯胺专属反应， 脂肪伯胺专属反应，丙酮中无甲醛 二、苯乙胺类 )、杂质检查 三)、杂质检查 1.酮体 1.酮体 三)杂质检查 酮体:310nm有最大吸收 酮体:310nm有最大吸收 药物: 药物:此波长下无吸收 方法:2.0mg/ml样品液?310nm处测定 方法:2.0mg/ml样品液?310nm处测定 样品液 规定A?0.05 规定A?0.05 1% =453，限量0.06% 0.06%) ( E1cm =453，限量0.06%) 二、苯乙胺类 三)杂质检查 2.有关物质 2.有关物质 1)盐酸去氧肾上腺素 供试液:20mg/ml甲醇液 供试液:20mg/ml甲醇液 对照液:0.1mg/ml甲醇液 对照液:0.1mg/ml甲醇液 层析板:硅胶G 层析板:硅胶G板 点样:各点10μl 点样:各点10μl 展开剂:异丙醇-氯仿-浓氨(80?5?15) 展开剂:异丙醇-氯仿-浓氨(80?5?15) 显色剂: 显色剂:重氮苯磺酸试液 规定: 规定:杂斑颜色与对照主斑比较不得更深 二、苯乙胺类 三)杂质检查 2)硫酸沙丁胺醇 样品:50 mg/ml水溶液 样品: mg/ml水溶液 对照液:[1羟基- 甲基苯基) 对照液:[1-(4-羟基-3-甲基苯基)-2叔丁氨基)乙醇]0.25 mg/ml水溶液 (叔丁氨基)乙醇]0.25 mg/ml水溶液 层析板:硅胶G 层析板:硅胶G板 点样:分别点4μl 点样:分别点4μl 展开、显色(重氮苯磺酸) 展开、显色(重氮苯磺酸) 规定: 规定:杂斑颜色不能比对照主斑点颜色深 二、苯乙胺类 )、含量测定 四)、含量测定 1.非水碱量法 1.非水碱量法 溶剂: gHAc 溶剂: 四)含量测定 滴定剂: 滴定剂:0.1mol/LHClO4 指示剂: 指 示剂:结晶紫 滴定前加HgAC2(盐酸盐) 滴定前加HgAC 盐酸盐) 二、苯乙胺类 2.溴量法 2.溴量法 四)含量测定 操作:样品?置碘瓶中? 操 作:样品?置碘瓶中?0.1mol/LBr2 ?迅速加入HCl 迅速加入HCl ?密塞?KI?摇 匀 密塞?KI?摇匀 ?0.1mol/L Na2S2O3滴定 同法做空白 二、苯乙胺类 原理: 原理:0.1mol/LBr2标准液 四)含量测定 3gKBrO3+15gKBr+H2O?1000ml KBrO3+5KBr+6HCl?3Br2+6KCl+3H2O (去氧肾上腺素) 去氧肾上腺素) 二、苯乙胺类 四)含量测定 过量) Br2(过量)+2KI?I2+2KBr I2+2Na2S2O3?2NaI+Na2S4O6 化学计量关系: 化学计量关系:1:6 药物=3Br 1 药物=3Br2=3I2=6Na2S2O3 二、苯乙胺类 讨 论: 四)含量测定 碘易挥发， 1)溴、碘易挥发，防止逸 失 溴代物水中不溶，需加HAC HAC、 2)溴代物水中不溶，需加HAC、CHCl3或 EtOH 溴过量2 3)溴过量2,为宜 4)空白试验 二、苯乙胺类 四)含量测定 3.比色法 3.比色法 利用酚羟基的显色反应 三、苯丙胺类 )、结构分析 一)、结构分析 CH3CH2OOC N H CH3 一)结 构分析 N . HO O O COOH OH 马来酸 依那普 利 R1 N H R2 CH3CH2OOC N H O 盐酸贝那普利 N COOH. HCl 三、苯丙胺类 CH3CH2OOC N H N 雷 米普里 COOH CH3 O 一)结构分析 CH3CH2OOC N H 西 拉普利 N N O COOH H2N CH3CH2OOC N H CH3 N O COOH HCl HOOC N N H O COOH 盐酸喹那普利 赖诺普利 三、苯丙胺类 )、鉴别 二)、鉴别 1、理化法 (1)熔点测定 BP(2005): BP(2005): 二)鉴别 马来酸依那普利熔点143, 马来酸依那普利熔点143,145? 143 USP30-NF25(2007亚洲版) USP30-NF25(2007亚洲版): 亚洲版 雷米普利熔距105,112? 雷米普利熔距105, 105 三、苯丙胺类 (2)高锰酸钾反应 Ch.P(2005年版) Ch.P(2005年版) 年版 二)鉴别 马来酸依那普利及片剂、胶囊剂 马来酸依那普利及片剂、 取本品20mg，加稀硫酸1ml 取本品20mg，加稀硫酸1ml 20mg 滴加高锰酸钾试液， 滴加高锰酸钾试液，红色即消失 三、苯丙胺类 (3)溴,间苯二酚反应 BP(2005) 马来酸依那普利 二)鉴别 本品30mg溶于3ml 本品30mg溶于3ml水，加溴水1ml 30mg溶于3ml水 加溴水1ml 水浴至溴完全消失，取溴代液0.2ml 水浴至溴完全消失，取溴代液0.2ml 加间苯二酚硫酸液(3g/L)3ml，水浴15min 加间苯二酚硫酸液(3g/L)3ml，水浴15min (3g/L)3ml 显红棕色 三、苯丙胺类 羟胺, (4)羟胺,三氯化铁反应 BP(2005) 马来酸依那普利 二)鉴别 本品30mg，盐酸羟胺甲醇液0.5ml 本品30mg，盐酸羟胺甲醇液0.5ml 30mg 氢氧化钾乙醇液1.0ml 氢氧化钾乙醇液1.0ml 加热至沸，冷却， 加热至沸，冷却，稀盐酸酸化 滴加三氯化铁试液0.2ml， 滴加三氯化铁试液0.2ml，显棕红色 0.2ml 三、苯丙胺类 2.旋光法 2.旋光法 Ch.P(2005年版) Ch.P(2005年版) 年版 马来酸依 那普利 10mg/ml甲醇溶液 10mg/ml甲醇溶液 二)鉴别 比旋度比旋度-41.00 ~ -43.50 三、苯丙胺类 3.光谱法与色谱法 3.光谱法与色谱法 马来酸依那普利 二)鉴别 Ch.P(2005年版) Ch.P(2005年版):IR 年版 USP30-NF25:IR、 USP30-NF25:IR、 HPLC 三、苯丙胺类 )、含量测定 三)、含量测定 1、酸碱滴定法 (1)非水滴定 三)含量测定 Ch.P(2005年版) Ch.P(2005年版):马来酸依那普利 年版 本品?冰醋酸、二氧六环? 本品?冰醋酸、二氧六环?微热溶解 结晶紫?高氯酸滴定液(0.1mol/L) 结晶紫?高氯酸滴定液(0.1mol/L) 至纯蓝色，同时做空白49.25mg/ml(1:1) 至纯蓝色，同时做空白49.25mg/ml(1:1) 三、苯丙胺类 (2)水中滴定 三)含量测定 BP(2005): BP(2005):马来酸 依那普利 本品?新沸过冷水? 本品?新沸过冷水?溶解 电位法?氢氧化钠滴定 液(0.1mol/L) 电位法?氢氧化钠滴定液(0.1mol/L) 16.42mg/ml(1:3) 三、苯丙胺类 (3)醇水中滴定 BP(2005):雷米普利 BP(2005): 本品?甲醇、 本 品?甲醇、水?溶解 三)含量测定 电位法?氢氧化钠滴定液(0.1mol/L) 电位 法?氢氧化钠滴定液(0.1mol/L) 同时做空白。 同时做空白。40.55mg/ml(1:1) 三、苯丙胺类 2.高效液相色谱法 2.高效液相色谱法 Ch.P(2005年版) Ch.P(2005年版): 年版 三)含量测定 马来酸依那普利片剂、胶囊剂 马来酸依那普利片剂、 色谱条件与系统适应性 辛烷基硅烷键合硅胶,柱温: 柱:辛烷基硅烷键合硅胶,柱温:50? 流动相:乙腈-磷酸盐缓冲液(25:75) 流动相:乙腈-磷酸盐缓冲液(25:75) 检测波长: 检测波长:215nm 三、苯丙胺类 合液(0.02mg/ml)?进样20μ 进样20 合液(0.02mg/ml)?进样20μl 三)含量测定 马来酸依那普利、依那普利拉、 马来酸依那普利、依那普利拉、依那普利双酮混 理论板数:按依那普利峰计不低于300 理论板数:按依那普利峰计不低于300 拖尾因子:不大于2.0 拖尾因子:不大于2.0 马来酸与依那普利峰分离度符合要求 依那普利拉、 依那普利拉、依那普利与依那普利双酮各峰分离 度应大于4 度应大于4 三、苯丙胺类 测定: 测定: 三)含量测定 取本品20片?研细?精密称取适 量?水溶解 取本品20片 研细?精密称取适量? 20 进样20 20μ ?进样20μl ?按外 标法以峰面积计算