复方桔梗氯化铵口服液微生物限度检查方法验证方案

复方桔梗氯化铵口服液微生物限度检查方法验证 文件名称 复方桔梗氯化铵口服液微生物限度检查方法验证方案 MMVP-QC-030 02 文件编号 版本号 页码:1/16 复方桔梗氯化铵口服液 微生物限度检查方法验证方案 修订历史: 版本号 修订日期 修订原因 01 N/A 新订 02 2016.08.08 使所加菌液体积不超过供试液体积的1% 文件名称 复方桔梗氯化铵口服液微生物限度检查方法验证方案 MMVP-QC-030 02 文件编号 版本号 页码:2/16 目 录 1. 批准 ................................................................................................................................................. 3 2. 目的 ................................................................................................................................................. 4 3. 范围 ................................................................................................................................................. 4 .......................................................................................................... 4 4. 合格 ................................5. ................................................................................................................................................. 4 6. 培养基、缓冲液................................................................................................................................ 4 7. 仪器 ................................................................................................................................................. 4 8. 试验菌株 .......................................................................................................................................... 4 ................................................................................................................. 5 9. 步骤 ................................ 10. 方案修改 .......................................................................................................................................... 9 11. 偏差处理 .......................................................................................................................................... 9 12. 验证结论及评价.............................................................................................................................. 10 12.1. 验证总结 ........................................................................................................................................ 10 12.2. 验证评价及总结.............................................................................................................................. 10 13. 附件 ............................................................................................................................................... 11 以下附件应在验证中体现。 表1 人员确认列表 表2 仪器及设备校验列表 表3 试剂、培养基及样品确认 表4 方案修改列表 表5 偏差列表 文件名称 复方桔梗氯化铵口服液微生物限度检查方法验证方案 MMVP-QC-030 02 文件编号 版本号 页码:3/16 1. 批准 此页签名表示方案已经过审核和批准。 起草人 姓名/部门 签名 日期 刘南/QC 审核人 姓名/部门 签名 日期 潘慧良/QC 赵丽敏/QC 陆晓丽/QA 批准人 姓名/质量负责人 签名 日期 徐佳/质量负责人 文件名称 复方桔梗氯化铵口服液微生物限度检查方法验证方案 MMVP-QC-030 02 文件编号 版本号 页码:4/16 2. 目的 本方案依据《中国药典》2015年版四部通则1105非无菌产品微生物限度检查:微生物计数法，1107 非无菌药品微生物限度标准，建立一个复方桔梗氯化铵口服液的微生物限度检查方法。通过对供 试品需氧菌总数、霉菌和酵母菌总数计数方法适用性试验，以确认所采用的方法适合于复方桔梗 氯化铵口服液的微生物计数。 3. 范围 这份方案规定了复方桔梗氯化铵口服液的微生物限度检查法验证，供试品需氧菌总数、霉菌和酵 母菌总数计数方法适用性试验。 4. 合格标准 项 目 指 标 需氧菌总数、霉菌和试验组菌落数减去供试品对照组菌落数 酵母菌总数计数方试验组微生物的回收率 的值与菌液对照组菌落数的比值应在 法适用性 0.5~2范围内。 5. 职责 5.1质量控制部 5.1.1 制定微生物限度检查法的方案和报告。 5.1.2 执行微生物限度检查法的方案，提供验证数据。 5.1.3 将验证数据收集到报告中。 5.1.4 核对测试结果的合格，并准备适当的文件。 5.1.5 核实所有测试已进行。 5.1.6 审查验证方案和报告。 5.2质量保证部 5.2.1 审查并批准验证中出现的偏差。 5.2.2 审查并批准验证方案和报告。 6. 培养基、缓冲液 胰酪大豆胨琼脂培养基、沙氏葡萄糖琼脂培养基、pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液。 7. 仪器 培养箱 P/G2007、101-3A型、SPX-250B-Z、MJX-250B-Z 脉动蒸汽灭菌器 SCN-B/JB 净化工作台 SW-CF-2F 生物安全柜 BSC-1300IIA2 8. 试验菌株 试验用菌株及其编号: 需氧菌总数、霉菌和酵母菌总数计数方法: 菌种名称 菌株编号 对应培养基 文件名称 复方桔梗氯化铵口服液微生物限度检查方法验证方案 MMVP-QC-030 02 文件编号 版本号 页码:5/16 胰酪大豆胨琼脂培养基金黄色葡萄球菌(StapHylococcus aureus) CMCC(B)26 003 铜绿假单胞菌 (Pseudomonas aeruginosa) CMCC ( B ) 10 104 胰酪大豆胨琼脂培养基 胰酪大豆胨琼脂培养基 枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis) CMCC(B)63 501 胰酪大豆胨琼脂培养基 白色念珠菌(Candida albicans) CMCC(F)98 001 沙氏葡萄糖琼脂培养基 胰酪大豆胨琼脂培养基 黑曲霉(Aspergillus niger) CMCC(F)98 003 沙氏葡萄糖琼脂培养基 9. 步骤 9.1培养基、菌种检查 9.1.1 干粉培养基适用性检查 培养基名称 批号 培养基适用性检查 胰酪大豆胨琼脂培养基 ?符合 ?不符合 沙氏葡萄糖琼脂培养基 ?符合 ?不符合 9.1.2 验证用菌种检查 菌种名称 批号 有效期至 金黄色葡萄球菌 (StapHylococcus aureus) 铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa) 枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis) 白色念珠菌(Candida albicans) 黑曲霉(Aspergillus niger) 9.2计数方法适用性检查 9.2.1 目的 为了确定复方桔梗氯化铵口服液需氧菌总数、霉菌和酵母菌总数的计数方法，进行验证。 9.2.2 供试品溶液的制备 取样品10ml，加pH7.0无菌氯化钠蛋白胨缓冲液90ml，混匀，得1:10的供试液。 9.2.3 试验组 (1)需氧菌:取1:10供试液100ml，加入1ml菌液，制成含菌量不大于100cfu/ml的试液，混匀。取 1ml上述试液，注入无菌平皿中，立即倾注胰酪大豆胨琼脂培养基，30~35?培养，金黄色葡萄球 文件名称 复方桔梗氯化铵口服液微生物限度检查方法验证方案 MMVP-QC-030 02 文件编号 版本号 页码:6/16 菌、铜绿假单胞菌、枯草芽孢杆菌培养不超过3天;30~35?培养，白色念珠菌、黑曲霉培养不超过5天。计数。 (2)霉菌及酵母菌:取1:10供试液100ml，加入1ml菌液，制成含菌量不大于100cfu/ml的试液，混匀。取1ml上述试液，注入无菌平皿中，立即倾注沙氏葡萄糖琼脂培养基，20~25?培养，白色念珠菌、黑曲霉培养不超过5天。计数。 9.2.4供试品对照组 (1)需氧菌:取1:10供试液100ml，加入pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液1ml，混匀。取1ml上述试液，注入无菌平皿中，立即倾注胰酪大豆胨琼脂培养基，30~35?培养，不超过3天;30~35?培养，不超过5天。计数。 (2)霉菌及酵母菌:取1:10的供试液100ml，加入pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液1ml，混匀。取1ml上述试液，注入无菌平皿中，立即倾注沙氏葡萄糖琼脂培养基，20~25?培养，不超过5天。计数。 9.2.5菌液对照组 (1)需氧菌:取pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液100ml，加入1ml菌液，制成含菌量不大于100cfu/ml的试液，混匀。取1ml上述试液，注入无菌平皿中，立即倾注胰酪大豆胨琼脂培养基，30~35?培养，金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、枯草芽孢杆菌培养不超过3天;30~35?培养，白色念珠菌、黑曲霉培养不超过5天。计数。 (2)霉菌及酵母菌:取pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液100ml，加入1ml菌液，制成含菌量不大于100cfu/ml的试液，混匀。取1ml上述试液，注入无菌平皿中，立即倾注沙氏葡萄糖琼脂培养基，20~25?培养，白色念珠菌、黑曲霉培养不超过5天。计数。 9.2.6 供试品中微生物的回收 照上述步骤做3次独立的平行试验，计算试验组的回收率。 回收率计算: 试验组的回收率= (试验组菌落数-供试品对照组菌落数)/菌液对照组菌落数 9.2.7 结论 在3次平行试验中，试验组的回收率应在0.5~2范围内，否则，应采用适宜的方法消除供试品的抑菌活性，并重新进行方法验证。 培养基、试剂批号: 胰酪大豆胨琼脂培养基: pH7.0的无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液: 沙氏葡萄糖琼脂培养基: 试验菌株: 1) 金黄色葡萄球菌 来源: 批号: 传代次数: 2) 铜绿假单胞菌 来源: 批号: 传代次数: 3) 枯草芽孢杆菌 来源: 批号: 传代次数: 4) 白色念珠菌 来源: 批号: 传代次数: 5) 黑曲霉 来源: 批号: 传代次数: 文件名称 复方桔梗氯化铵口服液微生物限度检查方法验证方案 MMVP-QC-030 02 文件编号 版本号 页码:7/16 将检验结果填入下列表格，并进行判断。 9.2.7.1 试验1 项目 试验菌 培养时间试验组菌落供试品对照菌液对照组试验组的回 (天) 数(cfu) 菌落数(cfu) 菌落数(cfu) 收率 需氧菌总数 金黄色葡萄 球菌 平均 铜绿假单胞 菌 平均 枯草芽孢杆 菌 平均 白色念珠菌 平均 黑曲霉 平均 霉菌和酵母 菌总数 白色念珠菌 平均 黑曲霉 平均 9.2.7.2试验2 项目 试验菌 培养时间试验组菌落供试品对照菌液对照组试验组的回 (天) 数(cfu) 菌落数(cfu) 菌落数(cfu) 收率 需氧菌总数 金黄色葡萄 文件名称 复方桔梗氯化铵口服液微生物限度检查方法验证方案 MMVP-QC-030 02 文件编号 版本号 页码:8/16 球菌 平均 铜绿假单胞 菌 平均 枯草芽孢杆 菌 平均 白色念珠菌 平均 黑曲霉 平均 霉菌和酵母 菌总数 白色念珠菌 平均 黑曲霉 平均 9.2.7.3试验3 项目 试验菌 培养时间试验组菌落供试品对照菌液对照组试验组的回 (天) 数(cfu) 菌落数(cfu) 菌落数(cfu) 收率 需氧菌总数 金黄色葡萄 球菌 平均 铜绿假单胞 菌 平均 文件名称 复方桔梗氯化铵口服液微生物限度检查方法验证方案 MMVP-QC-030 02 文件编号 版本号 页码:9/16 枯草芽孢杆 菌 平均 白色念珠菌 平均 黑曲霉 平均 霉菌和酵母 菌总数 白色念珠菌 平均 黑曲霉 平均 10. 方案修改 在方案执行过程中的任何修改都应该进行评估和批准，并填写附件表4。 11. 偏差处理 在方案执行过程中的任何偏差都应按照《偏差管理程序》(SOP-MQA-003)执行，并填写附件表 5。将其附在报告中。 12. 验证结论及评价 以下应在验证报告中给予体现。 12.1. 验证总结 验证项目 是否满足可接受标准 确认人 日期 人员培训 ? 是 ? 否 仪器和设备校验 ? 是 ? 否 文件名称 复方桔梗氯化铵口服液微生物限度检查方法验证方案 MMVP-QC-030 02 文件编号 版本号 页码:10/16 试剂、培养基及样品有效期 ? 是 ? 否 检查方法 ? 是 ? 否 验证报告 ? 是 ? 否 列表中的所有项目均已经完成验证，均符合GMP要求 ? 是 ? 否 注释: 执行人 日期 审核人 日期 12.2. 验证评价及总结 数据统计与分析 分析人: 年 月 日 验证评价和总结: 评价人: 年 月 日 验证结论: 对验证结果和原始数据进行了审核，并得出本验证的最终结论，为以下: 通过 ? 不通过 ? 文件名称 复方桔梗氯化铵口服液微生物限度检查方法验证方案 MMVP-QC-030 02 文件编号 版本号 页码:11/16 13. 附件 培训记录空白表格格式见附页。 文件名称 复方桔梗氯化铵口服液微生物限度检查方法验证方案 MMVP-QC-030 02 文件编号 版本号 页码:12/16 表1 人员确认列表 培训内容 复方桔梗氯化铵口服液微生物限度检查方法验证方案 培训人/部门 /QC 培训日期 人员确认名单 部门 姓名 签名 日期 培训是否合格 QC 刘南 ? 是 ? 否 QC 顾长娟 ? 是 ? 否 QC 王佳丽 ? 是 ? 否 可接受标准:所有执行本方案的人员均已经过培训，并标识有姓名和部门，并经 ? 是 ? 否 由本人签字确认。 注释 执行人 日期 审核人 日期 表2 仪器及设备校验列表 文件名称 复方桔梗氯化铵口服液微生物限度检查方法验证方案 MMVP-QC-030 02 文件编号 版本号 页码:13/16 名称 编号 校验有效期 是否满足需要 ? 是 ? 否 ? 是 ? 否 ? 是 ? 否 ? 是 ? 否 ? 是 ? 否 ? 是 ? 否 ? 是 ? 否 ? 是 ? 否 ? 是 ? 否 ? 是 ? 否 ? 是 ? 否 ? 是 ? 否 ? 是 ? 否 ? 是 ? 否 ? 是 ? 否 ? 是 ? 否 ? 是 ? 否 ? 是 ? 否 执行人 日期 审核人 日期 表3 试剂、培养基及样品确认 名称 批号 有效期 是否满足需要 文件名称 复方桔梗氯化铵口服液微生物限度检查方法验证方案 MMVP-QC-030 02 文件编号 版本号 页码:14/16 ? 是 ? 否 ? 是 ? 否 ? 是 ? 否 ? 是 ? 否 ? 是 ? 否 ? 是 ? 否 ? 是 ? 否 ? 是 ? 否 ? 是 ? 否 ? 是 ? 否 ? 是 ? 否 ? 是 ? 否 ? 是 ? 否 ? 是 ? 否 ? 是 ? 否 ? 是 ? 否 执行人 日期 审核人 日期 表4 方案修改列表 序号 情况描述 批准/日期 文件名称 复方桔梗氯化铵口服液微生物限度检查方法验证方案 MMVP-QC-030 02 文件编号 版本号 页码:15/16 执行人 日期 审核人 日期 表5偏差列表 偏差号 描述 关闭日期 检查人/日期 文件名称 复方桔梗氯化铵口服液微生物限度检查方法验证方案 MMVP-QC-030 02 文件编号 版本号 页码:16/16 执行人 日期 审核人 日期