鼠李糖乳杆菌对感染人轮状病毒乳鼠空肠黏膜上皮细胞的保护作用

鼠李糖乳杆菌对感染人轮状病毒乳鼠空肠黏膜上皮细胞的保护作用 鼠李糖乳杆菌对感染人轮状病毒乳鼠空肠 黏膜上皮细胞的保护作用 ,,,,,,?， ， ， ， ， 义张 振王 晓 梅汤 建 桥高 源王 宝 香郑 , , ， ，华中科技大学同济医学院附属武汉市妇女儿童医疗保健中心 检 验 科 消 化 内 科 武 汉 ,,::,, , ，武汉大学生命科学院病毒研究所 武 汉 ,,:::, ,,,，,，,摘 要 目 的 观察鼠李糖乳杆菌 乳 对 感 染 人 轮 状 病 毒 ,,,,,,,,,:,,,,,,,,,,,,,:,,, ,,,,,,:,,,,,,,,,, 。 ,,鼠 空肠黏膜上皮细胞的保护作用 方 法 将 只昆明种乳鼠均分为 组 灌 服 作 为 感 染 组 灌 服 前 和 后 灌 ,: , ,,, ,,, ,。 ，，服 作为预处理组和治疗组 正常对照组灌服细胞培养液 从 第 观察各组乳鼠的临床症状 每 天 天 开 始 连 续 ,,, , ,, 。 ，，次检测乳鼠大便 抗 原 在 实 验 的 第 伊 红 染 色 利 用 天随机处死每组中的 只 乳 鼠 取 出 空 肠 段 苏 木 精 ,,,, , , ),,,,, 、绒毛高度和隐窝深度 。 利用光学显微镜和透射电子显微镜观察乳图像软件各组乳鼠空肠黏膜厚度 ,,:,,,,,,, ) 。 ，、。、、空肠黏膜上皮细胞的病理变化 结 果 至 第 天 对 照 组 乳 鼠 无 腹 泻 无 死 亡 感 染 组 预 处 理 组 治 疗 组 乳 鼠 鼠 , ,,, 腹 、，、。 、、、，、泻率和死亡率分别为 对 照 组 感 染 组 预 处 理 组 治 疗 组 乳 鼠 ,::,::, ,,,,:, ,,,,,, ,,,,,, ,,,:, ,,, :, 空肠黏膜隐窝深度分别为 ,,、,,、,,和 ,,，感染组明显高于其它 组?,,,,,,,?,,,,,,,?,,,?,,,,,,, , ,,,,,,,,μ ,,。 ，均 病 理 检 测 发 现 而预处理组和治疗组乳鼠空 感染组乳鼠空肠黏膜上皮细胞出现广泛的空泡样变性 ,:,:,,,, , 。 ，。 肠 黏膜上皮细胞空泡样变性的情况均有减少 预处理组与治疗组相比 前者对乳鼠空肠黏膜上皮细胞 的保护效果更好 ，。结 论 对 感 染 的乳鼠空肠黏膜上皮细胞有一定的保护作用 感 染 前 灌 服 的保护效果好于感染后灌服 ,,, ,,, ,,, ,, , , 关 键 词 人 轮 状 病 毒 鼠 李 糖 乳 杆 菌 乳 鼠 空肠黏膜上皮细胞 ,,,中 图 分 类 号 ,:,,:,,,::,,,,,,,,:,::,,,,:,,,:,,:,,,,:,,,), ,,:,,,,,,,,,,,,,:,,,,,:,,,,,,,,,,,,,:,,, ,,:,:,,,,, ,,,:,,,,,,,,,,,, ,, ,,,,,:,,,,,,,:,,,,,,,,,,,,,,,:,:,,,,,,,,,) ,,,，， :,,,:,,,,,,,,,:,,,,,,:,,,,,:,,,,,,,,,,，，’,,,,,,,,,:,,,,,,,,,,:,,,:,,,,,,,,,,:,,,,,:,,,,,:,:,:,,,,,,,,,,,,,,,,:,,,,,:,, ,,,,,, ,，，， ,:,,,,,,,,,,:,,,,,,,,,:,,,,,,,,,,:,,,,,,,,,,,,,,,:,:,,,,,,,::,,,,,,,,,,,,,,, ,, ,,,,,,,,:,,,,,,, ,:,,,,,,,,,,,,,:,,,,,,,:,,,,,,,,,,,,,:,,,,,:,,,,,,,,,,,,,:,,, ,,,,,:,,,,,, ,,,:,,,,,,),,,,,,,,,,,,,,,,,,,:,,,,,,,:,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,:,,,,,,,,,,,,,,:,, ,,,,,,,:,, ,,,,,,,,,,,,,,,,,,:,,,,))), ,,,, ，，,, ,,,,,,,,:,:,,,:,,:,,,,,,,,,,,,,:,,,,,,,,,,,,,,:,,,,,,,,,,,:,, ,,,,,,,,,,:,,,,,,,,,,,,,,,:,,,,,,,,,,,,，，,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,:,,,,:,,,,,:,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,:,:,,,:,,,,,,,,,,,,:,,,,,,,,,,,,::,,,,,,) ,,，，,,,,:) ,,,,,,,,,,,,,,:,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,:,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,, ,,,,,,,,:,,,,:,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,，，,,,,,, ,,,:,,,,,,,:,,,,,,,,,,,,,:,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,:,,,,,,,,:,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,, ,,,,,,,,),,,,,,,, ,,,,:,,:,:,:,,,,,,,,,,:,,,,,, ,,,:,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,:,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,:,,:,,,,,,,,,,,,,:,,,,,,,:, ,,,,,,,,’,,,,,,,, ,,,,,,,,,,:,,,,,:,,,:,,:,,,,,,,,,,,,,,:,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,:,,,,,:,,,,,,,,,,,,,,,,, ,，， ,,,,,,,,,,,,:,,,,,,,,,,:, ,,,,,,,,,,,,:,,,, ,,,,,,,,,,:,,,, ,,,,,,,,,,,:,,,,,::,::, ,,,,:, ,,,,,,, ,，，，， ,,,,,, :, ,,,,,,,,, ,,,:, ,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,:,,:,,,:,,:,,,,,,,,,,,,,:,,,,,,,,,,,,,,:,,,,,,,,,,,,,,,，,,，,,,,,,,,,,,,,,,,,,:,,,, ?,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,?,,,,,,,?,,,,,,,?,,,,,, ,,,,,,,,,,, μ,,，,,,,,,,,,,,,:,,,,:,,,:,,,,,,,,,,,,,:,,,,,:,,,:,:,,,,,,:,:,,,,,,,,,, ,,,:,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,, ,,,,,,,,,, ，,,,,,,,,,,,,:,,,:,,,,,,,,,,,,,,,,:,,,,,,,,,,,,,:,,,,,,,,,,,:,,,,,,,,,,,,,:,:,,,, ,,,,,,,,,,,,,,,,,,, ,,,,,,,:,,,,,,,,:,,,:,,,,,,,,,,,,, ,,,,,,,,,,,,:,,,,,,:,,,,,,,,,,,,,:,,,,:,,,,,, ,,,:,,,,,,,,,,,,,,,,,,, ,,,,,,,,,,,,,,,) ,,,,,,,,,,,,:,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,:,,,:,,,,,,:, ,,,,,,:,,,,,,,,:,,,,,,,,,,,,,:,,,,,, ,,,:,,,,,,,,,，,,,,,,,,,,:,,,,,,,,,,,,,,,,:,,,,,,,,,,,,,:,,,,,,,,,,,,,,:,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,:,)) ,,,,,,,,,,,,,,,,,:,,,, ,,, , , ,,,:,,, ,,,,,,:,,,,,,,,,,,:,,,,,,,,,,,,,:,,, ,,,,:,,,,,,,,,,,,,, ,,,:,,,,,,,,,,,,,,,,, ,,,, ,，,人 轮 状 病 毒 是 引 起 婴 ,,,,,,:,,,,,,,,,,,，振 ，男 ，年 生 ，副 主 任 技 师 张 ,,:: ,,,,,,,,,,,,,::,,:,:,),,，幼 儿 秋 冬 季 腹 泻 的 主 要 病 原 之 一 感 染 可 ,,, ,,::,,, ,? ,通 讯 作 者 ，， ,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,，,:,,,,:,,,,,,,,:,,),,,,造 成 严重脱水甚至危及生命 目 前 治 疗 感 染 ,,,,, 的 ,:，，,,，，主 要 方 法 是 补 液 和 调 节 酸 碱 平 衡 尚 未 发 现 特 效 治 起 每 天 灌 服 连 续 第 , ,,,,:,,,,,,::μ,,,),,。 ,疗 感 染 的 化 学 药 物鼠 李 糖 乳 杆 菌 ,,,, ,,, ) 天 灌 服 ,,,治 疗 液 ,::, ,,, ,×,:,,,,, ,μ组，,可 维 持 人 体 肠 道 微 ,:,,,,,,,,,,,,,:,,, ,,,,, ,,:第 天 灌 服液,,，后 ，，生 态 平 衡 对 引 起 腹 泻的多种致病菌和病 毒 有抑制 ,,::, ,,, ,×,:,,,,,,,，服 次 日 起 每 天 灌 服 μ,::, ,,,,:,,,,::μ灌，作 用 对 婴 幼 儿 感 染 性 腹 泻 有 较 好 的 疗, ,,, ，。连 续 正 常 对 照 组 出 生 后 第 天 灌 服 μ,,,,,,,::,,,),。 ， 效虽 然 目 前 已 证 实 多 方 面 的 作 用 机 制 ,,, 。细 胞 培 养 液 , μ 但 未 见 能 否 保 护 感 染 动 物 肠 黏 膜 的 研 ,,, ,,, 临床观察及乳鼠大便 抗 原 检 测,,, ,,, ，,,，从 第 天 开 始 每 天 次早 晚 各 次观 察 乳 。，究 报 道 本 实 验 以 感 染 乳 鼠 为 研 究 模 型 观 ,,,,,, ，。 鼠 的 腹 泻 情 况 计数乳鼠死亡数量 按 试 剂 说 明 书 察 乳 鼠 在 感 染 前 和 后 灌 服 导 致 肠 黏 膜 ,,, ,,, 。 ，用 方 法检测乳鼠大便 抗 原 腹 泻 的 的 变 化 试 图 阐 明 对 感 染 乳 鼠 肠 黏 膜 的 ,,,,, ,,, ,,, ,,, ,,,,判 断 参 照 文 献 分 为 级 级 为 无 大 便 级 为 黄 。保 护 作 用 及 机 制 :,,, ,,色 成 型 便 级 为 黄 色 糊 状 便 级 为黄色水样黏液 ,, 材 料 和 方 法 ,,,。便 级为黄色蛋汤样便 级 为 完 全 黄 色 水 样 便 ,,, 毒 株 ,,，、、,,, ,,, ,,级黄 色 糊 状 便 及 以 上 的 才 判 断 为 腹 泻 ,,, 级 ，由 中 国 预 防 医 学 科 学 院 病 毒 研 究 所 提 供 用 ，。腹 泻 为 轻 型 级 为 重 型 ,,病 毒 增 殖 和 测 定 的 细 胞 为 细 胞 非 洲 绿 于 ,,,:, 乳 鼠 小 肠 原 位 检 测 的 结 构 蛋 白 基 因,,: ,,, ,,, ,,: 猴 ,。 胎 肾 细 胞 传 代 细 胞 系 细 胞 在 ,,,:, ,,, ,，实验第天用颈椎脱臼法随机处死 每 组 只 乳 ,,，培 养 液 中 生 长 和 传 代 采用空斑形成法滴定 ,,,), ，,,，，,鼠参照文献 制 备 小 肠 标 本脱 蜡经 过 ,,: ,,,: ，的 感 染 滴 度 待 病 毒 滴 度 达 到 空 斑 形 成 病 毒 ,:,、、，氧 化 氢甲 醇 灭 活 蛋 白 酶 消 化 预 杂 交 后 于 原 , 单 位 。,位 仪 上 行 循 环 人 工 合 成 引 物 为 ,,, ,,, ,,,，,。 时 行 动 物 实 验 ,,,,,:,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,′) 菌 种,,, ,,, ,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,′′) )),，在的 反 应 体 系 中 ,，,,:, ,菌 种 ,,,,,,,,,,′),,, ,,,, ,,,:,,,,:,,,,,: ,::, ,μ,,,,,,,) :,, ，引 物 各 ,，模 板 ，,，购 自 广 州 拜 晴 ,,:,,:,:,,,:,:,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,:,,,,,,,,,,,,μμ ,, ,,，，酶 ，生 物 科 技 有 限 公 司 实 验 时 用 液 配 成 相 应 剂 量 :,,,,,, ,,:,,,,,,,,:,,,,×,,,, , μμ ,,:实 验 动 物 ，。, ，。以 补 足 扩 增 条 件 的,,, 菌 液 经 口 灌 服 ,,,,: ,:,,,, ,,μμ预，购 自 武 汉 大 学 实 验 动 物 中 心 级 昆 明 种 小 ,? ,,, ,，， ，，，，变 性变 性复 性延 伸鼠 只 孕 晚 期 购 回 乳 鼠 自 然 娩 出 雌 雄 各 半 ,,,,,,?,:,,,?,:,:,?,: ，,。 个 循 环 延 伸 取 出 扩体 , ,,,,: :,? ,: ,,,,,, ，，重 平 均 小 鼠 饲 养 于 有 空 气 ，,，,,,,,,,,,增 后 的 标 本 室 温 洗 次 :,,:,, ,:,, ,,, , ,,, , 。,,,过 滤 膜 的 小 鼠 笼 内 动 物 使 用 许 可 证 鄂 ，,多聚甲醛室温固定室 温 ,,,,,, ,:,,,:,,,:,,,,, ,::,)，,再 洗 次 蛋 白 酶 消 化 , ,,, , ,: ,, , ,:? ,, 。。 实 验 前 母 鼠 大 便 抗 原 均 为 阴 性 ::,,,,, 主要仪器和试剂 ，,， 再 用 室 温 洗 次 后 与 探 针 ,,,,,,:,, ,:,, ,,, , ,抗 原 试 剂 盒 由 卫 生 部 兰 州 生 物 ,,, ,,,,, ，，杂 交 显 色 显 微 镜 下见浅黄或棕黄 ,:?,,,,,, ,,、、、 制 品 研 究 所 提 供 酶 限 制 性 内 切 酶 溶 菌 酶 ,,。, 色 颗 粒 状 为 弱 阳 性 或 阳 性 结 果 、、连 接 酶 基 ,:, ,:, ,,,,,,,,,:::,,,,,: 、) 乳鼠空肠黏膜厚度 绒毛高度和隐窝深度测量 ,,, ,,,,，因 引 物 购 自 公 司 细 胞 培 养 板 洁 从 处死的 乳鼠腹腔内取 出 小肠段 分 离 出 从 幽 ,,, ,,,,,, ,,,，净 工 作 台 光 学 显 微 镜 门 下 至 回 盲 部 前 的 空 肠 段 用 甲 醛 固 定 制 透 射 电 :,,,,,, ,:,:: ,,,:, ) 。，，，子 显 微 镜 等 成 石 蜡 切 片 每 只 乳 鼠 张 每 组 张 苏 木 精 伊 , ,, ) ,,，实 验 分 组 及 干 预 方 法,,红染 色 用图 像 ,,, ,,, ,,,,,,,,:,,,,,,,,,,,,,,) ，、实 验 选 用 只 乳 鼠 随 母 鼠 按 窝 均 分 为 软 件 测 量 乳 鼠 空 肠 的 黏 膜 厚 度 绒 毛高度和隐窝深 ,: , , 、、、。组 正 常 对 照 组 感 染 组 预 处 理 组 度 ,,, ,,, ,, 治 ，。,,, 疗 组 每 组 只 感 染 组 参 照 文 献 乳鼠空肠黏膜病理学检查 ,,,,, ,, ),,, ，染 色 方 法 同 上 在光学显微镜 下 观察空肠 ，乳 鼠 感 染 模 型 即 乳 鼠 出 生 的 第 天 用 ,, 建 立 ,,, , 、、、，黏 膜 上 皮 细 胞 是 否 肿 胀 变 性 坏 死 脱 落 肠 腔 内 是 ,,改 良 的 注 射 器 经 口 灌 服 自 然 吸 吮 法 , ,, ,: ,: , ，。 否 有 渗 出 物 并 照 相 用 透 射 电 镜 观 察 乳 鼠 空 肠 黏 ,,,μ液预 处 理 组 出 生 后 第 天 ,,, ,×,:,,,,, , , 乳 鼠 小 肠 原 位 检 测 结 果 。膜 上 皮 细 胞 超 微 结 构 变 化 ,,, ,,, 每 组 只 乳 鼠 小 肠 原 位 检 测 基 因 的 统 计 学 处 理 ,,,:,,,, ,,: ，各 组 计 量 数 据 以表 示 采 用 软 ,,,?,,,,,,,,:结 果 正 常 对 照 组 只 全 为 阴 性 感 染 组 只 均 可 珚,, ，，,件 进 行 统 计 学 处 理 组 间 均 数 比 较 采 用检 验 和 见 棕 黄 色 颗 粒 即 检 测 到 的 基 因 , ,,, ,,: ,,, 、预方 处 理 组 只 为 阴 性 只 均 可 见 浅 或 棕 黄 色 颗 ，。 差 分 析 以 为 差 异 有 统 计 学 意 义 , , ,:,:,,,粒 。治 疗 组 只 均 可 见 浅 或 棕 黄 色 颗 粒 ,,, , 结 果 ,、乳鼠空肠黏膜厚度 绒毛高度和隐窝深度 ,,, ,,,组乳 鼠 空 肠黏膜厚度基本无差异 ,,:,:,, 乳鼠的一般表现 ,,, ,,,绒 毛 高 度 差 别 也 不 大 但 隐 窝 深 度 有 ，，正 常 对 照 组 乳 鼠 全 过 程 未 见 腹 泻 精 神 良 好 活 ,:,:,, 差 ，，。动 正 常 皮 肤 无 皱 褶 死 亡 率 为 感 染 组 :,,,, ，,,，别 感染组明显高于其它 组 其,,, , ,:,:, ,，，乳 鼠 在 第 天 至 第 天 出 现 明 显 腹 胀 精 神 倦 怠 活 ,,，它 组 差 异 无 统 计 学 意 义 表 明 能 够 使 感 , ,,, ，，动 减 少 排 出 淡 黄 色 稀 水 样 便 腹 泻 率 达 ,::,:染 乳 鼠 空 肠 黏 膜 隐 窝 深 度 恢 复 到 正 常 水 ,,, ， ，，其 中 轻 型 腹 泻 只 重 型 腹 泻 只 至 第 :,,,, , 。 。平 见 表 , 天 死 亡 、绒毛高度和隐窝深度 乳鼠空肠黏膜厚度 表 ,，。只 死 亡 率 为预 处 理 组 全 过 程 有:,,,,:,,,, , ，,,测 量 结 果 ?,,,,,珚，，，只 腹 泻 都 为 轻 型 腹 泻 其它乳鼠精神良好 活 动 正 ， ,,,,,, ,,,,,,,,,,,,,,,,,:,,,,:,,,,,,,:,,,,,,,,,,，,,,,,,,,:,,,,,,,,:,,,,,,,,,,?,,,,，，，,,,珚 常 皮 肤 无 皱 褶 至 第 天 无 死 亡 死 亡 率 为 , 。:, ,,,,,,,,,:,,,,,,:, ,,,,:, ,,,,:,, ,,,,,,,,,,:,,,,,,,，,,治疗组全过程有 只 腹 泻 其 中 只 为 重 型 腹 μμ,,, ,, μ ,,,, , , ，，，泻 另 只 为 轻 型 腹 泻 其它乳鼠精神良好 活 动 正 ,,, ::,,,,,:,,,:, ,,,,,,,,,,:,,,,,,,??,,,,?,,, ,,,,,,,,,,, ,,,,,?,,,,,,,,,?,,,, ) ,,,,,,, ?，，。常 至 第 天 死 亡 只 死 亡 率 为 ,,,,,:, ,,,,,,,,,,,,,, ,,,,:?,,,,, ,:,,,?,,,: ,,,,?,,, 乳 鼠 腹 泻 率 、死 亡 率 及 大 便 抗 原 阳 性 天 ,,, ,,, ,, 数 ,,,,,,,,,, ,,,,,?,,,, ,:,,,?,:,, ,,,,?,,, ，与 感 染 组 相 比 较 预 处 理 组 腹 泻 持 ,,,,, ,,, ,:,:,,,,,,,,,,,,,,,,:,,) ,, ,,， 续 天 数 及 阳性天数明显 缩 短 ,,, , :,:,, 乳鼠空肠黏膜上皮细胞病理检测结果 治疗组 腹泻持续天数及 阳 性 天 数 也 缩 ,,,,,, ,,, 光 学 显 微 镜 观 察 正 常 对 照 组 只 乳 鼠 小 肠 绒 毛 ,,，,。短 了预 处 理 组 与 ,:,:,,:,:,,,, ,,, ,, ，、，，规 则 无 肿 胀 变 性 和 坏 死 未 见 炎 性 细 胞 浸 润 肠 腔 治 疗 组 比 较 腹 泻 持 续 天 数 及 阳 性 天 数 差 异 均 ,,, ，。无 渗 出 物 见 图 感 染 组 只 乳 鼠 小 肠 绒 ,,,,, , ,，,。具 有 统 计 学 意 义 从 实 验 的 第 ,:,:,,:,:,,, ，，毛 固 有 层 充 血 明 显 可 见 淋 巴 细 胞 浸 润 绒 毛 上 皮 细 ，、天 至 第 天 每 组 乳 鼠 腹 泻 率 死 亡 率 及 大 ,, ，，胞 出 现 空 泡 样 变 性 细 胞 核 位 置 改 变 肠 绒 毛 部 分 变 便,,乳 鼠 腹 泻 率 、死 亡 率 及 大 便 抗 原 阳 性 天 数 表 ,,, 珚?, ,,、、，，。平 萎 缩 脱 落 肠 腔 有 渗 出 物 见 图 预 处 ,,,,, ,, 抗 原 阳 性 天 数 数 据 剔 除 死 亡 乳 鼠 结 果 见 ,,,,,, ,,,,,,,:,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,::,,,,,,, ,,，，理 组 只 乳 鼠 小 肠 绒 毛 基 本 完 整 未 见 明 显 变 性 未 ,,,,,,:,,,,,,,,,,,,,:,,,,,,,,,,?,珚 ,,,, 表 ，，。见 淋 巴 细 胞 浸 润 肠 腔 未 见 渗 出 物 见 图 。 ,,,,,,, ,,,,,,:,,,,, :,,,,,:, 治 疗 组 只乳 鼠小肠绒毛固 有 层 淋 巴 细 胞 浸 润 , , :,,,,,:,,,,,,,,, ,,:,, , ,:,,,,,,,,,,,,,, 较 ，，，少 小 肠 绒 毛 基 本 完 整 未 见 脱 落 肠腔有少量,, , ,,,,,,,,,,,,,,,,,, ，。物 见 图 渗出 ,, ,, ,, ::,,,,,:,,,:,: :,::, ::电 子 显 微 镜 观 察 正 常 对 照 组 只 乳 鼠 小 肠 绒 , 毛 ，、，， 规 则 无 肿 胀 变 性 和 坏 死 未 见 炎 性 细 胞 浸 润 ,,,, ,,,,?:,,,,,,,,,,,,,,,,,::,:,,,,:,,,,:?:,,:) 肠 腔 ,, ,, ?? ,,,, ,,,,,,,,,,,, ,,,,,,,::,,,:,?:,,,,,,,?:,,,,? ，。无 渗 出 物 见 图 感 染 组 只 乳 鼠 小 肠 上 ,,,,, , ,,,,,,, ,,,,,,,,,, ,,,,,,,,,,,:,,,,,?:,,,,,,:?:,,, ，，、皮 细 胞 不 规 则 出现空泡样变性 微 绒 毛 稀 疏 部 分 ,,,?，,，,,:,:,,,:,:,,,,,,,),,,,,,,,,,:,,,,:,:, ，，脱 落 肠 黏 膜 固 有 层 有 嗜 酸 性 淋 巴 细 胞 浸 润 见 ? ?,:,:,,,,,,,,,,,,,,,:,,,, ，，。见 少 量 微 绒 毛 肿 胀 肠腔基本无渗出物 见 图 ,, 图 ，治 疗 组 只 乳 鼠 小 肠 绒 毛 基 本 规 则 可 见 少 ,,, ,。， 预 处 理 组 只 乳 鼠 小 肠 绒 毛 基 本 规 则 可,,,,, ,量 、，，，。微 绒 毛 肿 胀 脱 落 肠 黏 膜 固有层可见浆细胞 增 生 肠 腔 有 少 量 渗 出 物 见 图 ,, ,，，， ,),,,,:,,,:,,,,,,,,,:,,,,,,,,,:,,,:,,:,,,,,:,,,:,,:,,,,,,,,,,,,,:,,,,,,,,,,,,,,:,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,，,,,，,,,,,,,,:,,,×,::,),,,,:,,,:,,,,,,,,,,,,,,,,,,,:,,,,,,,:,,,,,:,,,:,,:,,,,,:,,,:,,:,,,,,,,,,) ,,,,,,,,,, ，，,,,,,,:,,,,,,,,,,,,,,:,,,,,,,,,,,,:,×,::::,,,,,,, 乳鼠空肠黏膜上皮细胞病理检测结果 图 , ,,,, ,,,,:,,,:,:,,,,,,,,,,,:,,,,,, ,,,:,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,:,,,,,,,,, ,,,,,,, 。度 用 同 剂 量 的 干 预 感染乳鼠的结果 ,,, ,,, 讨 论 ,,显 示 感 染 前 灌 服 对 乳 鼠 的 保 护 效 果 好 于 感 染 后 。新 生 小 鼠 是 世 界 公 认 的 感 染 最 佳 动 物 模 灌 服 ,,, ,,,),:，，之 一 病 毒 的 复 制 在 达 第 个 高 峰 型,,,, , :、用 光学显 微镜观察乳鼠 的 空肠黏膜 厚度 绒 毛 ，时 开 始 下 降 病 毒 的 复 制 达 第 个 高 ,,:,,,,, , :，高 度 和 隐 窝 深 度 可 直 接 从 结 构 上 反 映 肠 黏 膜 的 。峰 本 实 验 用 株 悬 液 感 染 乳 ,::, ,,, ,, 机 μ ， ，鼠 乳 鼠 在 感 染 后 均 出 现 明 显 的 感 染 症 ,,,,,。 ，械 屏 障 情 况 本 实 验 显 示 感 染 组 与 正 常 ,,, ，，状 后 动 物 大 便 病 毒 抗 原 检 测 全 为 阳 性 , ,,,, 对 ，，照 组 相 比 黏 膜 厚 度 和 绒 毛 高 度 变 化 不 大 但 隐 后 检 测 感 染 组 中 的 只 乳 鼠 小 肠 结 构 蛋 ,, ,,,, 窝 深 白 ，。 ,,: 基 因 全 为 阳 性 病 理 切片显示乳鼠小肠上 皮 度 显 著 增 加 从形态上可见感染 乳 鼠 空 肠 上 ,,, 细胞出 ，皮 细 胞 出 现 广 泛 的 空 泡 样 变 性 但 测量绒毛高度并 ，现 广 泛 的 空 泡 样 变 性 感 染 组 乳 鼠 全 都 出 现 ，,无 太 大 变 化 分 析 其 原 因 可 能 有 二 感 染 ,,, ,,, ? 。、，,了 肠 黏 膜 上 皮 细 胞 受 损 的 情 况 这证明我们建立的 乳 鼠 肠 绒 毛 有 水 肿 萎 缩 发 生 但脱落并不明显 。感 染 模 型 是 成 功 的 与 ,,, ? ,,,,。 ,测 量 时 间 有 关 陈 军 华 等研 究 认 为 乳 鼠 感 目 前 已 有 较 多 的 临 床 实 验 证 实 能 预 防 和 ,,, ,，,,),,, 染，。治 疗 儿 童 腹 泻 缩 短 腹 泻 的 时 间,,, ,,, 后 第 天 绒 毛 高度与正常对 照 组 比 较 差 ,,, ,, :,能 有 效 治 疗 腹 泻 有 以 下 原 因 可 稳 ,,, ,,, ? ，,异 有 统 计 学 意 义 第 天 后 差 异 就 不 明 显 了 乳 鼠 感 ,定 ,,、、,,染 后 第 天 正 常 对照组与感染组肠隐窝 深 度差 ,,,,和 维 护 肠 黏 膜 屏 障 功 能能 产 生 出 抗 致 病 微 ? ,,。 ,,异 有 显 著 性 我 们 在 乳 鼠 感 染 后 第 天 检 ,,, , ,生 物 的 物 质可 刺 激 机 体 特 异 性 和 非 特 异 性 ? ，，测 发 现 隐 窝 深 度 显 著 增 加 这与陈军华等的 研 究基 免 疫 ,，，,。，本 一 致 在 灌 服 后 感 染 乳 鼠 的 小 肠 隐 ,,,,,,, ,,, 。反 应目 前 已 有 的 关 于 可 稳 定 和 维 护 肠 ,,, ，窝 深 度 可 基本恢复到正常水平 提 示 对 感 染 ,,, 黏 膜 屏 障 功 能 的 研 究 主 要 是 针 对 保 护 肠 黏 ,,, 。乳 鼠 肠 黏 膜 机 械 屏 障 有 保 护 作 用 ,,, 膜 从乳鼠空 肠 黏 膜 上皮细胞病理检测照片 可 以更 ，免 疫 屏 障 功 能 但 很 少 见 关 于 如 何 保 护 感 ,,, ，清 楚 地 看 到 干 预 感 染 乳 鼠 后 的 空 肠 上 ,,, ,,, ，染 动 物 肠 黏 膜 机 械 屏 障 的 报 道 有 关 ,,, ,,, ，皮 细 胞 空 泡样变性明显减少 肉 眼 观 察 预 处 ,,, 少 感 染 乳 鼠 空 肠 上 皮 细 胞 空 泡 样 变 性 的 如 何 保 护 感 染 动 物 空 肠 黏 膜 上 皮 细 胞 的 详 ,,, ,,, 理组的空肠黏 膜 上 皮 细胞基本上与正常对照 组 乳鼠 ,,，，， ,,,,,,,,:,,,, ,,,,,,,,,,,,,,,,,,,:,,,,,,,,,, ,,,,,，综 上 所 述 对 感 染 乳 鼠 空 肠 黏 膜 上 ,,, ,,, ) ,:,,,,,,,,,,,,,,:,,:,,,,:,,,,:,,,,,,,,:,,,,,,:,,,,,，皮 细 胞 有 一 定 的 保 护 作 用 感 染 前 灌 服 的 保 ,,, ,,，，, ,,,:,,,,:,:,:,,,,:,,，，，,,,,,,,,,,:,,,,,,,,,,,,,,,,,:,,,,,,,,,,,,,,:,, ,,, ,::，护 效 果 好 于 感 染 后 灌 服 本 实 验 显 示 用 ,:,,, ,,,,,,,,, ,),,,,,,,,,,,,,,,,,:,,:,,,,,,,,,,,,,:,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,, ,:,,,,:,,,:,,,,,,,,,:, ,,,,,,,,,:,,,) ,的 在 乳 鼠 感 染 之 前 灌 服 可 有 效 保 护 ,,, ,,, ，，，，，,,,,,,, ,,,,,,:,,,:,,,:,,,:,,:),,,,::,,,,,,: ,,,,:,:,,,:,,,,, ,,:,,,,,,,,,，) ,,,,,,,:,,,,,,,,,,,,,,,乳 鼠 肠 黏 膜 上 皮 细 胞 但 对 感 染 乳 鼠 ,,, ,,, ,, ,,,,,,,,,,:,,,,,,, ,,,,,,,,,,,:,,,:, ,,,,,,,,,，，肠 黏 膜 ,,,,,,:::,,,, :,,,,,,,,,，，,,,, ,,,,),,,,,,,:,,,,,,,,,:,,,,,:,,,:,,,,,,,,,、 菌 群 调 节 的 机 制 免疫调节的通路等尚有 待 进一步 ,,,,,,,,,,,,,, ,,,。 研 究 ,:,,,,,,,, ,:,,,,,,,,:,,:,,,,,,,,,,,,,,:,:,: ,,,:,,参 考 文 ，，,,,, ,,,,:,,,:,:,,,,,,,,:,)献 ,, ，，， ,:,,,,,,,,, ,,,,,,,,,,,,,:,,,,,,,,,,:,,,,,,,,,,,,),, ，，， ,,,,,,,,,, ,,,,,,,,,,, ,,,,,,,:,,,,,,,,:,,,,,,),,:,,,,,,,,,,,::,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,:,,,, ),,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,:,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,，，,,,,,,,,,) ,:,,,,:,,:,:,,,:,,::,,:,,,,,::，’,,，，,,,,:,, :,,, ,),:, ,,,,,,,,,,,,,,::,,,,,,,，，，,,, ,,,,,,,,,, ,,,:,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,，’ ，,,, , ,,,,,,,,,,,,,:,,,,,,,,,,:,) ,,,,,,,,:,:,,,,:,,,,,,,,,,,:,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,, ,,,,,,,,,,,,,,,,,,,:,,,,,,:,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,，，,,,,,,,) :, ,,,,,,,,,,,,,,:,,,,,,:::,,,,:,,,，，,,,,,,, :,,,:,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,:,:,,,:,),,, ， ,,,,,,,,,,,,:,,,,,,,,,,,,,,,:,,,,,,,,,,,,,,,,:,,:,,,,,,,，，， ,,,,:,, ,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,:,,,,,,,,,,,,,,,,,), ,,，，,,, ,,,,,,,,,,,,,,,,:,,:,,,,:,,,,:,,,,::,,,,,,,,, :,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,:,,,,,,,:,:,,,,,:,,,,,,,,, ,,:,,,,),,，， ,,,,,:,,,,, ,,, ,,,,,:,,,,:,,,, ,,,,:,,:,,::::，，，,, ,,,,,,,,, ,,:,,,,,,,,,,,,:,,,,,,,,,,,,,,,,,,,:,:,,,),,, ,,,,,,),,,,,,,,,,,:,,,,,,,,,,:,,,,,,,,,,,,,,, ,,,,,,,,,,,,，，,, 张 振 王 宝 香 鲍 连 生 益生菌在儿科临床中的应用 武 ,,,,，，,,,,,,,,,,,,:, ,,,,:,,:,,:::,,,:,,,,,,,,,,,) :, ,，,汉 湖北科学技术出版社 ,,,,,:,,,,:),, ，，，陈 军 华 解 元 元 凌 华 等 轮状病毒感染乳鼠致病机制的实 ,,,,, ，，，,,,:,,,,,,,:,,,,,,,,,,: ,,:,,,,,,,,,, ,,,,, ,,, ,,，，,,,验 研 究 第三军医大学学报 ,,,,,:,,:::,,,,,,,:)，， ,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,:,,:,,,,,,,:,,:,:,,,,,,,,, 收 稿 ::,,,:,,)),, ,,,,,,,,,,:,,,,,,,:,,,,,,,,,,,,,,:,:,,,,,,,,,,,:,,,,，，,,, ,,,:,:,::,::,,,,::,,,:,,,) ,,上 接 第 页 ,, ,,,,),,,:,,,,,:,,,,,:,,:,,:,,,,,,,,:,,,,,,,,,,,,,,,,:, ),,,,,,。的 发 生本 研 究 结 果 提 示 应 该 重 点 关 注 农 村 ,,， ,,,,,,:,,,,,,,,,,,,,:,,,,,,,:,:,:,,,,,,,,,,,,,:,,,。非 独 生 子 女 女 生 的 心 理 和 行 为 的 发 展 ，,,,，，,::::,,,,,,,,, ),,,:,,,,,:,:,,,,,,,,,,, ,,,,,, ,,,,,:,,,,,,,,:,,:,,,,:,,,,,:,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,:,,,,,,,,,,,,:,,,,,,,,, 参 考 文 ,,，，,,,献 ) ,,,,,,:,,,,,,,,, ,,:,,,,,,,,,,,,,::,,:,,::,,, ,:,,,, “”,,,,,,, ,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,:,:,,,,,,,,,,,, ,, ，，，,, ,,,, ,,,,,,:, ,,:,,,,,,,,, ,,,,,,,,,,:,:,,,,,,,), ,, ，,,，,,,,:,,,,,,,,,,,:,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,:,,,,,,,,, ,,，,,,,, ,::,,:,,,,:, ,,,,,,,, ,,,,,,,,,,,,,,:,,,,,,,,,:)),,,，，,,,,:,,,,:,: ,,:,,,, ,,,,,,,::,,,,,,:)) ,,,,,,,,,,, ,,:,,,,,,,,,,,, ,,:,,,， ,,,,,,,,,,,,,,,,,,,:,,,,,,,,:,,,,,,,,,,:,,,,:,,,, ，,, ,:,,,,,,, ,,,,,,:,,,,,,,,,,,,,,,,,,,:,,,,,,,,,,,,,,,,,, ，,,,,, ,:::,,,,,,,:,),,,,:,,,,,,,,,,,,,,:,,,,,,,,,,,,,,,,,:,:,:,,,,,,,,, ,，,,廖 全 明 罗 瑞 丽 渝 东 南 民 族 地区独生子女心理与行为问题 ,,,,，，,,,) ,,，,,,,:,,,,,,,,,,的 研 究 重庆科技学院学报 ,,,,,::,,,,,,,:, ),,, ，,,,:,, ,,:,,,,,,,,,,,,,,,,,,:,,,,,,,:,,,,,,,,,,,, ,,,,，,,余 晓 敏 吴 汉 荣 小 学 生 行 为 问 题 及 影 响 因 素 研 究 武 ,,,,,,,,,,,,,,,,, ,),,,:,,,,,,:,,,:,,, ,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,汉 华 中 科 技 大 学 ,,:,:, ,,,,,:,,:,,,,:,,,,,,,,,,,,,,,,,:,,:,:,,,,,,,),,,,) :,,:,,,,，汪 向 东 心理卫生评定量 表 手 册 增 订 版 中 国 心 理 卫 ,,，，,,, ,,:,,::,,:,,,,:,)，，,,生 杂 志 社 ,,,,,,,,,, ，，、尚 晓 援 伍 晓 明 李 海 燕 社 会 政 策 社会性别与中国的儿童遗 ,,,,,,,,, ,,, ,,,,,,,,,,,,,,:,,,,,,,,,,,,,,:,,,,,,,,,,,) ,,,,，，, ,:,,:,:,:,,,,,,,, ,,弃 问 题 青 年 研 究 :,,,,,,,::,,,,:,,,,,,,,,::,,,,,,,,,,,) ,,,，，,,,:,:,) ,,,,::,,:,::,,收 稿 :,,,,:,,)),, :，，， ,,,,:,,,,,,,,,,,,, , ,,,,,:,, , ,,,,,,,,,,,,:),