[doc] 12种抗阴道毛滴虫中草药对乳酸杆菌生长与产酸能力的影响

[doc] 12种抗阴道毛滴虫中草药对乳酸杆菌生长与产酸能力的影响 12种抗阴道毛滴虫中草药对乳酸杆菌生长 与产酸能力的影响 荫伸d2008年第21卷第4期GansuJournalofTCM,2008VoL21J7\『0.4 ci]豌囡迫目蠲臼0窜窗 乳圈四固鳍恐圈国国廖嘞 毛樱逾,王光西,张育华,杨兴友 泸州医学院病原生物学教研室,四川泸州646000 摘要目的:研究l2种抗阴道毛滴虫中草药对乳酸杆菌生长及产酸的影响.:以嗜酸乳酸杆菌作为实验 菌株,测定白头翁,青蒿,百部等l2种中草药的最小抑茵浓度(MIC).再将各中草药原液(以原生药含量计1g/mL)按 倍比稀释法配制l:2;l:4;1:8和1:16浓度的含药MRS液体培养基,调定其初始pH为7.4,接种乳酸杆菌,厌氧培养 48小时后测定其终末pH.结果经单因素方差分析其统计学意义.结果:大部分所选中草药在0.5g/mL浓度下对乳酸 杆菌的生长无明显的抑制作用;大黄和乌梅对乳酸杆菌的产酸能力有较明显的抑制作用;白头翁,仙鹤草,苦参,百 部,花椒,远志,青蒿和常山对乳酸杆菌的产酸能力无显着影响;蛇床子和补骨脂的加入甚至能增强乳酸杆菌产酸能 力.结论:所选的大部分中草药对乳酸杆菌的生长和产酸能力无显着抑制作用,蛇床子和补骨脂甚至能增强乳酸杆 菌产酸能力,这就为进一步研发中药和微生物合剂提供实验依据. 关键词阴道毛滴虫;中草药:乳酸杆菌;产酸能力 中图分类号:R287.4文献标识码:A文章编号:1004-6852(2008)04-0055—02 滴虫性阴道炎是一种常见的妇科病.目前临床上治疗 滴虫病的药物除了WHO推荐的甲硝唑外,尚有多种中草药 被证实体外具有明显的抗阴道毛滴虫作用[1-2],并且在治疗 中多采用内服和局部灌洗的方式.然而女性阴道是个复杂 的生态环境,阴道内正常菌群的生长繁殖在维护女性阴道 自净作用中发挥着不可替代的作用.因此,选用的药物应该 不仅对阴道毛滴虫有杀灭作用,还不能影响正常菌群的生 长和作用的发挥. 乳酸杆菌是女性阴道内正常菌群的主要成员,本研究 对一些常用的并且已被证实具有明显抗阴道毛滴虫作用的 中草药进行体外试验,包括白头翁,苦参,百部,远志,大黄, 乌梅,仙鹤草,青蒿,蛇床子,补骨脂,花椒,常山等,研究它 们对乳酸杆菌生长与产酸的影响,为临床用药提供参考. 1材料与方法 1.1实验菌株及菌液制备嗜酸乳酸杆菌(Lactobaci卜 lusacidophilus),编号1.1854,购自中国科学院微生物 研究所.将复苏48小时的乳酸杆菌接种于MRS液体培养基 中,80%N2,20%C~,37?下厌氧培养24小时,涂片检查后将 菌液以3000r/min离心5min.收集细菌,无菌生理盐水 洗菌2次,以麦氏比浊法在无菌生理盐水中调整为27×10. CFU/mL. 1.2中药的制备各药物由泸州医学院附属中医院制药 室制备.将药物各200g,切碎后,分别置于2000mL蒸馏水 中,浸泡2小时,煮沸后微火煎30分钟,取出滤液:同法再煎 煮2次,将3次滤液混合,8层纱布过滤,加热浓缩成200mL 即成原液(以原生药含量计1g/mE),高压灭菌后置于4? 冰箱中备用. 1.3各种中药对乳酸杆菌的最小抑菌浓度(MIC)的测定将 上述各中药原液按2倍稀释法与MRS琼脂培养基配制成 1:2,1:4,1:8和1:16的含药琼脂固体培养基,使其终浓度达 到0.5g/mL,0.25g/mL,0.125g/mL和0.0625g/mL(均以原 生药含量计).实验分5组,即4个不同浓度的实验组与1个55 药物空白对照组,每组4个平行培养基,分别接种等量乳酸 杆菌,80%N2,20%C0.,37?下厌氧培养48小时,以无细 菌生长的最低药物浓度为其MIC值. 1.4各种中药对乳酸杆菌产酸能力影响的测定根据各 药物对乳酸杆菌的MIC测定结果,选取MIC值以下4个浓 度梯度配制成含药MRS肉汤培养基.对生长抑制作用不明 显的药物,将原液按2倍稀释法与MRS肉汤培养基配制成 1:2,1:4,1:8和1:16的含药肉汤培养基,使其终浓度达到 0.5g/mL,0.25g/mL,0.125g/mL和0.0625g/mL(均以原生 药含量计).调定初始pH值为7.4.各组按体积比20:I接种 等量乳酸杆菌,80%N2,20%C0.,37”C下厌氧培养48小时.用 PHS一3C型酸度计测定培养物上清液的pH值,以不含药物 的MRS肉汤培养基中乳酸杆菌的产酸力作为对照.实验共 分5组,即4个不同浓度的实验组与1个空白对照组,每组 4个平行管. 1.5统计学处理每组4个平行管所测得的数据取平均 值,采用SPSS12.0统计软件分析.选用单因素方差分析的 Dunnettt检验,在口=0.05的情况下比较各实验组与对照 组之问有无统计学意义. 2结果 2.1各种中药对乳酸杆菌生长的影响在各种中药对乳 酸杆菌最小抑菌浓度的测定试验中,发现在大黄和乌梅 0.5g/mU药物浓度的琼脂培养基中,仍可见乳酸杆菌菌落 生成,但菌落较药物空白对照组的菌落明显细小,而白头 翁,仙鹤草,青蒿,苦参,蛇床子,百部,补骨脂,花椒,常山,远 志等则对乳酸杆菌的生长及菌落形态无明显的抑制作用. 沓 荫伸’差2008年第2塑旦Gam—uJo—urnalofTC—M,2008V—o1.21No.4 2.2各种中药对乳酸杆菌产酸能力的影响根据各种中药以原液按2倍稀释法配制成各种浓度的液体培养基,接种 对乳酸杆菌MIC的测定结果,乳酸杆菌在高浓度(0.5g/mL)等量乳酸杆菌后,48小时后测定pH值结果,见表1. 的各种药物固体培养基中仍能生长,因此,将各种中草药均由表l可以看出,在各种浓度的药物培养基中,pH值均 表148小时后各种中药不同浓度培养基上清液pH值 药物浓度 1:2(0.5g?mL一)1:4(0.25g?mL一)1:8(0.125g?mL一)1:l6(0.0625g?mL) 大黄 乌梅 白头翁 苦参 百部 远志 仙鹤草 青蒿 蛇床子 补骨脂 花椒 常山 药物空白组3.84 3.78 3.96 3.78 3.73 3.99 3.84 3.80 3.81 3.69 3.68 3.74 3.78 有不同程度的F降,表明乳酸杆菌仍能保持一定的产酸能力. 经统计学处理发现,含大黄和乌梅的药物培养基上清液的pH 值较高,和对照组的pH值比较有统计学意义(P<O.05),表明 大黄和乌梅对乳酸杆菌的产酸能力有较强的抑制能力,并 且随着药物浓度的增加,抑制作用增强.含蛇床子和补骨脂 的药物培养基上清液的pH值较低,和对照组的pH值比较 有统计学意义(P<O.05),表明蛇床子和补骨脂能增强乳 酸杆菌的产酸能力,而白头翁,苦参,百部,远志,仙鹤草,青 蒿,花椒和常山等各浓度实验组与对照组间均无统计学意 义(P>O.05). 3讨论 正常女性阴道内因乳酸杆菌的作用而保持酸性,可抑 制阴道毛滴虫及细菌的生长繁殖,而达到阴道白净的作用. 阴道毛滴虫的感染不仅破坏了阴道内环境,使阴道内pH值 升高,导致女性的阴道黏膜和宫颈出现炎性病变,而且与男 女不育不孕症及宫颈肿瘤等密切相关.世界卫生组织推荐 甲硝唑为杀滴虫的首选药物.甲硝唑杀滴虫的效果虽然明 显,但长期或反复地使用甲硝唑不仅有较明显的副作用且 具有致人基因突变和癌变的可能性[3];另一方面,阴道毛 滴虫的抗药性已日益明显3.近年来,许多学者致力于从我 国的传统中草药中寻找具有抗阴道毛滴虫的药物,并已初 获成效.本实验选取一些已有报道,甚至有初步药理机制研 究的抗滴虫中草药进行研究,以了解其对乳酸杆菌生长与 产酸的影响,寻求能在杀灭滴虫和维护正常菌群生长两方 面都有效的中草药. 从本实验可以看到,所选用的中草药对乳酸杆菌均无 杀灭作用.在大黄和乌梅的高药物浓度(O.5g/mL)琼脂培养 基中,乳酸杆菌仍能生长,但菌落较药物空白对照组明显细 小,表明这两种药物有一定妨碍乳酸杆菌生长的作用.其他 中草药,白头翁,苦参,百部,远志,仙鹤草,青蒿,蛇床子, 补骨脂,花椒和常山,即使在高药物浓度的琼脂培养基中对 乳酸杆菌的生长也没有显着的影响.而在所有含不同浓度 中草药的液体培养基中,都可见乳酸杆菌生长,并且含药培 养基上清液的pH值都有不同程度的下降,表明乳酸杆菌在 这些含药培养基中仍能保持一定的产酸能力.其中大黄和 乌梅对乳酸杆菌的产酸能力有较明显的抑制作用,并且随 着药物浓度的增加而抑制作用增强.蛇床子和补骨脂的加 入甚至能增强乳酸杆菌的产酸能力.其他药物白头翁,仙鹤 草,苦参,青蒿,百部,远志,花椒和常山则对乳酸杆菌的产 酸能力无显着影响. 中草药虽然在药效上没有一些西药来的强烈,但由于 它们都是纯天然,毒副作用很低的制品,故越来越受到人们 的青睐.本实验选用的中草药虽然在体外有明显抗滴虫作 用,但本实验结果显示这些药物中的大部分对乳酸杆菌的 生长和产酸能力无抑制作用,蛇床子和补骨脂甚至有增强 乳酸杆菌产酸能力的作用.另外,主要成分为乳酸杆菌的用 于临床治疗滴虫性阴道炎的微生态制剂_5也取得了满意 的疗效.这就为进一步将中药和微生态制剂合用于滴虫性 阴道炎的临床治疗提供实验依据.有望提高疗效,缩短疗 程,降低复发率和药物的毒副作用. 参考文献 【1]万红娇,马佩莲,马明良,等.二十种中药体外抗阴道毛滴虫 作用的研究【J].中国中医药科技,1998,5(4):218-219. [2]郭永和,刘永春,秦剑.11种中药体外灭阴道毛滴虫[J].时 珍国医国药,2000,11(4):297-298. 【3]GoldmanP.Metronidazole:provenbenefitandpoten tialrisksfJ].JonesHopkinsMedJ,1980,147:1-9. 【4]NarcisiEM,SecorWE.Invitroeffectoftinidazole andfurazolidoneonmetronidazole—resistantTricho- monasvaginalis【J].AntimicrobAgentsChemother,1996, 40-1121一l125. 【5]白云,曹玉莲,郝明宇,等.乳酸杆菌活菌制剂治疗滴虫性阴 道炎的临床研究【J].山西医药杂志2005,34(9):761—762. (收稿日期2007—09—04) 卯”趴”跎 343333333333 趴跎趴趴 443333333333 盯鹳??髂 543333333333