右侧芳香胺类药物的分析

右侧芳香胺类药物的分析 新疆医科大学续页 第七章 芳香胺类药物的分析 第七章 芳香胺类药物的分析 教学目的和要求 1、进一步掌握结构、性质与鉴别检查、含量测定的关联。 2、熟悉芳胺类、苯乙胺类、芳氧丙醇胺类类药物的分析方法。 3、掌握我国药典收载的此类药物的质量。 4、综合运用所学知识，对分析方法评价、比较和选择，逐步培养制定药物质量标准的能力。 5、进一步掌握常用的分析方法:高效液相色谱法，非水滴定法，溴量法。 教学重点，难点 重点 1(芳胺类药物的亚硝酸钠滴定法，用永停法指示终点。药典收载用此法进行含量测定的药物:苯佐卡因;盐酸普鲁卡因及注射液;盐酸普鲁卡因胺及片剂，注射液;醋氨苯砜及注射液;盐酸克仑特罗 2(此类药物的非水滴定法 难点: 亚硝酸钠法测定含量的实验条件，此法对伯胺和仲胺测定时的不同化学反应 第一节 芳胺类药物的分析 芳胺类药物主要分为两类:一类为芳伯氨基未被取代，而在芳环对位有取代的对氨基苯甲酸酯类。另一类则为芳伯氨基被酰化，并在芳环对位有取代的酰胺类药物。 一、 结构与性质 (一) 对氨基苯甲酸酯类药物 本类药物分子中都具有对氨基苯甲酸酯的母体，结构通式如下: 1、典型药物:苯佐卡因、盐酸普鲁卡因和盐酸丁卡因等局部麻醉药。结构为: 1 新疆医科大学教案续页 第七章 芳香胺类药物的分析 苯佐卡因 盐酸普鲁卡因 (Benzocaine) (Procaine Hydrochloride) 盐酸丁卡因 (Tetracaine Hydrochloride) 盐酸普鲁卡因胺(抗心律失常药)因其化学性质与本类药物很相似，也在此一并列入讨论。其结构如下: 2、主要化学性质 1)芳伯氨基特性 显重氮化,偶合反应;与芳醛缩合反应;易氧化变色等。 2)水解特性 含酯键(或酰胺键)易水解。其水解的快慢受光线、热或碱性条件的影响。水解产物主要为对氨基苯甲酸(PABA)。 3)弱碱性 除苯佐卡因外，因其脂烃胺侧链为叔胺氮原子，故具有弱碱性。因此能与生物碱沉淀剂发生沉淀反应;但在水溶液中不能用标准酸直接滴定，在非水溶剂中能滴定。 4)其它特性 本类药物的游离碱多为碱性油状液体或低熔点固体，难溶于水，可溶于有机溶剂。其盐酸盐均系白色结晶性粉末，具有一定的熔点，易溶于水和乙醇，难溶于有机溶剂。 (二) 酰胺类药物 本类药物均系苯胺的酰基衍生物，其共性是具有芳酰氨基，基本结构为: 1、典型药物:对乙酰氨基酚(扑热息痛)等解热镇痛药、盐酸利多卡因和盐酸布比卡因等局部麻醉药及醋氨苯砜抗麻风药。结构为: 对乙酰氨基酚 醋氨苯砜 2 新疆医科大学教案续页 第七章 芳香胺类药物的分析 (Paracetamol) (Acedapsone) 盐酸利多卡因 盐酸布比卡因 (Lidocaine Hydrochloride) (Bupivacaine Hydrochloride) 2、主要化学性质 1)水解后显芳伯氨基特性 芳酰氨基在酸性溶液中易水解为芳伯氨基，并显芳伯氨基特性反应。水解反应的速度受空间位阻影响:对乙酰氨基酚>利多卡因、布比卡因。 2)水解产物易酯化 对乙酰氨基酚和醋氨苯砜?醋酸?醋酸乙酯的香味。 3)酚羟基特性 对乙酰氨基酚(FeCl)。 3 4)弱碱性 利多卡因和布比卡因的脂烃胺侧链有叔胺氮原子，显碱性，可以成盐，与生物碱沉淀剂发生沉淀反应。其中与三硝基苯酚试液反应生成的沉淀具有一定的熔点。 5)与重金属离子发生沉淀反应 盐酸利多卡因和盐酸布比卡因酰氨基上的氮可在水溶液中与铜离子或钴离子络合，生成有色的配位化合物沉淀。此沉淀可溶于氯仿等有机溶剂后呈色。 此外，本类药物的紫外吸收和红外吸收光谱特征均可供分析用。 二、鉴别试验 (一) 重氮化,偶合反应 分子结构中具有芳伯氨基或潜在芳伯氨基的药物，均可发生重氮化反应，生成的重氮盐可与碱性β,萘酚偶合生成有色的偶氮染料。 苯佐卡因、盐酸普鲁卡因和盐酸普鲁卡因胺(盐酸溶液中) + 亚硝酸钠进行重氮化反应; 对乙酰氨基酚和醋氨苯砜(盐酸或硫酸)加热水解 + 亚硝酸钠进行重氮化反应。 如盐酸普鲁卡因的鉴别反应如下: 3 新疆医科大学教案续页 第七章 芳香胺类药物的分析 又如对乙酰氨基酚的鉴别方法 取本品约0.1g，加稀盐酸5ml，置水浴中加热40分钟，放冷;取0.5ml，滴加亚硝酸钠试液5 滴, 摇匀, 用水3ml稀释后，加碱性β,萘酚试液2ml，振摇，即显红色。 盐酸丁卡因结构中的芳香仲胺在酸性溶液中与亚硝酸钠反应，生成乳白色的 N,亚硝基化合物沉淀(可与具有芳伯氨基的同类药物区别)。 (二) 与三氯化铁反应---对乙酰氨基酚(+FeCl试液?蓝紫色)。 3 (三) 与重金属离子反应 2+2+ 1.与Cu和Co反应 盐酸利多卡因，在碳酸钠试液中，与硫酸铜反应生成蓝紫色配位化合物，溶于氯仿则显黄色。(盐酸普鲁卡因、盐酸丁卡因和苯佐卡因等无此反应)。 盐酸利多卡因，在酸性溶液中与氯化钴试液反应，生成亮绿色细小钴盐沉淀。 2+ 2. 与Hg反应 盐酸利多卡因 + 硝酸汞试液煮沸?显黄色;对氨基苯甲酸酯类药物显红色或橙黄色，可与之区别。 3. 羟肟酸铁盐反应 盐酸普鲁卡因胺分子中具有芳酰胺结构，加入浓过氧化氢溶液，缓缓加热至沸后，先被氧化成羟肟酸，再与三氯化铁作用形成配位化合物羟肟酸铁，其溶液显紫红色，随即变为暗棕色至棕黑色。中国药典95年版采用本法鉴别盐酸普鲁卡因胺。 (四) 水解产物反应 本类药物分子中有些具有酯的结构，在碱性条件下水解，利用其水解产物与试剂的反应进行鉴别。中国药典95年版采用此法鉴别盐酸普鲁卡因、苯佐卡因。 1. 盐酸普鲁卡因的鉴别方法 取本品约0.1g，加水2ml溶解后，加10,氢氧化钠溶液1ml，即生成白色沉淀，加热变为油状物(普鲁卡因);继续加热，产生的蒸汽(二乙氨基乙醇)能使湿润的红色石蕊试纸变为蓝色;热至油状物消 4 新疆医科大学教案续页 第七章 芳香胺类药物的分析 失后(生成可溶于水的对氨基苯甲酸钠)，放冷，加酸酸化，即析出白色沉淀。此沉淀能溶于过量的盐酸。 2. 苯佐卡因的鉴别方法 取本品约0.1g，加氢氧化钠试液5ml，煮沸，即有乙醇生成，加碘试液，加热，即生成黄色沉淀，并发生碘仿的臭气。 (五) 制备衍生物测熔点 (六) 紫外特征吸收光谱 (七) 红外吸收光谱 红外吸收光谱具有特征性强，专属性好的特点。因此，国内外药典均把红外吸收光谱作为一种鉴别方法，而且采用该法鉴别的药品不断增加。如中国药典(1995年版)用红外吸收光谱法鉴别的药品，由1990年版的207种增加到316种。该法特别适用于化学结构比较复杂、化学结构相互之间差别较小的药物的鉴别与区别。因为这些药物采用其他理化方法难以进行区别，而用红外吸收光谱法就比较容易区别。以盐酸普鲁卡因与盐酸普鲁卡因胺的红外图谱为例说明。 四、杂质检查 (一) 对乙酰氨基酚的杂质检查 合成工艺:A、对硝基氯苯?水解?对硝基酚?还原?对氨基酚?乙酰化，制得;B、酚?亚硝化、还原?对氨基酚，乙酰化。在生产过程中除可能引入一般杂质外，还可能引入特殊的杂质。 1.乙醇溶液的澄清度与颜色 生产工艺中使用铁粉作为还原剂，可能带入成品中，致使乙醇溶液产生浑浊。中间体对氨基酚的有色氧化产物，在乙醇中显橙红色或棕色。 检查方法 取本品1.0g，加乙醇10ml溶解后，溶液应澄清，无色;如显浑浊，与1号浊度标准液比较，不得更浓;如显色，与棕红色2号或橙红色2号标准液比较,不得更深。 2. 有关物质 由于本品的生产工艺路线较多，不同生产工艺路线所带入的杂质也有所不同，这些杂质主要包括中间体、副产物及分解产物。例如:对氨基酚、对氯乙酰苯胺、O-乙酰基对乙酰氨基酚、偶氮苯、氧化偶氮苯、苯醌和醌亚胺等。以对硝基氯苯为原料，可能引入对氯乙酰苯胺，药典采用薄层色谱法对此项杂质进行限度检查。 5 新疆医科大学教案续页 第七章 芳香胺类药物的分析 检查方法 取本品的细粉1.0g，置具塞离心管或试管中，加乙醚5ml，立即密塞，振摇30分钟，离心或放置澄清，取上清液作为供试品溶液;另取每 1ml中含对氯乙酰苯胺1.0mg的乙醇溶液适量，用乙醚稀释成每1ml中含50μg的溶液作为对照液。吸取供试品溶液200μl与对照溶液40μl，分别点于同一硅胶GF 薄板上。以氯仿,丙酮,甲苯(13:5:2)为展开剂，展开后，晾干，置紫254 外光灯(254nm)下检视，供试品溶液如显杂质斑点，与对照溶液的主斑点比较，不得更大，更深。 3.对氨基酚 本品在合成过程中，由于乙酰化不完全或贮藏不当发生水解，均可引入对氨基酚，使本品产生色泽并对人体有毒性，应严格控制其限量。 利用对氨基酚在碱性条件下可与亚硝基铁氰化钠生成蓝色配位化合物，而对乙酰氨基酚无此反应的特点，与对照品比较，进行限量检查。 检查方法 取本品1.0g，加甲醇溶液(1?2)20ml溶解后，加碱性亚硝基铁氰化钠试液1ml，摇匀，放置30min;如显色，与对乙酰氨基酚对照品1.0g加对氨基酚50μg用同一方法制成的对照液(临用配制)比较，不得更深(0.005,)。 (二) 盐酸普鲁卡因注射液中对氨基苯甲酸的检查 普鲁卡因分子结构中有酯键，易发生水解反应。其注射液制备过程中受灭菌温度、时间、溶液pH值、贮藏时间以及光线和金属离子等因素的影响，可发生水解反应生成对氨基苯甲酸和2-二乙氨基醇。其中对氨基苯甲酸随贮藏时间的延长或高温加热，可进一步脱羧转化为苯胺，而苯胺又可被氧化为有色物，使注射液变黄，疗效下降，毒性增加。故中国药典90年版规定，本品注射液应检查水解产物对氨基苯甲酸，其限度不得超过1.2,。 检查方法 精密量取本品，加乙醇稀释使成为每1ml中含盐酸普鲁卡因2.5mg的溶液，作为供试品溶液。取对氨基苯甲酸对照品,加乙醇制成每1ml中含30μg的溶液,作为对照品溶液。取上述两种溶液各10μl，分别点于含有羧甲基纤维素钠为粘合剂的硅胶H薄层板上，用苯,冰醋酸,丙酮,甲醇(14:1:1:4)为展开剂，展开后，取出晾干，用对二甲氨基苯甲醛溶液(2,对二甲氨基苯甲醛乙 6 新疆医科大学教案续页 第七章 芳香胺类药物的分析 醇溶液100ml，加入冰醋酸5ml制成)喷雾显色。供试品溶液如显与对照品溶液相应的杂质斑点，其颜色与对照品溶液主斑点比较，不得更深。 7 新疆医科大学教案续页 第七章 芳香胺类药物的分析 五、含量测定 (一) 亚硝酸钠滴定法 本类药物分子结构中具有芳伯氨基或水解后具有芳伯氨基，在酸性溶液中可与亚硝酸钠反应，可用亚硝酸钠滴定法测定含量。由于本法适用范围广，常被国内外药典所采用。 中国药典(2005年版)收载用本法测定含量的有:苯佐卡因、盐酸普鲁卡因及其片剂，盐酸普鲁卡因胺及其片剂与注射液，醋酸氨苯砜及其注射液。 1. 原理 芳伯氨基药物在酸性溶液中与亚硝酸钠定量反应，生成重氮盐，用永停法或外指示剂法指示反应终点。 2.测定的主要条件 重氮化反应的速度受多种因素的影响，亚硝酸钠滴定液及反应生成的重氮盐也不够稳定，因此在测定中应注意以下主要条件: 1)加入适量溴化钾加快反应速度:在盐酸存在下，重氮化反应的历程为: 慢 快 快 整个反应的速度取决于第一步，而第一步反应的快慢与含芳伯氨基化合物中芳伯氨基的游离程度有密切关系。如芳伯氨基的碱性较弱，则在一定强度酸性溶液中成盐的比例较小，即游离芳伯氨基多，重氮化反应速度就快;反之，则游离芳伯氨基较少，重氮化反应速度就慢。所以，在测定中一般向供试溶液中加入适量溴化钾(中国药典规定加入2g)，使重氮化反应速度加快。 溴化钾与盐酸作用产生溴化氢，后者与亚硝酸作用生成NOBr: HNO ， HBr ? NOBr ，HO (1) 22 若供试溶液中仅有HCl，则生成NOCl: HNO ， HCl ? NOCl ，HO (2) 22 由于(1)式的平衡常数比(2)式的约大300倍，即生成的NOBr量大得多，也就是在供试液中NO+的浓度大得多，从而加速了重氮化反应。 8 新疆医科大学教案续页 第七章 芳香胺类药物的分析 2)加过量盐酸加速反应:因胺类药物的盐酸盐较其硫酸盐的溶解度大，反应速度也较快，所以多采用盐酸。盐酸的用量按其反应，1mol的芳胺需与2mol的盐酸作用，但实际测定时往往加入过量的盐酸，有利于:?重氮化反应速度加快;?重氮盐在酸性溶液中稳定;?防止生成偶氮氨基化合物，而影响测定结果。 酸度加大，反应向左进行，故可以防止偶氮氨基化合物的生成。若酸度过大，又可阻碍芳伯氨基的游离，反而影响重氮化反应速度。在太浓的盐酸中还可使亚硝 ,6。 酸分解。所以，加入盐酸的量一般按芳胺类药物与酸的摩尔比约为1:2.5 3) 室温(10,30?)条件下滴定:通常温度高，重氮化反应速度快;但温度太高，可使亚硝酸逸失，并可使重氮盐分解: 一般温度每升高10?，重氮化反应速度加快2.5倍，但重氮盐分解的速度亦相应地加速2倍;所以滴定一般在低温下进行。由于低温时反应太慢，经试验，可在室温下进行。 4)滴定管尖端插入液面下滴定:重氮化反应为分子反应，反应速度较慢，帮滴定不宜过快。为了避免滴定过程中亚硝酸挥发和分解，滴定时将滴定管尖端插入液面下约2/3处，一次将大部分亚硝酸钠滴定液在搅拌条件下迅速加入，使其尽快反应。然后将滴定管尖端提出液面，用少量水淋洗尖端，再缓缓滴定。尤其是在近终点时，因尚未反应的芳伯氨基药物的浓度极稀，须在最后一滴加入后，搅拌1,5分钟，再确定终点是否真正到达。这样可以缩短滴定时间，也不影响结果。 3.指示终点的方法 有电位法、永停滴定法、外指示剂法和内指示剂法等。药品标准中多采用永停滴定法或外指示剂法指示终点。 1)永停滴定法: 中国药典规定用永停法指示亚硝酸钠滴定法的终点。电极应为铂,铂电极系统。用亚硝酸钠液滴定，终点前，溶液中无亚硝酸，线路无电流通过，电流计指针指零。终点时溶液中有微量亚硝酸存在，电极即起氧化还原反应，线路中遂有电流通过，此时电流计指针突然偏转，并不再回复，即为滴定终点。 2)外指示剂法: (二) 非水溶液滴定法 9 新疆医科大学教案续页 第七章 芳香胺类药物的分析 (三) 分光光度法 对乙酰氨基酚在0.4,氢氧化钠溶液中，于257nm波长处有最大吸收，其紫外吸收光谱特征，可用于其原料及其制剂的含量测定。该法较亚硝酸钠滴定法灵敏度高，操作简便，因此被国内外药典所收载。如USP(24)采用甲醇,水混合溶剂，于244nm波长处测定吸收度，与对照品溶液进行对照测定其含量;而中国药典(2005年版)则采用百分吸收系数()法，测定对乙酰氨基酚原料、片剂、注射液、栓剂及胶囊剂的含量。 对乙酰氨基酚的测定 1. 2. 片剂溶出度测定 3. 分光光度法测定人唾液中对乙酰基酚的含量 (四) 比色法 (五) 盐酸普鲁卡因胺的快速荧光测定---参阅教材P128 (六) 高效液相色谱法 用高效液相色谱法，以苯甲酸为内标，可以同时测定盐酸普鲁卡因注射液中的普鲁卡因及其降解产物对氨基苯甲酸(PABA)，不需分离提取，方法准确简便。 98:133(盐酸普鲁卡因胺常用的鉴别反应有(AB) A. 重氮化—偶合反应 B. 羟肟酸铁盐反应 C. 氧化反应 D. 磺化反应 E. 碘化反应 97:137(采用亚硝酸钠法测定含量的药物有(CD) A. 苯巴比妥 B. 盐酸丁卡因 C(苯佐卡因 D. 醋氨苯砜 E. 盐酸去氧肾上腺素 95:85(下列药物中不能用亚硝酸钠滴定法测定含量者(A) 10 新疆医科大学教案续页 第七章 芳香胺类药物的分析 A. 乙酰水杨酸 B. 对氨基水杨酸钠 C. 对乙酰氨基酚 D. 普鲁卡因 E. 苯佐卡因 96:81(99:72). 亚硝酸钠滴定法中，加KBr的作用是(B) A. 添加Br- B. 生成NO+?Br- C(生成HBr D. 生成Br2 E. 抑制反应进行 95:75(中国药典(1990年版)所收载的亚硝酸钠滴定法中指示终点的方法为 (B) A. 电位法 B. 永停法 C. 外指示剂法 D. 内指示剂法 E. 自身指示剂法 96:127(亚硝酸钠滴定法中，可用于指示终点的方法有(BCDE) A. 自身指示剂法 B. 内指示剂法 C. 永停法 D. 外指示剂法 E. 电位法 例1. ChP(2000)亚硝酸钠滴定法测定对氨基水杨酸钠的含量时，指示滴定终 点的方法为(C) A. 自身指示终点法 B. 电位法指示终点 C. 永停滴定法 11 新疆医科大学教案续页 第七章 芳香胺类药物的分析 D. 氧化还原指示剂法 E. 酸碱指示剂法 例2. 以下那种药物中应检查对氨基苯甲酸(E) A. 盐酸普鲁卡因 B. 盐酸普鲁卡因胺 C. 注射用盐酸普鲁卡因 D. 盐酸普鲁卡因胺片 E. 盐酸普鲁卡因注射液 盐酸普鲁卡因采用亚硝酸钠滴定法测定含量时的反应条件是(ABCDE) 例3. A. 强酸 B. 加入适量溴化钾 C. 室温(10,30?)下滴定 D. 滴定管尖端深入液面 E. 永停法指示终点 12 新疆医科大学教案续页 第七章 芳香胺类药物的分析 第二节 苯乙胺类药物的分析 一、结构与性质 (一) 基本结构与典型药物 本类药物为拟肾上腺素类药物，共性为具有苯乙胺的基本结构。其中肾上腺素、盐酸异丙肾上腺素和盐酸多巴胺分子结构中苯环的3,4位上都有2个邻位酚羟基，与儿茶酚类似，都属于儿茶酚胺类药物。药典中收载本类原料药物近20种，在鉴别、检查和含量测定等方面具有代性的药物供分析用。本类药物的基本结构为: (二) 主要化学性质 1.弱碱性 本类药物分子结构中具有烃氨基侧链，其氮为仲胺氮，故显弱碱性。其游离碱难溶于水，易溶于有机溶剂，其盐可溶于水。 2.酚羟基特性 本类药物分子结构中具有邻苯二酚(或苯酚)结构，可与重金属离子络合呈色，露置空气中或遇光、热易氧化，色渐变深，在碱性溶液中更易变色。 3.光学活性 多数药物分子结构中具有手性碳原子，具有旋光性，可供分析用。 此外，药物分子结构中苯环上的其它取代基，如盐酸克仑特罗的芳伯氨基，也各具特性均可供分析用。还可利用其紫外吸收与红外吸收光谱进行定性或定量分析。 二、鉴别试验 (一) 与三氯化铁反应---酚羟基 3+肾上腺素和盐酸去氧肾上腺素等药物的分子结构中具有酚羟基，与Fe 离子络合显色，加入碱性溶液，随即被高铁离子氧化而显紫色或紫红色。 (二) 与甲醛,硫酸反应 肾上腺素和盐酸去氧肾上腺素等药物可与甲醛在硫酸中反应，形成具有醌式结构的有色化合物。 (三) 氧化反应---酚羟基 13 新疆医科大学教案续页 第七章 芳香胺类药物的分析 本类药物分子结构中多数具有酚羟基，易被碘、过氧化氢、铁氰化钾等氧化剂氧化而呈现不同的颜色。如肾上腺素在中性或酸性条件下，被碘或过氧化氢氧化后，生成肾上腺素红，放置可变为棕色多聚体;盐酸异丙肾上腺素在偏酸性条件下被碘迅速氧化，生成异丙肾上腺素红，加硫代硫酸钠使碘的棕色消退，溶液显淡红色。 重酒石酸去甲肾上腺素在上述条件下比较稳定，几乎不被碘氧化。为了与肾上腺素和盐酸异丙肾上腺素相区别，中国药典规定本品加酒石酸氢钾饱和溶液(pH 3.56)溶解，加碘试液放置5分钟后，加硫代硫酸钠试液，溶液为无色或仅显微红色或淡紫色。在此条件下肾上腺素和盐酸异丙肾上腺素可被氧化产生明显的红棕色或紫色。在pH 6.5的缓冲液中，这三种药物均可被碘氧化产生红色。故在pH 6.5条件下加碘试液，无法区别这三种药物。 (四) 紫外特征吸收与红外吸收光谱 (五) 与亚硝基铁氰化钠反应(Rimini试验)---脂肪伯氨基 三、杂质检查 (一) 酮体检查 (二) 有关物质检查 (三) 盐酸苯乙双胍中有关双胍的检查 四、含量测定 本类药物的原料多采用非水溶液滴定法和溴量法测定含量，其制剂的测定方法较多，有提取容量法、阴离子表面活性剂滴定法、比色法、紫外分光光度法和高效液相色谱法等。 (一) 非水溶液滴定法 在列举的13种典型药物中，有10种药物的原料药均采用非水溶液滴定法测定含量。常用的测定条件为:冰醋酸为溶剂，加入醋酸汞试液以消除氢卤酸的干扰，并用结晶紫指示液指示终点。仅盐酸甲氧明测定中以萘酚苯甲醇指示终点;盐酸苯乙双胍和盐酸克仑特罗的测定采用电位滴定法。如碱性较弱，终点不明显可加入醋酐，提高其碱性，使终点突跃明显。 1.重酒石酸去甲肾上腺素的测定 取本品0.2g，精密称定，加冰醋酸10ml，振摇溶解后(必要时微温)，加结晶紫指示剂1滴，用高氯酸滴定液(0.1mol/L) 14 新疆医科大学教案续页 第七章 芳香胺类药物的分析 滴定，至溶液显蓝绿色，并将滴定结果用空白试验校正。每1ml的高氯酸滴定液(0.1mol/L)相当于31.93mg的CHNO.CHO。 8113446 由于重酒石酸在冰醋酸溶液中酸性较弱，不干扰高氯酸的滴定和结晶紫指示剂终点颜色的变化。故可以高氯酸直接滴定。 2.盐酸克仑特罗的测定 取本品约0.25g，精密称定，加冰醋酸20ml，微热使溶解，放冷，加醋酸汞试液5ml，照电位滴定法，用高氯酸滴定液(0.1mol/L)滴定，并将滴定结果用空白试验校正。每1ml的高氯酸滴定液(0.1mol/L)相当于31.37mg的CHCN?HCl。 1218l22O *醋酸汞的作用--消除氢卤酸的干扰。 *为何用电位法指示终点,---由于盐酸克仑特罗的游离碱碱性较弱，终点突跃不明显。 3.硫酸沙丁胺醇的测定 取本品约0.4g，精密称定，加冰醋酸10ml，微热使溶解，放冷，加醋酐15ml和结晶紫指示液1滴用高氯酸滴定液(0.1mol/L)滴定，并将滴定结果用空白试验校正。每1ml的高氯酸滴定液(0.1mol/L)相当于57.67mg的(CHNO)2 HSO 。 1321324 -有机碱的硫酸盐，因硫酸在滴定液中酸性很强，只能滴定至HSO。 4 *为何在放冷的条件下加醋酐, ---防止氨基被乙酰化，乙酰化物碱性很弱，如为伯氨基的乙酰化物，以结晶紫为指示剂时不能被滴定，用电位滴定法尚可测定，但突跃很小，这样就会使滴定结果偏低。仲氨基的乙酰化物，以指示剂法和电位滴定法都不能被滴定。但在低温时可防止乙酰化，所以加冰醋酸溶解样品后，应在放冷的条件下再加醋酐。 (二) 溴量法 (三) 比色法 利用药物分子结构中的酚羟基可与亚铁离子络合显色，测定盐酸异丙肾上腺素注射液和盐酸多巴胺注射液的含量。也可利用分子结构中的芳伯氨基进行重氮化,偶合反应显色，测定盐酸克仑特罗栓剂的含量。所以比色法也是本类药物制剂常用的含量测定方法，具有灵敏和简便的优点。以盐酸克仑特罗栓的含量测定为例。 15 新疆医科大学教案续页 第七章 芳香胺类药物的分析 1.测定原理 加氯仿使栓剂基质溶解后，用盐酸液(9?100)提取盐酸克仑特罗，加亚硝酸钠试液后，则分子中的芳伯氨基重氮化，在酸性溶液中，与N-(1-萘基)-乙二胺偶合显色，在500nm波长处进行比色测定。 2.测定方法 对照品溶液的制备 供试品溶液的制备 测定方法 (四) 提取酸碱滴定法 (五) 肾上腺素的荧光分光光度法 (六) 高效液相色谱法 利用液相色谱的高效分离、高灵敏度和高选择性的测定方法，不但对本类药物制剂进行常规分析，而且还广泛用于本类药物的临床药浓监控和体内药物动力学研究。 练习题 例1. 能和重酒石酸去甲肾上腺素发生颜色反应的试液为(D) A. 浓硫酸 B. 甲醛试液 C. 氨试液 D. 甲醛—硫酸试液 E. 茚三酮试液 例2. 盐酸异丙肾上腺素的检查项目是(E) A. 有关物质 B. 二苯酮 C. 盐酸 D. 醛 E. 酮体 16 新疆医科大学教案续页 第七章 芳香胺类药物的分析 第三节 芳氧丙醇胺类药物一、结构与性质 (一) 典型药物的结构 OOCH2OHCH3 NHONHCH3.HClNHOCHCHCH33 3 OH 盐酸卡替洛尔 氧烯洛尔 主要理化性质新近发展很快的一类用于心脑血管病的药物。 氧烯洛尔:本品为白色结晶性粉末，味苦，在乙醇或丙酮中易溶，在乙醚或氯仿中略溶，在水中微溶。 盐酸卡替洛尔:本品为白色结晶性粉末，在水中溶解，在甲醇中略溶，在乙醇中极微溶解，在乙醚中几乎不溶，在冰醋酸中极微溶解。 二、鉴别试验 化学鉴别反应 紫外吸收峰特征: 盐酸卡替洛尔水溶液(8ug/ml),在215与252nm波长处有最大吸收。 氧烯洛尔乙醇溶液(40ug/ml)，在275nm波长处有最大吸收。 三、盐酸卡替洛尔中有关物质检查 TLC(高低浓度对比法) 限量1%(稀释100倍) 四、含量测定 非水滴定 分光光度法 体内药物分析(HPLC) 芳胺及芳烃胺类药物的分析小结 1、本类药物的结构和性质 2、芳胺类药物的鉴别试验方法和含量测定的亚硝酸钠滴定法， 17 新疆医科大学教案续页 第七章 芳香胺类药物的分析 芳胺类药物的特殊杂质检查和含量测定的非水溶液滴定法和分光光度法。 (1)鉴别试验:各鉴别试验所用试剂及产生的现象; (2)亚硝酸钠滴定法。原理、主要测定条件及注意事项; (3)对氨基酚的检查; (4)对氨基苯甲酸的检查; 3、苯乙胺类药物的鉴别、检查和含量测定方法。 [练习题及] 一、练习题 [A型题] 1(盐酸普鲁卡因注射液中检查的特殊杂质是 A.水杨醛 B. 间氨基酚 C.水杨酸 D.对氨基苯甲酸 E. 氨基酚 2(对乙酰氨基酚中检查的特殊杂质是 A.水杨醛 B. 间氨基酚 C. 对氨基酚 D.苯甲酸 E.苯酚 3(肾上腺素和盐酸去氧肾上腺素中检查的特殊杂质是 A.水杨醛 B. 间氨基酚 C. 对氨基酚 D.酮体 E. 苯甲酸 [B型题] A. 硫酸铜反应 B.氧化反应 C. 还原反应 D.水解后重氮化-偶合反应 E. 重氮化-偶合反应 1. 盐酸利多卡因 2. 肾上腺素 3. 盐酸普鲁卡因 4(对乙酰氨基酚 A. 溴量法 B. 紫外分光光度法 C. 亚硝酸钠滴定法 D. RP-HPLC法 E. 非水滴定法 5. 盐酸去氧肾上腺素 6. 肾上腺素注射液 7. 盐酸普鲁卡因 8(对乙酰氨基酚 [X型题] 18 新疆医科大学教案续页 第七章 芳香胺类药物的分析 1. 直接能与FeCl产生颜色反应的药物有 3 A. 盐酸普鲁卡因 B. 盐酸去氧肾上腺素 C. 对乙酰氨基酚 D. 盐酸利多卡因 E. 盐酸丁卡因 2. 直接和水解后能发生重氮化-偶合反应的药物有 A. 盐酸丁卡因 B. 盐酸普鲁卡因 C. 对乙酰氨基酚 D. 对氨基酚 E. 盐酸肾上腺素 二、答案精讲 [A型题] 1(D 因为盐酸普鲁卡因注射液在灭菌过程中, 易水解生成对氨基苯甲酸, 是盐酸普鲁卡因注射液中要检查的特殊杂质, 故只能选D。 2(C 3(D 因为肾上腺素和盐酸去氧肾上腺素中都检查酮体，酮体是其特殊杂质。故只能选D。 [B型题] 1.A 2.B 3.E 4.D 5.A 6.D 7.C 8.B [X型题] 1. B C 因为直接能与FeCl产生颜色反应的药物，要求分子结构中含有酚羟基，只有盐3 酸去氧肾上腺素和对乙酰氨基酚具有此结构。故只能选B，C。 2. B C D 因为直接和水解后能发生重氮化-偶合反应的药物，要求分子结构中含芳伯氨基或潜在芳伯氨基，只有盐酸普鲁卡因、对乙酰氨基酚和对氨基酚含有此结构。故只能选B，C，D。 19 新疆医科大学教案续页 第七章 芳香胺类药物的分析 20 新疆医科大学教案续页 第七章 芳香胺类药物的分析 21