血细胞计数

血细胞计数 【目的和要求】掌握计数方法,原理及临床意义. 一、红细胞计数 成熟的红细胞为一高度分化的无核细胞(骆驼和家禽除外)。动物体内每天有一定数量的红细胞因衰老而死亡，同时又有相应数量的红细胞生成进入血液循环，以维持动态平衡，当这种平衡被破坏后，即可引起红细胞数量的变化，所以临床上常把计数红细胞和测定血红蛋白结合起来诊断动物贫血并将其分型。 【原理】红细胞计数是将一定量的血液经过稀释后，充入特制的细胞计数板的计数池内，在 12显微镜下计数规定区域内的红细胞数，而后换算出每升血液中的红细胞数(*10个/L) 【器材与试剂】 器材:纽巴氏(Neubauor)计数板(结构见图1)，沙利氏三用吸管，试管，5ml吸管，血盖玻片，手揿计数器，显微镜。 试剂:红细胞稀释液:0.85%的氯化钠溶液或赫母(Hayem)氏液(取氯化钠1.0g、结晶硫酸钠5.0 g、氯化高汞 0.5 g，以200.0ml蒸馏水溶解，加数滴碳酸品红)两液任选一种。 【操作步骤】 1. 用5ml吸管吸取红细胞稀释液3.98ml，置于试管内。 2. 用三用吸管吸取全血至20ul处，擦去管外血液，将管内血液慢慢吹入上述试管底部，吸取上层稀释液反复清洗吸管内壁，轻轻混匀。 3. 用毛细吸管(三用管亦可)吸取混匀的血液稀释液，充入已盖有血盖片的计数板的计数池内，2,3分钟后即可计数。 4.将计数板装在显微镜上，在,,倍镜下找到计数的中央大方格，选择5个中方格(四角与中央的中方格或对角线的5个中方格,见图2和图3)，转至,,倍镜下计数。 5.计数规则为:计左不计右(压左线取，压右线舍)，计上不计下(压上线取，压下线舍)。 610【计算】红细胞数/升=X*5*10*200*10=X*10/升 2X?5个中方格中的红细胞数;*5?1个大方格内红细胞数(1mm);*10:将计数池高度(0.1mm) 6扩大10倍变为1mm;*200:血液稀释倍数;*10为每升血液含红细胞数。 【注意事项】 ,.采血及装血用具、尤其计数板要干净，且干燥; ,.吸血动作要快，尤其是未加抗凝剂的血样; ,.充计数池时，计数板要平稳，充池液体要适中，且注意不要形成气泡; ,.注意采血和稀释血液时切忌出现溶血; ,.各中方格的红细胞数相差10个以上，应重新取样计数。 ,,【各种家畜(禽)红细胞的正常参考值 单位: *10个/L】 奶牛5.0,8.0;水牛3.2,7.0;马属动物6.0,13.0;绵羊8.0,15.0;山羊8.0,17.0;猪5.0,8.0;猫5.0,10.0;狗5.96,7.86;鹿 8.5,10.5;兔 5.5,7.5;水貂 7.7,13.1;狐 4.9,13.6;貉 8.5,10.5;鸡(雄性3.8，雌性3.0);北京鸭(雄性2.71，雌性2.46);鹅2.71;鸽(雄性4.0，雌性3.07);火鸡(雄性2.24，雌性2.37)。 【临床意义】 红细胞数的变化主要受血液浓度及造血功能的影响，所以其数量的变化又可分为相对性和绝对性、生理性的和病理性的变化 (一)红细胞增多 1(相对增多 指因血浆容量减少，血液相对浓稠，造成红细胞数量相对增加。见于脱水(严重呕吐、腹泻、大量出汗、大面积烧伤)、渗出性胸膜或腹膜炎、休克以及饮水、吞咽困难、慢性肾上腺皮质功能减退、甲状腺功能亢进症危象、糖尿病等。 1 2(绝对增多 临床上称为红细胞增多症，是一种由多种原因引起红细胞增多的症候群。 (1)继发性红细胞增多症:是一种非造血系统疾病，发病的主要原因是因为血液中促红细胞生成素增多。 ?促红细胞生成素代偿性增加:因血氧饱和度减低，组织缺氧所引起。红细胞增多的程度与缺氧程度成正比。见于阻塞性肺气肿、肺源性心脏病，以及携氧能力低的异常血红蛋白病等。 ?促红细胞生成素非代偿性增加:这类患畜无血氧饱和度减低，组织无缺氧，促红细胞生成素增加与某些肿瘤或肾脏疾患有关，如肾癌、肝细胞癌、肾盂积水、多囊肾等。 (2)原发性红细胞增多症:即真性红细胞增多症，是一种原因未明的以红细胞增多为主的骨髓增殖性疾病，目前认为是多能造血干细胞受累所致。其特点是红细胞持续性显著增多，全身总血容量也增加，白细胞和血小板也有不同程度增多。本病属慢性病和良性增生，但具有潜在恶性趋向，部分病例可转变为白血病。 (二)红细胞减少 1(生理性减少 畜禽出生后因身体生长发育迅速，而红细胞生成相对不足;妊娠中、后期的患畜血浆容量增加，使血液稀释，红细胞相对减少，表现出不同程度的贫血;老年家畜因骨髓造血功能减低，导致红细胞减少。 2(病理性减少 能引起红细胞生成减少或导致红细胞破坏增加的病因，均可引起红细胞减少。见于各种原因引起的溶血性贫血、再生障碍性贫血、营养性贫血等 图1.血细胞计数板构造 图2.计数室的分区 2 二、白细胞的计数 正常血液中白细胞包括5种，其数量为一稳定值。白细胞计数就是指计算在一定积内这5种细胞的总数。 【原理】 用冰醋酸液将血液稀释(使红细胞溶解破坏而白细胞形态保持不变,但此法不适用于成熟红细胞核仍不退化的动物的白细胞的计数)，同时将稀释的血液混均，而后取稍许稀释的血液充入特制的血细胞计数板的计数池，在显微镜下计数一定容积中的白细胞数，经换算求 9得每升血液中的白细胞总数(*10/L)。 【器材与试剂】 所需器材与红细胞计数相同。白细胞稀释液可用2,的冰醋酸液，内加1,结晶紫液1滴，以便与红细胞稀释液区别。 【操作方法】 1. 用0.5 ml吸管吸取2,的冰醋酸液0.38ml置于小试管中。 2.用沙利氏吸管吸取被检血至20μl处。 3.擦去管外粘附的血液，吹入小试管中，反复吸吹数次，以洗净管内所粘附的血细胞，轻轻振荡混合，放置5,10min使红细胞充分破坏。 4.用毛细吸管吸取被稀释的血液，充入已盖好盖玻片的计数室内，静置2,3min后，待白细胞下沉。 5.用低倍镜计数四角的四个大格内的白细胞数。计数方法和规则与计数红细胞时相同。 【计算】 6白细胞数/L = 四个大格内的白细胞数?4*10*20*10 式中:?4 为每个大格内白细胞平均数;*10 将一个大格容积0.1μl换算为1.0μl; 6*20 血液稀释倍数;*10 将1μl换算为1L。 【注意事项】 1.加入白细胞稀释液后，一定要等红细胞充分破坏后再计数，防止其影响计数; 2.各大方格内白细胞数若相差10个以上，需重新计数。 3.其它注意事项基本与红细胞计数的同。 4.切忌把尘埃异物及红细胞碎片与白细胞混淆，可用高倍镜观察，白细胞有细胞核的结构，而尘挨异物及红细胞碎片的形状不规则，无细胞结构。 9【正常参考值*10/L】 马、骡、驴约为8.5,15.5/L;牛约为7.3,11.5/L;绵羊约为6.5,10.4/L;山羊、猪约为10.1,15.1/L;狗5.6,19.2/升;猫8.0,19.2/升。鸡为19.0/L;鸭为23.0/L;鹅30.0/L 【临床意义】通常白细胞数为红细胞的1/800,1/1000，其数量的变化较红细胞更为显著。 1.白细胞增加: (1)生理性增加:见于妊娠、分娩后及新生畜;健康家畜采食后稍多于采食前，下午比早晨稍多;免疫接种、生物制剂使用或无菌手术后一段时间内，白细胞会增多。 (2)病理性增加:见于各种感染(真菌、杆菌、某些球菌的感染)性、中毒性(代谢性酸中毒、毛地黄中毒)、急性出血性和溶血性疾病，白血病，尿毒症等。鸡白痢时白细胞总数 9*10/L. 高达245.0 2(白细胞减少:临床较少见。主见于某些病毒感染性疾病，如流感、猪瘟、马传贫等，某些慢性中毒性疾病如汞制剂中毒，辐射线的照射、再障性贫血、病畜极度衰竭及濒死期等。禽叶酸缺乏时粒细胞明显减少,白细胞总数也减少 . 3