重组人胰岛素

重组人胰岛素 Chongzu Ren Yidaosu Recombinant Human Insulin 书页号:2005年版二部,267 [修订] 删去“重组人胰岛素中残余宿主DNA和宿主细胞蛋白质为与生产过程相关的、潜在的特异性杂质，必须在生产过程中严格控制，每1mg重组人胰岛素中宿主细胞蛋白不得过10ng。每剂量重组人胰岛素中宿主DNA不得过10ng。” 【检查】 “相关蛋白质”检查修订为“有关物质”。 有关物质 取本品适量，用0.01mol/L盐酸溶液制成每1ml中含3.5mg的溶液，作为供试品溶液。照效价测定项下的方法，以0.2mol/L硫酸盐缓冲液(pH2.3)-乙腈(82:18)为流动相A，乙腈-水(50:50)为流动相B，进行梯度洗脱。 时间(分) 流动相A(%) 流动相B(%) 0 78 22 36 78 22 61 33 67 67 33 67 调节流动相比例使重组人胰岛素主峰的保留时间约为25分钟，系统适用性试验应符合效价测定项下的规定。取供试品溶液20,l注入液相色谱仪，色谱图，按面积归一化法计算，含A脱酰胺人胰岛素不得过1.5%，其他有关物质总量不得过2.0%。 21 高分子蛋白质 取本品适量，用0.01mol/L盐酸溶液制成每1ml中含4mg的溶液，作为供试品溶液。照分子排阻色谱法(附录V H)试验。以色谱用亲水改性硅胶为填充剂(5,10,m);冰醋酸-乙腈-0.1%精氨酸溶液(15:20:65)为流动相，流速为每分钟0.5ml，检测波长为276nm。取重组人胰岛素单体-二聚体对照品，用0.01mol/L盐酸溶液制成每1ml中含4mg的溶液;取100,l注入液相色谱仪，重组人胰岛素单体与二聚体的分离度应符合。取供试品溶液100,l，注入液相色谱仪，记录色谱图，除去保留时间大于人胰岛素主峰的其它峰面积，保留时间小于人胰岛素主峰的所有峰面积之和不得过1.0%。 锌 对照品溶液的制备 精密量取锌溶液(1000μg/ml)5ml，置100ml量瓶中，加0.01mol/L盐酸溶液至刻度，摇匀。 供试品溶液的制备 精密称取本品适量，用0.01mol/L盐酸溶液制成每1ml中含锌约0.4~0.8μg的溶液，摇匀。 测定法 精密量取对照品溶液，用0.01mol/L盐酸溶液分别稀释成每1ml锌含量为0.20μg、0.40μg、0.60μg、0.80μg、1.00μg的溶液。将上述各溶液与供试品溶液，照原子吸收分光光度法(附录?D含量测定第一法)，在213.9nm的波长处测定，按干燥品计，含锌量不得过1.0%。 炽灼残渣 取本品约0.2g，依法检查(附录? N)，遗留残渣不得过2.0%。 【效价测定】 照高效液相色谱法(附录V D)测定。 色谱条件与系统适应性试验 用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂(5,10,m)，0.2mol/L硫酸盐缓冲液(取无水硫酸钠28.4g，加水溶解后，加磷酸2.7ml、水800ml，用乙醇胺调节pH值至2.3，加水至1000ml)-乙腈(74:26，或适宜比例)为流动相;流速为1.0ml/min;柱温为40?;检测波长为214nm。取系统适用性试验用溶液(取重组人胰岛素对照品，用0.01mol/L盐酸溶液制成每1ml中含1mg的溶液，室温放置至少24小时)20,l注入液相色谱仪，人胰岛素峰与A21脱酰胺人胰岛素峰(与人胰岛素峰的相对保留时间约为1.3)的分离度不小于1.8，拖尾因子不大于1.8。 测定法 取本品适量，精密称定，用0.01mol/L盐酸溶液定量稀释至每1ml中约含10单位的溶液(临用新配)。精密量取20,l注入液相色谱仪，记录色谱图;另取重组人胰岛素对照品适量，同法测定。按外标法以人胰岛素峰面积(包括A21脱酰胺峰面积)计算，即得。 [增订] 【鉴别】 (3)取本品适量，照胰岛素生物测定法(附录XIIG)，实验时每组的实验动物数可减半，实验采用随机设计，照生物检定统计法(附录XIV)中量反应平行线测定随机设计法计算效价，每1mg的效价应不得少于15单位。 【检查】 菌体蛋白残留量 取本品适量，依法检查(三部附录IXC)，每1mg重组人胰岛素中菌体蛋白残留量不得过10ng。 外源性DNA残留量 取本品适量，依法检查(三部附录IXB)，每1剂量重组人胰岛素中宿主DNA不得过10ng。