贲门癌及癌前病变中细胞凋亡与FasL表达的关系

贲门癌及癌前病变中细胞凋亡与FasL表达的关系 贲门癌及癌前病变中细胞凋亡与FasL表达 的关系 JournalofMedicalForumVo1.26No.24December2005 贲门癌及癌前病变中细胞凋亡与 FasL表达的关系 李印郑世营葛锦峰.赵军.吴广州 河南省肿瘤医院胸外科郑州市450008 ? 19? 摘要目的研究贲门癌前病变及贲门癌中细胞凋亡与FasL表迭的关系,探讨细胞凋亡在贲门癌发生 中的作用.方法采用脱氧核糖核酸末端转移酶介导的dUTP缺口末端标记(TUNEI)技术及免疫组化染色对 . rE常胃黏膜l0例,慢性胃炎72例和贲门癌50例中凋亡细胞及FasL表达状态进行原位观察和比较.结果萎 缩性胃炎,I,?,?型肠化生及异型增生的凋亡细胞指数 (12.8%,17.0%,14.6%,9.6%,8.O%)显着高于正常 黏膜(3.4%)和癌(5.8%)(P<0.O1及P<0.05);异型增生组织凋亡细胞指数(8.O%)显着低于萎缩性胃炎 和I型,?型肠化生(12.8%,17.0%,14.6%;P<0.05及P<O.O1);?型肠化生的凋亡细胞指数(9.6%)显着 低于I型,?型肠化生(17.0%,14.6%;P<0.01及P<0.05).正常胃黏膜无FasL表达,贲门癌前病变及贲门 癌中均有不同程度的FasL表达.FasL表达阳性肠化生,异型增生和责门癌中的凋亡细胞指数(19.8%, 10.0%.8.3%)显着高于其阴性组(12.6%,6.1%,3.4%;P<0.05及P<0.01).结论 FasL对贲门癌前病变 及贲门癌组织细胞凋亡具有促进性调控作用,细胞凋亡调控异常在贲门癌发病中 可能起重要作用. 关键词贲门肿瘤癌前病变细胞凋亡FasL基因 中图分类号:R735.2文献标识码:A文章编号:1672—3422(2005)24-001. 9-04 ApoptosisandItsRelationshipwithFasLigandExpressionin CardiaCarcinomaandItsPrecancerousLesion LIYin,ZHENGShiying,GEJi咖ng,etal DepartmentofThoracicSurgery,HenanTumorHospital, Zhengzhou450008,China ABSTRACTObjectiveToinvestigatetheeffectsofapoptosisandFasligand(FasL)indifferent stagesofmalignanttransfcIrmationofcardiaepitheliuminprecancerouslesionsandcardiacarcinomas. MethodsUsingterminaldeoxynucleotidyltransfemse— mediatednickendlabelling(TUNEL)technique andimmuno— histochemicalstaining.weobservedtheapoptoticcellsandtheFasLexpressioninsituin10 casesofnormalcardiamucosa.72chronicgastritisand50cardiacaroinoma.ResultsTheapoptoticinde— xesinatrophicgastritis,typeI,IIandIUintestinalmetaplasiaandgastricdysplasia(12.8%,17.0%, 14.6%.9.6%.8.0%weresignificantlyhigherthanthatinnormalmucosa(3.4%)andcardiacarcinoma (5.8%;P<0.01andP<0.05).1heapoptoticindexingastricdysplasia(8.0%)wassignificantlylower thanthatinatrophicgastritisandtypeI,IIintestinalmetaplasia(12.8%,17.0%,14.6%;P<0.05andP< 0.01)andtheapoptoticindexintypemintestinalmetaplasia(9.6%)wassignificantlylowerth anthatin typesIandII(17.0%,14.6%;P<0.01andP<0.05).FasLwasdifferentlyexpressedincar diacarcino. masandprecancerouslesions.inintestinalmetaplasia.gastricdysplasiaandl'… 't"acarcinoma,theapoptot- icindexintheFasLpositivegroup(19.8%,10.0%,8.3%washigherthanthatintheFasLnegativegroup (12.6%.6.1%.3.4%;P<0.05andP<0.01).Conclusion,nleabnormalregulationofapoptosismay playanimportantroleinthepathogenesisofcardiacarcinoma.1heFasLcanpromoteapoptosi sincardia carcinomaanditsprecancerouslesions. KEYW0RDSCardianeoplasms:Precancerouscondition;Apoptosis;FasLgene 江苏省医学科技基金重点课题资助项目(No.200147) l苏州大学附属第一医院胸心外科苏州市215006 细胞凋亡是由基因调控的细胞主动死亡过 程,此过程的异常与肿瘤的发生有密切关系…. ? 2O? Fas配体(Fasligand,FasL)是一种介导细胞凋亡 的膜蛋白,与其受体Fas分子结合后,Fas分子向细 胞内传导细胞凋亡信号,引起Fas表达细胞凋 亡J.过去认为人类只有激活的T淋巴细胞有 FasL表达J,但近来发现一些肿瘤细胞亦有FasL 表达J.为了解FasL是否在贲门癌和癌前病变 中表达及其与细胞凋亡的关系,我们采用脱氧核 糖核酸末端转移酶介导的dUTP缺口末端标记 (TUNEL)技术及免疫组化染色对贲门癌及癌前病 变中FasL表达状态及其与细胞凋亡问的关系进行 观察,以期了解它们在贲门癌发病中的作用. 1材料与方法 1.1材料收集内镜活检标本及贲门癌手术切 除标本共132例,其中含正常胃黏膜10例,慢性胃 炎伴萎缩者16例,伴肠化生者36例,伴异型增生 者20例,贲门癌50例.贲门癌患者在手术前均未 接受放疗,化疗或免疫治疗.所有标本均经 lOOml/L福尔马林固定,石蜡包埋,4m连续切片, 并经HE染色病理诊断证实. 1,2方法 1.2.1TUNEL染色细胞凋亡原位检测试剂盒 (POD)为德国BoehringerMannheim公司产品.染 色步骤:?切片经二甲苯脱蜡,梯度乙醇水化;? 3ml/LH:0封闭30rain;(~)20mg/L蛋白酶K消化 液作用20rain;@TUNEL反应液.37%孵育60rain; ?过氧化物酶连接的抗荧光素抗体,37%孵育 30rain;?,?步后均以10mmol/LPBS(pH7.4) 振洗3次,每次5min;@DAB显色,苏木素复染,脱 水透明,封片.以PBS替代TUNEL反应液作阴性 对照,阳性对照切片经DNaseI预处理10rain,再 接TUNEL染色步骤. 1.2.2FasL免疫组化染色兔抗人FasI多克隆 抗体及免疫组化试剂盒(ImmunostainSPkit)均为 美国SantaCruz公司产品.石蜡切片常规脱蜡,水 化,继以免疫组化试剂盒检测,步骤按说进 匡垫垒查主l旦勇卷第24期 行.以PBS替代一抗作阴性对照. 1.2.3黏液组织化学染色及肠化分型采用AB (pH2.5)/PAS和HID/AB(pH2.5)两种黏液组织 化学染色.根据肠化生黏膜上皮组织学形态和细 胞分泌黏液不同,并参照Filipe的标准,将肠化 生分为I,?,?型. 1.2.4观察指标光镜下观察TUNEL染色及免 疫组化染色切片的显色反应,数5个以上高倍视 野,不少于1000个细胞,计数阳性细胞数并以百分 数表示,分别作为TUNEL阳性细胞(凋亡细胞)指 数及FasL阳性细胞密度,FasL表达阳性细胞数? 10%为阳性,<10%判为阴性. 1.3统计学处理采用SPSS10.0软件进行统计 分析,所得数据分别用t检验或x检验,细胞凋亡 数以均数?标准差(i?s)表示. 2结果 TUNEL阳性反应物质呈棕黄色,主要位于细 胞核内,浓缩的核质紧贴于核膜,或核质呈现均匀 的染色,少数细胞浆内亦有淡着色.正常胃黏膜凋 亡细胞主要位于表面上皮内,萎缩性胃炎肠化生 及异型增生组织凋亡细胞数量明显增多,在黏膜 全层均可见到,贲门癌组织凋亡细胞数量明显减 少,呈单个散在分布和(或)簇状分布,见图1.不 同胃黏膜病变中的凋亡细胞指数见表i.萎缩性 胃炎,I,?,?型肠化生,异型增生的凋亡细胞指 数显着高于正常黏膜和癌;异型增生的凋亡细胞 指数显着低于萎缩性胃炎和I,?型肠化生;nl型 肠化生的凋亡细胞指数显着低于I,?型肠化生, 与异型增生的凋亡细胞指数无显着差异;贲门癌 组织的凋亡细胞指数显着高于正常黏膜.FasL阳 性反应物质呈棕黄色,位于细胞浆内和(或)细胞 膜上,未见核内表达,见图2.正常胃黏膜无FasL 表达,萎缩性胃炎,肠化生,异型增生及胃癌中均 有程度不同的FasL表达,但表达率相差无统计学 意义,见表2 A:I常纠i{;J{:?癌圳 图1TUNH眦州I, JournalofMedicalForumVo1.26No.24December20o5 A:正常胃组织:B:贲门癌组织 图2FasL表达 表l不同胃黏膜病变中的凋亡细胞指数 注:bp<O.OI,vs正常胃黏膜;P<O05,v8异型增生;P<0O1,vs萎 缩性胃炎,I型,?型,?型肠化生;Jp<005,vs萎缩性胃炎;fP<0.Ol+Vg I型?型肠化生;hp<0.01,vsI型肠化生;Jp<O.05,vs?型肠化生 表2不同胃黏膜病变中FasL免疫组织化学结果 比较不同胃黏膜病变中FasL表达阳性组和阴? 发现肠化生,异型增生和 性组中的凋亡细胞指数, 贲门癌组织中FasL表达阳性组显着高于其阴性组 (见表3).经连续切片观察,FasL表达与凋亡细胞 分布在多数病例具有同域性. 表3不同胃黏膜病变中Fas[表达与细胞凋亡的关系 注:aP<005."P<O.OI,VSFasI阴性组 3讨论 细胞凋亡异常在肿瘤发生发展过程中具有重 要的病理生理意义?'m.既往认为贲门癌形成是 细胞无限增殖所致的细胞积聚,近年发现贲门胃 癌中不仅存在细胞过度增殖,同时存在细胞凋亡 异常?.但对细胞凋亡的意义,尤其是细胞凋亡 在胃癌前阶段的特点尚了解很少.由慢性炎症 ? 2l? 萎缩一肠化生异型增生一贲门癌的发展过程已 得到大多数学者的认同,研究细胞凋亡及其调控 基因在贲门胃黏膜癌变过程中的变化规律将有助 于揭示贲门癌发生的机制.本结果显示,在责门 癌发生的早期阶段存在活跃的细胞凋亡,而随着 贲门胃黏膜细胞恶性转化程度的升高,细胞凋亡 逐渐减少,表明在胃黏膜癌变过程中可能存在细 胞凋亡的被抑制.细胞凋亡受抑,细胞存活期延 长,死亡率下降,细胞数目增加,从而表现出明显 的生长优势,可能是贲门癌发生的一个重要基础. 此外,应该凋亡的异常细胞得以长期生存,这些细 胞对致突,致癌剂的易感性升高,基因更易发生突 变,增加了胃黏膜细胞恶性变的机会.贲门胃黏膜 癌变过程中细胞凋亡异常的机制尚不清楚,可能 与细胞凋亡的调控失常有关J. 新近研究发现,FasL不仅在激活T淋巴细胞 表达,在肝癌,肺癌和结肠癌细胞中亦有表达J. 因此,了解FasL在贲门癌前病变及贲门癌中的表 达状态及其与细胞凋亡异常之间的关系具有重要 意义.本研究发现,正常胃黏膜无FasL表达,贲门 癌前病变及贲门癌中均有不同程度的FasL表达, FasL表达阳性肠化生,异型增生及贲门癌细胞凋 亡指数显着高于其阴性组,表明FasL可能不同程 度地参与了贲门癌前病变及贲门癌组织细胞凋亡 的调控,对贲门癌前病变及贲门癌细胞凋亡具有 促进性调控作用,细胞凋亡调控异常可能在贲门 癌发病中起重要作用.贲门癌前病变及贲门癌组 织表达FasL,不仅可以介导表达Fas的贲门癌前病 变及贲门癌细胞凋亡,而且可能介导贲门癌前病 变及贲门癌组织中表达Fas的浸润淋巴细胞凋亡, 从而使胃黏膜恶性转化细胞逃逸机体通过Fas系 统途径的免疫清除机制,成为贲门癌发生,存活及 发展的重要潜在生物学基础,具体机制有待进一 步研究. 参考文献 】ThompsonCB.Apoptosisin JournalofMedicalForumVo1.26No.24December20o5 +l1.0)txmol/L. 2.3不良反应有4例出现轻度皮疹,2例出现 上腹部烧灼感,经对症处理后好转. 3讨论 肝脏是酒精代谢,降解的主要场所,长期大量 饮用高度白酒常引起肝脏受损,以至于引起酒精 性脂肪肝,酒精性肝炎和酒精性肝硬化.其发病 机制尚不完全清楚,目前主要认为与多种因素有 关:?酒精对肝脏的不良反应,酒精在肝脏代谢过 程中产生大量的还原型辅酶I(NADH),抑制线粒 体三羧酸循环,使肝脂肪酸代谢障碍,脂肪酸合成 增加,在肝内堆积,发生脂肪变性,形成脂肪肝. 脂肪肝的存在,引起肝细胞代谢障碍,损伤肝细 胞,发生坏死及炎症,引起AH,最终致酒精性肝硬 化….?乙醇的代谢产物乙醛损害了肝细胞功 能,使肝脏输出能力下降.?酒精性肝病患者血 清免疫球蛋白明显升高,自身抗体常有增加,并有 免疫复合物形成.?自由基损伤. 我国近年来酒精性肝病的发病率有增高的趋 势,这与人们生活水平提高,生活方式改变及市 场经济的发达,公共关系来往密切有关,人们接触 洒精的机会增加.长期大量饮酒是引起酒精性肝 痫的主要原因,每天饮烈酒80,120g持续5年以 上,9O%有脂肪肝,10%一35%有酒精性肝炎, 1.5%,8%有酒精性肝硬化.而营养不良不是造 成酒精性肝病的主要因素,在大量长期饮酒的同 时补充蛋白质,胆碱,维生素都不能预防或延缓酒 精性肝病的发生.相反高热量,高脂肪的饮食能 ? 23? 促进酒精性肝炎的形成.饮酒量大,每饮必醉,要 比小量多次饮酒危害性大.酒精性肝炎的发生 饮酒的方式和酒类饮料品种无关,最重要的是每 日酒精摄人量的多少.我们观察每天酒精摄人量 超过150g者最短7年,最长20年可发生肝硬化. 曾有报道,男性适度饮酒的限度为每周210g,女 性为每周140g. 酒精性肝炎的治疗关键是严格戒酒,辅以适 当支持疗法,本组7l例患者在开始1个月以后症 状明显改善,坚持严格戒酒6个月后肝功能基本可 以恢复正常.但戒酒并非对所有AH患者都有效, 至少25%的患者在5年后并发肝硬化】.AH患 者往往同时伴有酒精依赖,酒精依赖的戒酒措施 包括精神治疗和药物治疗.健康教育为简便易行 的精神治疗方法,包括:教育患者了解所患疾病的 自然发展史,危害及其演变,介绍一些改变饮酒习 惯及减少戒断症状的方法等. 参考文献 1叶维法.临床肝胆病学.天津:科学技术出版社,1992: 734 2江绍基.临床肝胆病学.1二海:卜海科技…版礼,1992: 456 3张尤历,编译.酒精性肝病.国外医学消化疾病分册. 1995,4(15):209 4DiehlAM.Alcoholicandnonalcoholicsteatohepatitis. 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