犬脾转移因子特性的初步鉴定

犬脾转移因子特性的初步鉴定 1994莽?啊f缸赫77船 StudiesontheDetectionofIBDVintheFecesandFeedby theMethods.ofRT.PCRandSandwichELISA, WangYongshanetal. cBlome~tkal岫yofN?’MIlihlmlIIure) ‘- Thefec幅ImmicnlhirIfecIi0岫bor蛆Idj皇e(IdD)-ndfee4w~arelrellledandJ ~oncen1edwithPEG.-ndthen*Jvefeusedforihedete~ionof1BDI/bytranscil bed polymerwechain werel00(818) 8).billlm呻V theRT-PCRw-s especialtyf , nl曲ofbothfecesandfeed rDrfecuWul00蟛(81 ).Theresultsindtcated1hI thestudyofepldemlology ‘摘要 上聃啭咎f(a}TF1飙犬肄{.E日?挺般的?种特定 竹jII鲴胞,殚I七特硅它转咎田f(Tlr~的搠 .垭过11嚆l缃群嚆盘验厦’E璁_托玮墟试齄证唠, , ? Ot-TF靛增强机体的免辔功抱. 自Lawrance(】949)首先发现转移因子以 来.人们已进行了大量的研究.证明TF具有 调节机体对特定抗原的细胞免疫功能.井能 蠼强机体非特异性’的细胞免疫功艟.从而增 强机体的抗病能力和促使自身免疫病的康 复.目前国内外对人类及其它动物的TF进 行了大量研究,人,猪等的TF巳广泛用于临 床疾病治疗.犬TF鲋研究国内尚属空白,其 临床使用效果也未见报道.率试验对CS-TF 特性进行了初步鉴定. 一 ,CS-TF: 制器犬脾畦加 取液透析.所得 二,小乩 镟:?s.’ 提供.. 三,理化检’ - ,.; 1.澄明度:肉眼直接观察法 2.pII:用l精密pH纸(5.d,7.0)测定. 3.蛋白质检验3ml,CS-TF中加入 20磺基球扬酸2,3滴,观察有无白色沉t’’? 淀..t’ 4.紫外光谱分析:用752o型分光光度 计测定.渡长为260nm和280nm. 5.氰基酸组分测定;用目立835~50型 氨基酸自动分折仪’棚定.一 四,l生枷学特性检验 1.无茁缸验;接种于普通肉沥,血液琼 脂斜面,普通琼脂斜面,厌气肉肝汤,37?培 养7天,观察有无细茁生长. , 20g) 第l组 腔注射 全部剖 体重均 -IJl目斋膏f0集惰I99望!塑!些!!塑 等(约l9,20B)的睦康小鼠10只.随机等分 为2组实验组每天给小鼠腹腔注射一次 cs—TF.每次0.5rollH.连续5天l对照组以 无菌生理盐水代替,注射途径和荆量同实验 组.用药后第二天,以O.5ml/只的5蛋白胨 水腹腔注射.诱导臣噬细胞取样前4小时, 用5鸡红细胞(RBc)悬液腹腔注射0.2ml/ 只.d,小时后断颈处死小鼠.轻揉l氆部.吸取 睡水(含腹腔巨噬细胞)放于载玻片上,37? 湿盒中孵育60分钟.取载玻片,在生1理盐水 中轻轻地反复漂洗后.甲醇筒定30分钟,姬 坶萨染色30分钟.在油镜下教200个巨瑾细 瞻.用下面两个指标示吞噬活性:(1),吞嚏 百分草i即每f00个巨啦细胞吞噬鸡RBC 赦l(2),吞瑾指敬:将lO0个巨曦细胞所吞噬 的鸡RBc的总和除l00.得吞噬指教.即每 个巨噬细胞吞蠖鸸RBC的平均数., 五,E玫瑰掂环彩成试验r I.取体重均等’约9~20g)的健康小鼠 l0只.随机等分为2组.实验组每天给小鼠 皮下注身|cs?TFO.5roll双.连续s天i对照组 无菌生理盐水同法注射.于末次性射后3 小时.用5绵羊RBc悬渣0.4ml(约含d.0 Y10个RBC)腹腔注射小鼠.第二天将小鼠 处死.取睥脏制成单细胞,随后将细胞用溶血 C~y’m明脏溶液离心洗涤.使脾脏中的RItZ 溶解? 2.各取0.1ml的8.0Yl0个/ml脾细 胞悬液,1的绵羊lRnc悬液,灭活的被绵羊 RDC吸附的小牛血清.置于离心管内混匀 惦.置37C水浴5分钟.其闸摇动2,3次. 500rpm离心5分钟,冰箱过菠 3.取出标本轻轻旋转混匀.沿管壁加入 0.8戊二醛溶液l谪,再轻轻旋转混匀.置 1【,球箱20分钟 1.取出标本.500rpm离心5分钟.舜上 . t{定1昆勺f推崎- . 醇I酎定30分钟,姬姆萨染涟椠色 30舒钟.证油镜下计戢形成花环细胞百分 比,凡结合3个以上的RBc者为阳性 结果 一 ,cs—TF的理化性质 1.物理性质:cs—TF为略带腥眯的淡黄 色透明液体,无杂质沉淀.??6.8 蛋白质像验;用20的磺基水扬酸检 测,束出现白色沉淀+表明cs.TF中不含蛋 白质: 3.紫蚧光潜分析:经测定.ODm= 1.0Id.OD2B.一0.d67. 由此可得r:OD珊/oDo=2.17I.由公 式一得出DNA浓度为505.5~B/ml. d-氨基酸组分测定:csTF氨基酸总量 为I.41Img/m1.氯基馥组成及禽鼍见丧I 表Ics.TF氨基酸组分 二,cs-TF的生柏擎特灶 1.无菌拯验:Cs.1=F接种于酱通肉汤 血琼脂斜面,普通琼脂斜面,城气闪肝汤. . 37?培养观察7.无细菌生长. 一 . 2.安垒试验:cs—TF注射小鼠后,精 神食欲和活动状况均正常.无一例死亡.剖 越.晦郭畦器无异常变化.证明cs—Tr无毒 性反应. .3.小鼠腹腔臣噬细胞吞噬试验:dl表2 可见.凄验组中小鼠腹腔臣噬细弛备嘴的百 分率和吞噬指戡与对照组比较.都州妊的 提高.差异显着(P<0.05).丧明cs.TF叮螬 音f鼻传染1994年墅璺!! 强小鼠腹腔巨噬细胞的吞噬作用促进机体的免疫功能a 表2小鼠腹腔巨噬细胞吞噬试验 4.E玫瑰花环形成试验:从表3可以看 出,试验组与对照组的花环形成率差异极显 着(P<0.01).表明CS—TF可使小鼠E玫瑰 花环形成细睑显着增加,在细胞免疫方面具 有非特异性免痊增强作用.,’ 表3E玫瑰花环l哥j成试验 小结和计论 TF作为一种特定的淋巴细胞因子,参与 机体的免疫功能.TF通过活化巨噬细胞.能 特异性和非特异性地增强机体凫疫功能.它 能使正常的未致敏的T淋巴细胞转化为致 敏的T淋巴细胞.因此TF可以增强细胞的 免疫应答.增强机体的抗病能力和促使自身 免疫病的康复.自70年代以来,许多学者利 用牛睥TF,猪脾TF,牛乳TF等来治疗人类 的疾病J987年Wilson用特定的抗原免疫 牛,用牛乳制取特异性免疫调节剂,甭以防治 拘,猪和鸡较使用其它TF 更为有效.至于对大应用后效果如何.尚待进 一 步研究探讨 在提取Cs?TF时发现,采用文献报道方 法提取的c’r-TF活性较低,经改进后,一TF 的活性和产量均有很大的提高. 在E玫瑰花环形成试验中,对脾脏单细 胞的制备,我们采用溶血Gey’s明胶液,使脾 脏中的红纽胞溶解,因为溶血Gey’s明胶液 能使脾脏中的红细胞溶解,同时对脾细胞叉 没有伤害,这样处理后的脾细胞计数较易.制 片时清晰可辨,从而提高了宴验的准确性. 参考文献 1.张广CanineSpleen—TransferFactor M日zIl?y.Ilgzhchuny.mgZhengZhenj”gcIlBI.蚰ng (Na.Jln[Agrl~lluralUni~crMty) 组dJ.织,rf抗体生成细胞酌变化 研完生拉:靳堂 (东北艘业大学畦蔡 摘要 尢JSDV抗体的雒康摅自lIj龄哿椎接种IBDV- 时硅晦对赌鹃.接种呜及对照l鹃均舟成两墼1.接种鸡III 旧’lJ1龄时鲢点眼请鼻免疫接肿L.s呻莳.对照 呜的茑j也进r佯兜班.袜为培肇一酞免疫码和对照 援兜接I感染鹏的_’j一组在攻兜垃(I4[j-皇后2埘 【28ll龄)进}ND采免疫,对.嗯鸡的,j’凯也进行?蚪 .袜为蠊:免疫码和对照二歇免疫鸡.在免接 ?时期侧粹身I法氏量,脚腺.脾』Il,.盲肠扁挑体投喻撼 尔脬lI’M投J|A生成l田胞敦最动奄变化.缔犟在咖.盛 , r _ ‘ 趺免癌E兜瘦解董【织抗体生成细胞敦景町低】对 . 投免接嬉:状见疫鸡免疫器什帮取抗体,}戚喜lf 帕戢臂仍哪妊骶r对照二{.:l免癌鹃?但岛j磕染一.免戏 呜.爱州1BDV感染l鹏时ND疫甜呈现身厦局鄢悻灌免班 l?并仲制.1m歇兜疵有兜筏增强藏心. 雏鸡感染传染性法氏囊病病毒(IBDV) 后.除引起一定数量的死亡,廷缓其生长发 育,成熟后的生产性能降低外,主要是造成其 免症机能抑制,致使雏鸡对许多禽病症苗(如 ND痤苗,MD症苗,IB疫苗等)的免疫应答抑 制一免疫保护效应降低,导致这些传染病难以 预防机控制....疫苗免疫后,机体的体渡免 蛀戌答水平主要取决于垒身及局部龟瘥器官 -墁t日}}院喻;谁研所l什 组织抗体生成细胞的数量和功能,困而系统 深入研究免疫器官组织各种抗体生成细胞的 动态变化,可深入揭示[BDV感染鸡接种ND 疫苗后体液免疫应答平及其在兜疫发病学 和疫苗免疫保护中的作甩和意义,这方面的 研究国内外均未见报道.本文从分子水平对 IBDV感染鸡接种ND疫苗后全身及局部免 痿器官组织中的IgG,IgM及lgA生成细胞的 动态变化进行了研究. 材料和方法 一 ,病毒及痘苗 I.IBDV:J_CsF7冻干毒,由中国农科院哈 尔滨壤医研究所提供. ,2.新城痊强雒;F..Ea冻千毒,由中监所 提供... 3.新城痊Sole疫苗;黑龙江省兽药 , 厂生产. 二,实验动枷及分组:无IBDV母源抗体 的1日龄健康滨自公雏,随机成以下各组t 1.对照一冼免疫鸡:在I4日龄时应用 LaSota苗免疫接种一次. 2.感染一次免疫鸡:在】日龄时经,瓿