胃粘膜肠上皮化生SC3A的免疫组织化学研究

胃粘膜肠上皮化生SC3A的免疫组织化学研究 中 国 组 织 化 学 与 细 胞 化 学 杂 志 第 8 卷第 3 期 V o l181 N o 13 CH INESE JO URNAL O F H ISTOCHEM ISTRY A ND CY TOCHEM ISTRY 1999 年 9 月Sep 1 1999 胃粘膜肠上皮化生 3的 SC A 3 免疫组织化学研究 ? 刘民培吴继锋 杨光霖 董聿明 王道斌 (安徽医科大学病理解剖学教研室, 合肥 230032 ? )沈阳军区总医院医学实验科, 沈阳 110015 摘要 应用免疫组织化学方法等检测 62 例胃良、恶性病变伴肠化组织中单克隆抗体 的表达 3A BC SC A 及意义。结果: 癌旁肠化硫酸粘液阳性率明显较良性病变伴肠化高; 硫酸粘液阳性组肠化 SC 3A 阳性率明显 高于硫酸粘液阴性组; 而且 SC 3A 阳性率在酸性粘液阳性组胃癌明显高于酸性粘液阴性组; 硫酸粘液阳性组 胃癌明显高于硫酸粘液阴性组。 提示结肠型肠化可能与肠型胃癌的发生有一定关系。 关键词 肠化 免疫组织化学 单克隆抗体 人 IMM UNO H ISTOCHEM ICAL STUDY O F M O NOCLO NAL A NT IBODY 3SCA IN INTEST INAL M ETA PL A S IA O F GA STR IC M UCO SA , , , W u J ifen gY an g Gu an g lin D o n g Y um in ge t a l (), . 230032 D ep a r tm en t of P a th ology A n h u i M ed ica l U n iv e rs ityH ef e i C h in a 3T o stu dy th e sign if ican ce o f m o no c lo n a l an t ibo dy SC A exp re ssio n in in te st in a l m e tap la2 () , 3sia o f ga st r ic m u co saimm u no h isto ch em ica l sta in in g A BC m e tho d fo r SC A an d m u c in 62 h isto ch em ica l sta in in g w e re p e rfo rm ed in ca se s o f in te st in a l m e tap la sia f rom ga st r ic b en ign . an d m a lign an t le sio n sT h e re su lt s show ed th a t th e po sit ive ra te o f su lp hom u c in w a s sign if i2 can t ly h igh e r in in te st in a l m e tap la sia w ith can ce r th an th a t o f in te st in a l m e tap la sia w ith b e2 . 3n ign le sio nT h e po sitve ra te o f SC A in in te st in a l m e tap la sia w ith su lp hom u c in w a s sin g if i2 . 3can t ly h igh e r th an th a t w itho u t su lp hom u c inT h e po sit ive ra te o f SC A in can ce r s sec re t in g ac id m u c in o r su lp hom u c in w a s sign if ican t ly h igh e r th an th a t in can ce r s w itho u t ac id m u c in . o r su lp hom u c inIt su gge st s th a t th e co lo n ic typ e o f in te st in a l m e tap la sia m ay b e re la ted to .th e in te st in a l typ e o f ga st r ic ca rc inom a Key W ord s In te st in a l m e tap la sia; Imm u no h isto ch em ist ry; M o no c lo n a l an t ibo dy; H um an 胃癌是我国最常见的恶性肿瘤之一, 对胃癌癌前病变的研究, 以发现高危人群, 早期诊 () 断胃癌已日益受到有关学者的关注。 胃粘膜肠上皮化生 简称肠化是一种常见病变, 常与 胃的各种良、 恶性疾病伴存。 探讨其与胃癌的关系对研究胃癌的组织发生有一定意义。 本文 用单克隆抗体 免疫组织化学方法等对胃粘膜肠上皮化生进行了检查, 旨在探讨 33SC A SC A 材 料 和 方 法 : 本研究观察胃良、 恶性病变组织 101 例, 包括胃癌 71 例, 胃良性病变 30 例。 其 中 62 例伴有肠化, 胃癌癌旁肠化 45 例, 良性病变伴肠化 17 例。 方法: 全部材料均用 10% 中性缓冲福尔马林固定, 石蜡包埋, 作厚度为 5的连续切片,Λm 分别作 染色, 单克隆抗体 免疫组织化学反应及粘液组织化学反应。3H E SC A 由沈阳军区总医院制备及提供 11 免疫组织化学方法: 采用 A BC 法。 单克隆抗体 SC 3A () 为抗人大肠癌相关抗原的单克隆抗体, 试剂及生物素标记的马抗鼠 为 A BC IgG V ec to r 生产。其主要步骤是, 切片以常规梯度法脱蜡, 013% 甲醇室温 30 分钟, 去 L abo ra to r ie s H 2O 2 除内 源 性 过 氧 化 物 酶, 洗 2 次, 2% 马 血 清 ?封 闭 30 分 钟, 加 单 克 隆 抗 体37PB S PB S ?过夜, 每次 5 分钟, 依 4350,PB S 冲去切片上的上清液, 再用 PB S 搅拌洗涤 3 次, SC A Λl 次加生物素化马抗鼠 和 复合物各 50均置 37?, 2 小时, 同前洗涤后, 滴加底物, IgG A BC Λl () 液 0105% , 0103% 放室温 3, 10 分钟, 水洗终止反应, 酒精脱水, 二甲苯, DA B H 2O 2 PB S ()(和阳性对照 透明, 封片后镜检。 试验设阴性对照 即用 液代替一抗 用已知 阳 3PB S SC A )性的结肠癌标本作对照。结果判定: 不着染为阴性, 浅棕色者为弱阳性, 棕色者为阳性, 深 棕褐色者为强阳性。 21 粘液组织化学方法 ) 211 (215ƒ染色法: 石蜡切片经脱蜡入水; 放入 3% 醋酸中 2 分钟; 放 A B pH PA S A lc ian蓝染液中 30 分钟; 流水冲洗 2 分钟再用蒸馏水洗; 浸入 015, 1% 过碘酸中 10 分钟; 流水洗 () 5 分钟再用蒸馏水洗; 氏液处理 10 分钟; 015% 亚硫酸氢钠 处理 3 次, 每 Sch iff N aH SO 3 次 2 分钟; 蒸馏水浸洗; 脱水、 透明、 明胶封固。 结果: 酸性粘液蓝染, 中性粘液红染。 )212 流水冲 (染色法: 切片脱蜡入水; ƒ15 2放入 H ID 染液内 18 小时以上; H ID A B pH 洗; 30% 冰醋酸处理 3 分钟; 215 染液 30 分钟; 水洗反蓝, 再蒸馏水洗; 1% 过碘酸处 A B pH 理 20 分钟; 蒸馏水反复洗; 氏液处理 20 分钟; 015% 亚硫酸氢钠处理 3 次, 每次 2 分 Sch iff 钟; 蒸馏水洗 5 次; 脱水透明、 明胶封固。 结果: 硫酸粘液黑染, 唾液酸粘液蓝染, 中性粘 液红染。 结 果 11分布特点 3SC A 正常胃粘膜上皮细胞不含 阳性物质; 胃癌细胞 含量明显较多, 阳性率为33SC A SC A 8013% , 且大多为强阳性或阳性反应, 主要分布在癌细胞的膜表面, 部分在胞浆中, 呈棕褐 色细颗粒状分布。 不同类型及不同分化的胃癌其阳性物质分布状态不同, 分化型腺癌以膜型 () 分布为主, 往往腺腔面着色较深, 有的在管腔内的分泌物也呈凝块状着染 图 1; 低分化腺 () 癌以胞浆型分布为主 图 2; 粘液细胞癌胞浆和胞膜均着色, 大部分呈强阳性反应。肠化上皮 含量明显较胃癌细胞少, 均为弱阳性反应。部分肠化上皮不含 阳性物质, 部分 33SC A SC A 肠化上皮含少量 阳性物质, 主要分布于吸收细胞管腔表面和顶端胞浆, 杯状细胞大多数3SC A () 阴性。 在有明显纹状缘、 细胞排列整齐的小肠型肠化中 一般阴性或弱阳性 图 3; 而 3SC A ()图 4。 在纹状缘不明显、 细胞高低参差不齐的结肠型肠化中 SC 3A 阳性程度则较为明显 21 肠化上皮 阳性率3SC A 本研究观察胃粘膜肠化 62 例, 3阳性 33 例, 阳性率 5312% , 其中癌旁肠化 阳 3SC A SC A () () ƒ17, 两者差异无显著意义 7性率 5718% 2645, ƒ阳性率 4112% 良性病变伴肠化 3SC A () > 0105。P 31 肠化上皮硫酸粘液阳性率 () 应用 15粘液组织化学染色可显示肠化上皮中的硫酸粘液。本研究肠化上 2ƒH ID A B pH ()() 皮硫酸粘液阳性率 7412% 4662。其中癌旁肠化硫酸粘液阳性率 8819% 4045, 良性病 ƒƒ (() ) 变伴肠化硫酸粘液阳性率 3513% 6ƒ17, 两者差别有高度显著意义 < 0101。P 41 肠化上皮中硫酸粘液和 的关系3SC A 根据肠化上皮中是否含有硫酸粘液, 将肠化分为硫酸粘液阳性组和硫酸粘液阴性组, 比 () 28ƒ46, 较两组 阳性率, 硫酸粘液阳性组 阳性率 6019% 33硫酸粘液阴性组 SC 3A SC A SC A (() ) 阳性率 3113% 516, 两者差别有显著意义 < 0105ƒP 51 癌组织内 与分泌粘液的关系3SC A 根据癌细胞分泌 () 用 15ƒ粘液组织化学染色可区别中性粘液和酸性粘液, 2A B pH PA S () ()(粘液的性质将胃癌分为肠型 仅含酸性粘液, 胃型 仅含中性粘液、 混合型 含酸性及中 ) ()性粘液及干细胞型 无粘液分泌。根据癌组织是否含有酸性粘液, 将其分为两组, 比较两 () 组 阳性率, 含有酸性粘液组胃癌的 阳性率 9012% 55ƒ61, 而不含酸性粘液组33SC A SC A (() ))10, 差异有高度显著性 2ƒ(胃癌的 阳性率 2010% < 0101。 用 ƒ15 32SC A P H ID A B pH 染色可显示硫酸粘液, 依据癌组织内有无硫酸粘液将胃癌分为硫酸粘液阳性组和硫酸粘液阴 () 性组。 硫酸粘液阳性组胃癌 阳性率 9113% 42ƒ46明显高于硫酸粘液阴性组 6010%3SC A (() )1525, 差异有高度显著性 ƒ< 0101。 P 讨 论 1, 2 应用胃癌单克隆抗体在胃癌及癌前病变的免疫组织化学研究已有些报道。本文则以抗 3 人大肠癌相关抗原的单克隆抗体 对胃良、恶性病变进行免疫组织化学研究, 旨在为胃 3SC A 癌的进一步研究寻找新而有用的标志物。 结果表明, 此抗体的对应抗原在胃癌中的表达阳性 虽然在肠化上 率为 8013% , 而且均为较强的阳性反应, 而在正常胃粘膜上皮无 SC 3A 表达, 皮也有一部分病例出现阳性反应, 但其反应都很弱。由此可见, 单克隆抗体 SC 3A 所识别的抗 原在胃癌中有较高的表达及好的相关性, 也表明单克隆抗体 所识别的抗原是胃癌的一 3SC A 种有相对特异性的抗原物质, 对于胃癌与良性病变的鉴别诊断, 尤其对识别夹杂在正常细胞 中的孤立癌灶及少数癌细胞是一个有用的标志物。 关于肠化与胃癌的关系, 已有许多学者作了探讨, 有人认为肠化是癌前病变, 但也有人 持否定态度。 近年来, 有些作者研究认为含硫酸粘液的肠化或结肠型肠化与胃癌发生关系更 4 为密切。本研究癌旁肠化与良性病变伴肠化的 阳性率差异无显著性, 而癌旁肠化硫酸3SC A 粘液阳性率明显较良性病变伴肠化为高, 硫酸粘液阳性组肠化 SC 3A 阳性率明显高于硫酸粘 4 与含有硫酸粘液的结肠型肠化有密切关系。 本研究显示含有酸性粘液组胃癌的 阳性 3SC A 率明显较不含酸性粘液胃癌高, 硫酸粘液阳性组胃癌 阳性率又明显较硫酸粘液阴性组3SC A 高, 胃癌的粘液与胃粘液类似, 说明表达 SC 3A 胃癌的粘液与结肠粘液类似, 而不表达 SC 3A 提示前者发生与结肠型肠化有密切关系, 后者可能来自胃固有粘膜。 推测部分肠化上皮中表 达有与胃癌相同的抗原物质, 这种抗原存在可能为胃癌的发生提供了一定的物质基础, 由于 这种物质微量而尚未达到足以引起细胞明显的形态改变。 收稿 1998201 修回 1998211 参考文献 21, , , . . 1 T o ga sh i H T e ra sak i P ICH ia De t a lA m o no c lo na l an t ibo dy C STO aga in st a stom ach adeno ca rc i2 () . 1984; 44 9: 3952nom a a sso c ia ted an t igenC ance r R e s 2 张荫昌, 闫瑞方, 吕化仙, 等 1 胃癌单克隆抗体 83在胃癌的免疫细胞化学研究 1 中华肿瘤杂志 1986;YH () 8 3: 161 刘民培, 马世英, 邹燕玲, 等 1 一组识别人大肠癌相关抗原的特性及反应性 1 中华肿瘤杂志 1992;M cA b 3 () 14 2: 91 雷道年, 席与萍, 王燕农, 等 1 胃癌的组织发生及其类型—— 附 239 例病例分析 1 中华肿瘤杂志 1980; 2 4 () 1: 55 , , , . S ippo nen P Sepp a la K V a r is K e t a lIn te st ina l m e tap la sia w ith co lo n ic typ ee su lp hom uc in s in th e ga s2 5 () () 88 4: , . 1980; 217 t r ic m uco sait s a sso c ia t io in w ith ga st r ic ca rc inom aA c ta P a tho l M ic ro b io l Scand A 图 版 说 明 图 1 在管状腺癌表达 A BC 法 ×100 SC 3A 图 2 100 ×SC 3A 在低分化腺癌表达 A BC 法 图 3 ×100 在小肠型肠化表达法3SC A A BC 图 4 ×100 在结肠型肠化表达法3SC A A BC EXPL A NA T IO N O F F IGURES 1 3. F ig. T h e exp re ssio n o f SC A in tubu la r adeno ca rc inom a×100A BC m e tho d 3T h e exp re ssio n o f SC A in poo r ly d iffe ren t ia ted ade2 2 F ig. ×100, no ca rc inom aA BC m e tho d 3T h e exp re ssio n o f SC A in sm a ll in te st ine typ e in2 3 F ig. ×100. te st ina l m e tap la siaA BC m e tho d 3T h e exp re ssio n o f SC A in co lo n ic typ e in te st ina l F ig. 4 . ×100m e tap la siaA BC m e tho d