02细菌培养技术

02细菌培养技术 标题:细菌培养技术 版本号:A 修订号:0 文件编号:XXX-XJ-SOP-002 发布日期:2006年06月06日 生效日期:2006年07月01日 发布部门:管理层 编制人:XXX 审核人: XXX 批准人,签字,: XXX 页码:第 页 ～ 共 页 细菌培养技术 目的:无菌操作接种、培养是细菌学实验室中最基本、最重要的操作技术～它是鉴定细菌的首要前提。 器材:酒精灯、95%酒精、接种环,针,、培养皿,瓶,、烛缸、火柴等。 一、 无菌操作技术的基本要求 1、 临床细菌检验的所有操作～均必须在无菌条件下进行～即在酒 精灯火焰附近或在超净工作台内进行。 2、 由临床标本或培养物中取材作检查时～必须使用接种环,针,～ 使用前后均需火焰灭菌。 3、 从培养瓶或试管培养物中取标本时～在打开瓶口、试管口或关 闭前～均要在火焰上通过1—2次～瓶塞或试管塞用无名指及小 指夹住～操作完毕后塞回。 4、 不慎打破培养物瓶,管,时～应负责人后～用0.2%消毒 灵处理污染的台面或至少覆盖30分钟。打破的器皿集于容器内 高压灭菌～台面及地面再进一步消毒清洗。 5、 工作完毕后～实验台用0.2%消毒灵擦拭～双手用0.2%消毒灵 浸泡～再用肥皂和清水刷洗干净。. 二、 接种方法 ,一, 平板接种法:平板划线接种是细菌分离培养的常用技术～ 主要使标本或培养物中的混合细菌能在培养基表面分散生长形 成单个菌落。 1、 曲线划线分离法:接种环菌灭后挑取标本或菌液少许呈45 度角～在平板1/5处轻轻涂布～然后左右来回以曲线形成划线 接种～倒置37?温箱内培养24h后观察结果。 2、 分区划线分离法:接种环于平板内分划五区～每划完一个 区域烧灼环一次后倒置35—37?培养。 ,二, 穿刺接种法:多用于保存菌种观察动力及做厌氧培养～亦 可用于观察细菌对糖类的分解反应～培养基为半固体。 方法:1、左手持细菌培养物。 2、右手持接种针酒精灯上烧灼～冷却后挑取细菌。 3、左手持半固定培养基～右手小指夹住棉塞并取下～ 管口火焰灭菌～将接种针插入培养基中央～穿刺近 底部1/3处～再沿原穿刺线抽出在斜面上做连续曲 线接种。 4、试管口在火焰上充分灭菌～塞棉塞～灭菌接种针。 6、接种后的半固体培养基～置试管架上～35—37?孵育箱培养 三、 培养方法 ,一, 一般培养法,又称需氧培养法,:将已接种好的平板、斜面 和液体培养基等～置35—37?孵育箱中18—24h～难以生长者 培养2—7天甚至半个月。 ,二, 二氧化碳培养法:将某些细菌如脑膜炎球菌～嗜血杆菌等 置于CO环境中进行培养。 2 我室采用烛缸法:将已接种过的平板～置于有盖的干燥玻璃缸 中～缸盖及缸口涂凡士林～放入已点燃的蜡烛～用盖密闭～蜡 烛数分钟后自行熄灭～此时缸内均含5—10%CO。最后将缸移2 入35?孵育箱中培养。 ,三, 厌氧培养法 四、参考文献 诊断细菌学～李仲兴等主编～第一版～香港:黄河文化出版社～