蛋白质、多肽等大分子的质谱分析

蛋白质、多肽等大分子的质谱 蛋白、多等大分子的分析质质质质质质质质质质质质质质质质器: 1、基助激光解吸附离行质质质质质质质质质质质质质质质质(MALDI-TOF MS)2、基助激光解吸附离串行质质质质质质质质质质质质质质质质质质(Autoflex III MALDI-TOF/TOF) 3、升液相四杆行串质质质质质质质质质质质质质质质质质质质(micrOTOF-Q II? ESI-Qq-TOF) 主要用质质: 1、生物大分子的分子量质质 2、蛋白、多的度定质质质质质质质质质 3、蛋白的指质质质质质质质质质 4、混合分的分子量分布质质质质质质质质质质 5、合成物的分子量与度价质质质质质质质质质质质质 6、重蛋白的分子量与度价质质质质质质质质质质质质质质 7、蛋白的多质质质质质质质 8、血清多的质质质质质 9、PEG修的蛋白物的研究质质质质质质质质质 质品要求: 1、品含量质质质质: 50-100Fmol (液体质5ul) 2、品形式质质质质: 液体,干粉,胶粒/条质 3、非胶品质质: 质质质性<20mM,无PBS、SDS和尿素等物质4、胶品质质质: 质质质质质质质质质质质质质质质染程中未使用戊二作固定 5、保存方式: 液体建低温,胶用去离子水防干质质质质质质质质质质质质质 蛋白质及多质质质质定 质介 　　博生物有限公司蛋白质质质室于奥2006年质始质外提供多质和蛋白质质质服质～包括多质和蛋白质的分子量和序列质定～蛋白质质质定。博采用串质质质法;奥Tandem Mass Spectrometry, MS/MS,质定蛋白～可性高。蛋白质质消化形成的质段质入质质～一质质质质质多质分靠胰 子的大小～然后再质段打碎～形成一系列子将离即N端子系列;离B系列,和C端碎片子系列;离Y系列,。质质再质质碎片子离的大小～二质质质。质质据蛋白据质质行比质～质得质段的序列～特定的多质序列质质着特定的蛋白～质而质定出待质质蛋白。除了即将数与数从 质定质蛋白～我质的液相色质和质质质用平台;个Liquid Chromatography- Tandem Mass Spectrometry, LC-MS/MS,质具有分析混合蛋白的能力。MALDI-TOF MS;Matrix Assisted Laser Desorption Ionization Time of Flight Mass Spectrometry,是一质常用另的质质平台～通质质指质质质;Peptide Mass Fingerprinting, PMF,质定蛋白质。来MALDI-TOF MS的质定质果有有基酸序列信息没没氨～最质得到的是蛋白据质多质量相同或相似的候质蛋白列～相质而言可性质低～且数个靠并MALDI-TOF MS无法质定混合蛋白。服质 1.质蛋白质定个 A)用于质定质化的质蛋白的溶液或粉末～或质质个SDS-PAGE;Sodium Dodecyl Sulfate Polyacrylamide Gel Electrophoresis,的质个条个质或二质质泳的质点。 B)蛋白质解成多质。 C)液相分多质～子化的多质质入质质～母子质质～母子裂解成一系列子子～子子质质。离离离离离离 D)数据质质索。 E)人工质质～质出质告。 2.蛋白混合物的质定 A)用于质定含多质蛋白的混合物～根据质品的质质程度采取不同的策略分后再质行质质质定。离 3.差蛋白分析异 A)相质定量,比质质质胞两/体找异液中的蛋白～出差蛋白。 服质质质 采用正的质流液相系质～具有更高的敏度。真灵 串质质质～提供序列信息～蛋白质定可性高。靠 采用LC-ESI-MS/MS;Liquid Chromatography Electrospray Ionisation Tandem Mass Spectrometry,配置～适用于质质质品。 质定质例 　　质2质不同量Apomyoglobin蛋白;Sigma～A8673,SDS-PAGE质。质泳后的蛋白质切～质解后使用我质的液相色质和质质质将条胶用平台质质～质果如表1。质质质果质示的是质色箭质所指示的位置切下的;胶条32ng,的质定质果。使是考质斯亮质染色微弱的质～仍即条能得到好的质质质定质果很[表1]。 质2 Apomyoglobin蛋白质泳质 表1 质质质定Apomyoglobin蛋白质;条32ng,质果ReferenceScoreCoverageMWAccessionPeptideMyoglobin90.2749.3517072.0255683511139 [Equus caballus] 质质质质质质质质质质质分析的目的主要是确分子量,当然采用MS/MS可以部分的了解多序列的信息,但质质质质质质质质是个需要比全的数据作基,分析才能比准确。由于多性质质质质质质质质质质质质质质质质质质质质质质质质质质质质质质 质质质质质质质质质质质质质质质质质质质质质质质质质质质质质不定,需要采用离技,目前多分析主要是使用，ESI-MS,,基助激光质质质质质解吸，MALDI_MS,其中可以出多荷峰,荷数目和多序列上的氨质质质质质质质质质质质质质质质质质质质质质质质质基,胍基,咪基的数目有,因此,常出了双荷,三荷等离子峰。质质质质质质质质质质质质质质质质质质质质质质质质质质质质MALDI_MS可以分析蛋白大分子,而且通常情况下很少多荷,因此数据直接了分子离子峰,容易质质质质质质质质质质质质质质质质质质质质质质分析。此外,通常在分析或蛋白程中,需要添加质质质质质质质质质质质质质质NH4、Na、K等离子,提高灵敏度,所以,一般在质质质质质质质质质质质质质中或出一峰,分:，M+H,+、，M+NH4,+、，M+Na,+、，M+K,+