【doc】HPLC测定香砂养胃丸中橙皮苷和柚皮苷含量

【doc】HPLC测定香砂养胃丸中橙皮苷和柚皮苷含量 HPLC测定香砂养胃丸中橙皮苷和柚皮苷 含量 第2O卷第9期 2008年9月 化学研究与应娟 ChemicalResearchandApplication Vo1.20No.9 Sep.,2008 文章编号:1004—1656(2008)09—1196-03 HPLC测定香砂养胃丸中橙皮苷和柚皮苷含量 刘思曼,边清泉,唐英,张进,李方 (1.绵阳师范学院天然产物研究所,四川绵阳621000; 2.重庆文理学院化学与环境科学系,重庆永川402168; 3.四川大学化学学院,四川成都610064) 关键词:HPLC;香砂养胃丸;橙皮苷;柚皮苷 中图分类号:0657.7文献标识码:A 香砂养胃丸是由木香,砂仁,陈皮,枳实等12 昧中药组成的复方制剂,有温中和胃之功效,主要 用于不思饮食,胃脘满闷或泛吐酸水等症J.陈 皮,枳实是其主要成分,具有理气健胃,燥湿化痰, 下气止呕等功效J.香砂养胃丸目前生产厂家较 多,因此必须对制剂的质量,检测的标准进行规 范,统一,严密地控制,这是保证制剂质量的关键. 2005年版中国药典采取厚朴酚与和厚朴酚为定量 控制指标,因此对其的测定报道较多,但是对陈 皮,枳实中的主要有效成分橙皮苷,柚皮苷没有定 量检测….而橙皮苷对El腔癌具有一定的预防作 用,还能治疗胸膜炎J.目前对橙皮苷,柚皮苷 的测定方法已有报道l6J.本实验采用HPLC同 时测定香砂养胃丸中橙皮苷,柚皮苷,旨在对该制 剂的质量控制提供一种简便,易行,结果准确的有 效补充方法,为生产企业和检验部门更加全面的 检测产品质量提供实验依据,对确保香砂养胃九 的质量控制起到参考作用. 1实验部分 1.1仪器与试药 LC一10AT型高效液相色谱仪(岛津公司), DAD检测器,CLASS—vp5.0色谱数据处理工作站, CTD-6A色谱柱温箱;101-2A型数显恒温干燥箱; AY120电子天平(SHIMADZU);SZ一93型自动双重 纯水蒸馏器. 橙皮苷(批号:110721—200512),柚皮苷(批 号:11O722-2003O9)对照品购于中国药品生物制品 检定所,为定量用对照品.香砂养胃丸由河南宛 西制药股份有限公司生产(批号:070904,070905, 070908,071006,071009),处方中原药材购于绵阳 天诚大药房,经鉴定均符合原药材质量标准,乙腈 为色谱纯,其他试剂为分析纯,实验用水为二次蒸 馏高纯水. 1.2色谱条件 色谱柱为Diamomil~C18(4.6mm×150Hlm,5 );流动相:乙腈一水(磷酸调pH:3.5)(22:78);流 速1.2mL?min,;UV检测:283nm;进样量为5; 柱温3O?;灵敏度为0.O50AUFs.以橙皮苷,柚皮苷 峰计理论塔板数均大于25O0. 1.3对照品溶液制备 分别精密称取经P:0干燥的橙皮苷,柚皮苷 对照品6.2mg,5.8mg,置10mL量瓶,甲醇定容 至刻度,分别精密吸取橙皮苷,柚皮苷对照品溶液 5.0mL和O.5mL置25mL容量瓶,甲醇定容得混 标对照品溶液.橙皮苷浓度为124.0g?mL,, 柚皮苷浓度为11.6g?mL一. 1.4供试品溶液的制备 取香砂养胃丸样品适量,干燥后磨碎,精密称 取1.0g,置100mL烧瓶中,加石油醚(6ooc一90?) 5OmL超声洗涤2次,每次25min,挥尽残留石油醚 后,加甲醇3OmL回馏提取2次,每次回流提取2h, 合并提取液并浓缩至50mL以下,冷却后定容至5O mL,0.45皿微孔滤膜过滤,取续滤液待测,即得供 试品溶液(含制剂药样20mg?mL). 收稿日期:20081—11;修回日期:2oo85.26 基金项目:绵阳市科技局自然科学研究重点项目(2006S016) 联系人简介:李方(1956一),女,教授,主要研究方向微量成分分 析.Email:beifl@yahoo,.eotn.cn 第9期刘思曼等:HPLC测定香砂养胃丸中橙皮苷和柚皮苷含量1197 同法制备不含陈皮,枳实的阴性样品溶液, 备用. 2结果与讨论 2.1色谱条件的选择 2.1.1检测波长的确定用二极管阵列检测器 在本实验溶剂体系条件下,分析了橙皮苷,柚皮苷 对照品色谱峰和5批号样品中目标组分相应色谱 峰的紫外光谱,结果二者相同保留值处紫外光谱 基本一致,橙皮苷在227nm和283nm,柚皮苷在 212nm,226nm和283nm有最大吸收.283nm处 待测组分与杂质峰能够基线分离,检测灵敏度高, 橙皮苷,柚皮苷均有强吸收,确定检测波长为 283nm. 2.1.2流动相的优化2005年版药典测定橙皮 苷流动相为甲醇一水一乙酸(55:61:4),该流动相 分析时间较长,样品前处理过于严格,而且橙皮 苷,柚皮苷分离困难.本实验在通过比较,优化的 基础上确定流动相为乙腈一水(磷酸调pH=3.5) (32:88),待测组分之间及与其它组分有效分离(R >1.5),且保留值适宜,柱后处理简便,省时. 2.1.3提取条件的确定通过对比实验,样 品甲醇提取液中脂类含量较高,待测组分特征峰 峰形有拖尾现象,且对柱后处理带来困难.石油 醚洗涤样品提取液可除去脂类物质,改善峰形,保 护反向柱的使用寿命. 2.1.4目标组分萃取程度的确定目标组分提 取是影响其含量测定的关键问题之一.经过对5 批号样品萃取目标组分后的药渣HPLC检测,无 待测组分特征峰出现,说明样品经甲醇回馏提取2 次后,橙皮苷,柚皮苷已提取完毕. 2.2线性关系考察 精密吸取对照品溶液2.0,4.0,6.0,8.0,10.0 和12.0分别进样,按1.2项色谱条件测定峰面 t一一一l———— …3_一…-『—丁———r『一—T min 积(n=3),以对照品进样量(g)对峰面积均值 y(v?s)进行处理,得到橙皮苷的线性回归方程 Y=8.97×10X一2.04×10,r=0.9989,线性范 围0.25g,1.49g;柚皮苷直线方程Y=7.48 ×10X一1.16×10(r=0.9995),线性范围: 0.023~g,0.14g. 2.3精密度试验 分别以橙皮苷,柚皮苷对照品溶液进样5, 连续重复5次,测定峰面积,橙皮苷,柚皮苷峰面 积积分值的RSD分别为1.22%为0.66%. 2.4重现性试验 称取同一批香砂养胃丸样品粉末5份,各1 g,按1.4项制备供试品溶液,分别重复测定5次, 计算含量.结果橙皮苷含量均值分别为1.21%, 1.24%,1.20%,1.19%和1.23%,RSD为1.7% (n=5),柚皮苷含量均值分别为0.096%, 0.095%,0.097%,0.094%和0.098%,RSD为 1.6%(n=5),明方法重现性良好. 2.5供试品溶液稳定性试验 取同批号香砂养胃丸供试品溶液分别在0, 6h,,12h和24h进样,结果表明,供试品溶液在24 h内基本稳定,橙皮苷,柚皮苷峰面积的RSD分别 为1.3%和1.9%. 2.6加样回收率试验 精密称取已知含量的香砂养胃丸原粉试样约 1.0g,共5份,加人含橙皮苷124.0Ixg?mL,,柚 皮苷11.6Ixg?mL对照品溶液,按1.4项制备样 品溶液,测定并计算回收率.橙皮苷,柚皮苷平均 回收率分别为99.3%和102.6%;RSD分别为 1.2%和2.5%. 2.7样品测定 精密吸取1.4项制备的香砂养胃丸供试品溶 液,空白溶液和橙皮苷,柚皮苷对照品溶液各5 进样,按2.1项色谱条件重复测定5次,外标法计 算含量,结果见表1,高效液相色谱图见图1. B C 1一,,1——————了————r—] 图1对照品和样品HPLC图 Fig.1HPLCchromatogramsofsamples A.混合对照品;B.供试品;C.阴性样;1.抽皮苷;2.橙皮苷 一 1198化学研究与应用第20卷 香砂养胃丸中橙皮苷和柚皮苷质量分数(n=5) Table1TheQualityseoi~0fHesperidinand naringosideinxiangshayangweipill 香砂养胃丸中橙皮苷,柚皮苷是其功效的主 参考文献: [1]国家药典委员会.中华人民共和国药典.一部[s]. 北京:化学工业出版社.2005:525. [2]季宇彬.天然药物有效成分药理与应用[M].北京:科 学出版社,2007,294,364. [3]TakujiTanaka,HirokiMakita,MasamiOhmshi,eta1. Chemopreventionof4..Nitroqulnoline1..Oxide..inducedOral CarcinogenesisbyDietaryCureuminandHesperidin: ComparisonwiththeProtectiveEffectofB.Carotene[J]. CarwerResearch,1994,54(1):46534659. [4]EmimJA,O~vdmAB,LapaAJ.Pharmacological evaluationoftheanti.inflammatoryactivityofacitrus bioflavonoid,hesperidin,andtheisotlavonoids,duartinand elaussequinone,inratsandmice[J].JPharm 要有效成分,对其含量的定量控制是确保制剂质 量的一个重要方面,2005年版中国药典(一部)未 对此项作出规定,目前文献报道也仅有香砂养胃 丸中橙皮苷的检测,而且含量在0.051%,2.1% 之间J.不同厂家或批号产品主要有效成分含 量相差甚远,必然对制剂药效产生影响.因此建 立针对制剂主要有效成分的质量控制补充方法, 对生产企业和检验部门更加全面的检测产品质量 提供实验依据. Pharmacol,1994,46(2):ll8-22. [5]唐志杰.高效液相色谱法测定陈皮中橙皮苷的含量 [J].中成药,1994,16(3):4345. [6]苏明三,李振国.现代实用中药质量控制技术[M].北 京:人民卫生出版社,20o3,704. [7]顾继红.高效液相色谱法测定香砂养胃丸中橙皮式甙 含量[J].中国血液流变学杂志,2003,13(2):199-200. [8]方加林,朱炳辉,方继辉.高效液相色谱法测定香砂养 胃丸中橙皮苷的含量[J].中药新药与临床药理,2003, 14(3):183-185. [9]王海英,赵建泽.HPLC测定香砂养胃丸中橙皮苷的含 量[J].中成药,2005,27(9):ll15-ll16. DeterminationofHesperidinandnaringosideinxiangshayangweipillbyHPLC LIUSi-man,BIANQing-quart,TANGYing,ZHANGJin,LIFang.' (1.Graduateschoolforstudyingnaturalproduct,MianyangNormalUniversity,Mianyang6 21000,China; 2.DepartmentofchemistryandEnvironmentScienceChongqingUniversity,Chongqing40 2168,China; 3.CollegeofChemistrySiehuanUniversity,Chengdu610064,China) Abstract:HesperidinandnaringosideinxiangshayangweipillhasbeendeterminedbytheHP LC,inwhichtheDiamonsilTMCls (4.6mill×150mill,5n)wasusedasthecolumnatUV283砌 andtheCH3CN-H2Osolution(22:78)w鹪madeuseofmobile phase,inwhichH3PO4WasusedasagenttoregulatepH(3.5),theflowroteis1.2mL?rain,,th ereWasafineseparateddeg~e betweenthepending.omponentandothercomponentandthelinealrangeofHesperidinandnaringosideis0.25ttg,1.49ttgand 0.023I~g, 0.14grespectively.TheaveragerecoveriesofHesperidinandNaringosidewere99.3%and102.6%respectively withRSDbeing1.2%and2.5%.TheresultCanSireasimple.effectivemethodforcontrollingthequalityofxiangshayangwei pill Keywords:HPLC;xiangshayangweipill;Hesperidin;naringoside (责任编辑李瑛)