苦参提取物对大鼠胸主动脉环张力的影响及其机制探讨

苦参提取物对大鼠胸主动脉环张力的影响及其机制探讨 苦参提取物对大鼠胸主动脉环张力的影响 及其机制探讨         &nb sp;  作者:邱灿华 陈健文 李晓君 蓝秀健 余剑平 林明栋  【摘要】  目的:观察苦参提取物对离体大鼠胸主动脉环舒缩的影响。方法:采用测定离体血管环张力的实验方法～观 察苦参提取物对大鼠胸主动脉环静息张力的影响以及对去甲肾上腺素或 KCl 引起胸主动脉环收缩的影响。结果:各种浓度的苦参提取物对大鼠胸主动脉环静息张力无明显的舒张作用,10 g/mL、50 g/mL、250 g/mL浓度的苦参提取物对KCl 或去甲肾上腺素引起的胸主动脉环收缩有一定的抑制作用～抑制率对 KCl 分别为: 8.59%、13.59% 和 18.79% ～对去甲肾腺素分别为 12.03%、16.56% 和 21.03%。结论:一定浓度苦参提取物对去甲肾上腺素以及 KCl 引起的大鼠胸主动脉血管环的收缩有一定的抑制作用～其作用机制可能与其能够促进细胞 Ca2+ 释放有关。 【关键词】  苦参提取物,血管环张力,KCl,去甲肾上腺素 它主要应用于治疗热病烦渴、发斑、齿龈炎、扁桃体炎、咽喉炎、痈肿、急性淋巴结炎、淋巴结结核等。中医主要从以下两个方面来利用苦参:凉血解毒～即用于血热及疮毒～如高热神昏、红肿热痛等,滋阴降火～主治阴虚内热～咽肿咯血、心烦不眠。目前实验研究证明苦参具有降血压、降血糖、抗菌、抑菌、影响血小板聚集和心血管系统的作用[1～2]～同时还有镇静止痛的中枢神经抑制作用[3]。苦参提取物为苦参的有效提取物～主要为 A 、B 两种形式。苦参提取物被用作于多种药物的配方中～是苦参药效的主要体现。     但目前对苦参提取物舒张血管的作用机制缺乏研究～关于苦参提取物通过何种途径影响血管环的舒张作用有不同的说法。本实验通过大鼠离体胸主动脉环灌流～观察苦参提取物对去甲肾上腺素,NE,、KCl 收缩血管的舒张作用～并探讨其作用机制～为进一步开发苦参提供理论依据。     1    材料与方法     1.1    药品、试剂以及器材    受试药物:苦参提取物～由本实验室制备～20 mg 苦参苷 / mL。重酒石酸去甲肾上 腺素注射液,NE,～由天津金耀氨基酸有限公司提供～规格:1 mL:2 mg～生产批号:0403311,其它实验试剂:NaCl、KCl、MgCl2、NaH2PO4〃2H2O、NaHCO3、Glucose 等试剂由中山大学基础医学实验教学中心机能学实验室提供。RM6240 多道生理信号采集处理系统以及离体血管环系统,成都仪器厂产品,。     1.2    动物    SD 大鼠～ 雄性～体重 240~280 g～由中山大学实验动物中心提供～粤监证字:2006A064。     饲养条件:普通级动物房～大鼠每笼 5~6 只～饲养 3 d 后启用～由专人饲养管理。动物室灯光 12 h 照明～通风和空调设备良好～室温控制在,25〒4,?～相对湿度为 50%~70%。动物房按常规定期消毒。     1.3    药物稀释方法、给药途径及体积    取同一批号的各实验所用药品～用生理盐水配制～每日现配制现用。     1.4    方法    在进行正式实验前先做预实验摸索最 适宜的实验浓度和给药体积。确定 KCl 最佳实验浓度 100    mol/L,NE  最佳实验浓度  100    mol/L,苦参提取物选取 10   g/mL、50   g/mL、250   g/mL 3 个浓度,终浓度,。     取成年雄性 SD 大鼠,体重 250~ 300 g,～脱胸主椎处死～迅速分离胸主动脉。血管置于改良 KH 营养液,营养液预先通入混合氧气预饱和,的培养皿内～小心去掉血管外部脂肪、结缔组织和细小分支～避免过度牵拉以防损伤内皮。分离完全后将血管剪成约 3 mm 长的血管环。将血管环穿入折成直角的钢丝中。在两个三角形钢丝环的顶部各系一根细线～线的另一端分别固定于张力换能器和置于盛有 5 mL 营养液的浴槽的标本板底部的小钩上～使动脉环浸泡于营养液中～持续通入混合气,95% O2 和 5% CO2,～内槽恒温 37?。开始加 1.5 g 张力负荷～不断调整张力水平～使之维持在 1.5 g 左右,低于1.35 g 或高于 1.65 g 开始调整,～稳定 60 min,每 15 min 沿浴槽壁换  38? KH  液～5 mL/ 次,。标本平衡 60 min 后～用 KCl, 60 mmol/L,检验血管活性～动脉环的收缩～在其收缩达到高峰后～用 HK 营养液洗标本 4 次。10 min 后再加入 KCl,60 mmol/L,～记录动脉环的收缩～在两次加 KCl 后动脉 环收缩最大幅度小于 10% 者可用于实验～大于 10% 者弃去不用。动脉环收缩张力信号通过 RM6240 多道生理信号采集处理系统,成都仪器厂,的四通道接头传输到计算机相应处理软件上进行数据记录和。最终所有实验数据均以 x〒s 表示。     1.5    数据处理    所有实验数据以 x〒s 表示。计量数据由 SPSS 13.0 统计软件进行方差分析及组间检验。     2    结    果     2.1    对大鼠胸主动脉环静息张力的影响    见表 1。由表 1 可见～10   g/mL、50   g/mL、250   g/mL 3 个梯度浓度的苦参提取物对胸主动脉环静息张力均无明显的舒张作用,与生理盐水对照组比较 P > 0 1.05,。提示苦参提取物对大鼠胸主动脉环静息张力无明显的改变作用。     2.2    对 KCl 所引起的胸主动脉环收缩张力的影响    见表 2。 由表 2 可见～10   g/mL、50   g/mL、250   g/mL  3 个梯度浓度的苦参提取物对 KCl 引起的胸主动脉环收缩有一定的抑制作用～抑制率分别为 8.59%、13.59% 和 18.79%～有一定的剂量依赖关系。提示苦参提取物对 KCl 引起的大鼠胸主动脉环收缩有一定的抑制作用。     2.3    对 NE 所引起的胸主动脉环收缩张力的影响    见表 3。由表 3 可见～10   g/mL、50   g/mL、250   g/mL 浓度的苦参提取物对 NE 引起的胸主动脉环收缩有一定的抑制作用～抑制率分别为 12.03%、16.56% 和 21.03%～有一定的剂量依赖关系。提示苦参提取物对 NE 引起的大鼠胸主动脉环收缩有一定的抑制作用。     3    讨    论     动物的个体差异对实验结果有较大 的影响～尤其是实验结果不明显的情况下。为了获得理想的实验结果～必须从实验以及实验过程中的每一步～都需要充分地考虑个体差异的问题。如每次血管环实验的实验样品——血管环～应取自同一大鼠胸主动脉～这样可以大大减少两只大鼠之间的个体差异～并且每次使用同一大鼠的动脉可以提高各组数据之间的对比性。而实验过程中同时要注意器械～如通入气体、液体恒温等。实验过程中～必须保证每个血管环都处于几乎相同的环境下。采用四通装置通入气体～并且使用同一型号、可以控制气体流量的通气装置。     本实验研究发现苦参提取物对去甲肾上腺素和 KCl 引起的大鼠胸主动脉血管环的收缩则有明显抑制作用～但它究竟是通过何种途径来影响血管的舒张～NE 是一种调节血压的重要的神经递质～能兴奋心肌细胞和血管平滑肌细胞上的α受体～激活依赖蛋白激酶～钙通道磷酸化～导致钙通道开放～使 Ca2+ 内流增加和细胞内的钙池释放 Ca2+～引起 Ca2+ 浓度增浓度高[4]。KCl 可以激活电压依赖性钙通道～导致钙内流而引起动脉环收缩[5]。KCl 和去甲肾上腺素引起血管收缩均与 Ca2+ 的浓度的升高有关。因此苦参提取物可能通过蛋白激酶或离子通道等各途径引起 Ca2+ 外流或流入钙池～从而使血管收缩的程度降低～要彻底证明此推断～有待更进一步的研究。 【参考文献】   〔1〕Pauli GF, Ofterdinger-Daegel S, Teborg D, et al. Digitalis, Scrophula ria & Co. A pharmaceutical survey of Scrophulariaceae〔J〕. Dtsch Apoth Ztg, 1995, 135(2):21 〔2〕李医明, 曾华武. 玄参中环烯醚萜甙和苯丙素甙对 LTB4产生及血小板聚集的影响〔J〕. 第二军医大学学报, 1999, 20(5):301-305 〔3〕张银娣, 沈建平. 绵毛黄芪苷和苦玄参提取物的中 枢抑制作用〔J〕. 南京医学院学报, 1990, 10(1) 〔4〕周新妹. 芦丁对离体大鼠主动脉环的舒张作用及相 关机制〔J〕. 中国药学杂志, 2006, 41(6):431-433 〔5〕郑泉, 刘东. ATP敏感性和Ca2+激活的钾通道对血 管平滑肌的作用〔J〕. 国外医学〃生理病理科学与临床分 册, 1995, 15(2):109-110 〔6〕张洁. 丹参酮IIA磺酸钠对原代培养猪冠脉滑肌ATP 敏感钾通道、钙激活钾通道的影响〔J〕. 沪州医学院学报, 2000, 23(3):177- 179