高效液相色谱法测定水中二甲戊乐灵

高效液相色谱法测定水中二甲戊乐灵 高效液相色谱法测定水中二甲戊乐灵 786现代预防医学2006年第33卷第5期ModemPreventiveMedicine,2006,Vo1.33No,5 【实验技术及其应用】 高效液相色谱法测定水中二甲戊乐灵 李永新.一,李倩,潘红梅,赵剑虹,孙成均 [摘要]目的:建立水样中二甲戊乐灵的高效液相色谱测定法方法:样品经二氯甲烷液一液萃取.旋转真空蒸 后,用高效液相色谱法分离测定.分析条件为:色谱柱为cI8柱(ODS),250×发浓缩 4.6ruin,5tma;柱温;室温;流动 相:85%甲醇一水;流速:1ml/min:检测波长:238nln.结果:本法线性范围上限至少为100rig;平均回收率为95,6%; 15t内相对标准偏差为0.48%--3.65%,方法检出限为4.7×10q几.结论:本法具有前处理简单,灵敏度高,准确度好 等优点,适合于水样中二甲戊乐灵的分析测定. [关键词】高效液相色谱法;二甲戊乐灵;水样;液一液萃取 [中图分类号】R123,1[文献标识码】A[文章编号]1003—8507(2006)05—0786—03 DEIERMIN.~ON0FTRACEPENDIME1N.M.,ININ,a职BYItlGIt】陋F0R^^:ELIQUID xin,LI,PANtbrig-reel,eta1.WChinaSchoolofPublicH,Sichuan?.Chengdu,610041, Al~traet:Objective:Toestab~shflhighperformanceliquidchromatographicmethod(HPL C)forthedetermination0fIxace pendimethalininwater.Method:Afterflliquid—liquidextractionofthetargetcompoundwithdichlommethane,theextractwan concentratedtoflsmallvolumebyrotaryvacuumevaporation,andthenblowntOessbygentle Nzstream.Theresiduewasdis一 8D1vedin0.2Om1ofmethano1.andpendimethalininthesamples嘲 separatedandquantifiedbyHPLC—UV.Theoptimizedchm— matographicconditionsw~-e:analyticalcolumn,Cl8coluliIn(250×4.6mm,5t~n1);Cohmmtemperature.H3omtemperature; mobilephase,methanol—water(85:15);flowrate:1ml/min;uVdetectionwavelength:238nn1.Results:Calibrationgr aph wlinearuptoatleastlOOng.Theaveragerecoveryofthemethodwas95.6%,thewithin—dayrelativestandarddeviationwere 0.48%--3.65%,andthedetectionlimitWaS4.7×10,g/I.Conclusion:Themethodissensitive,accurateandsuitabletothe determinationoftracependimethalininwatersamples, Keywords:Pendimethalin,HighI)erfom1aJ1celiquidchromatography(HPL),Water,Liqu id—liquidextraction 二甲戊乐灵属低毒高效广谱除草剂,于1972年由美国 氰胺公司研制成功….其商品名称有除芽通,施田补,二 甲戊灵,胺硝草,除草通,杀草通,英文通用名称为 pendimethalin.化学名称为N一(1一乙基丙基)一2,6一 二硝基一3,4一二甲基苯胺,化学结构如图1.二甲戊乐灵 熔点为54—58?,对酸碱稳定,挥发性小,不易光解,易 溶于大多数有机溶剂,难溶于水. 图1二甲戊乐灵化学结构式 研究表明,二甲戊乐灵能加强肝细胞代谢和甲状腺素 排出引.雌性大鼠在48mg/kg剂量经口染毒时.可引起血 红蛋白和红血球总数减少,血浆胆固醇水平显着升高,肝 脏和肾上腺重量明显增加[引.美国环保署(EPA)将二甲 [作者单位]1.I~111大学华西公共卫生学院,成都,610041;2.广 东省职业病防治院 [作者简介]李永新(1977,),女,硕士研究生. [通讯作者]孙成均(1957~),男,教授,Ermil:s~.rr.hjqq@sire.?m 戊乐灵定为三级毒性类物质,人类可疑致癌物.据欧共体 EEC—Regulation(91/155/EEC)安全数据资料_4J,二甲戊 乐灵对水生生物毒性很大,而且会对水环境产生长期不利 影响.邵晨等J的研究结果表明.二甲戊乐灵能诱导鱼类 血细胞核发生异型;而且也能引起鱼类红细胞遗作损伤, 具有染色体断裂剂和纺锤丝毒剂的双重作用,所以有必要 对水中二甲戊乐灵进行监测.我国于lO多年前开始引进生 产二甲戊乐灵除草剂,德国巴斯夫股份有限公司于1991年 在我国正式登记施田补33%乳油.目前在国内主要用于蔬 菜,棉花,烟草,花生等除草及作为烟草抑芽剂作用.二 甲戊乐灵残留的检测方法主要是气相色谱法,l4;也有高 效液相色谱测定土壤中微量二甲戊乐灵的报道_1,但水样 中二甲戊乐灵检测方法尚未见的报道.本文研究了河水中 痕量二甲戊乐灵的高效液相色谱测定法,并用于实际样品 的测定.仅需一步提取即可得到满意的提取效果,具有前 处理简单,成本低廉等优点. 1实验部分 1.1主要仪器与试剂 1.1.1仪器高效液相色谱仪(LC200,PerkinElmer), 附有紫外可见检测器(LC295);N3000色谱工作站(杭州 普惠科学仪器有限公司);Cl8色谱柱:250×4.6rrtln,5肛 (Phenomenex,USA);保护柱:4mm×3mm(Phenomenex, 医学2006年第33卷第5期ModernPrtjvene.2?:: USA);KQ一250超声波清洗器(昆山市淀山湖检测仪器 厂);RE一52C旋转蒸发仪(河南巩义市英屿予华仪器厂). 1.1.1试剂二甲戊乐灵(Flu.ka)标准溶液100~/rnl,临用 前用甲醇稀释成10旭/的标准应用液;二氯甲烷(分析纯); 甲醇(色谱纯);无水硫酸钠(分析纯);钢瓶氮气. 1.2色谱条件流动相为甲醇一水(85:15,v/v),流速 1ml/min柱温;室温.检测波长238mn. 1.3实验方法 1.3.1标准曲线在选定的色谱条件下,分别进样不同绝 对量20,5O,8O和100ng标准溶液,测定各自峰面积,以 峰面积对二甲戊乐灵的绝对进样量(ng)进行回归,建立 线性回归方程.二甲戊乐灵标准色谱图见图2. 1.3.2样品处理取500ml待测河水样品经定量滤纸过 滤.置于1000m1分液漏斗中,加入5Oml二氯甲烷和5g 无水硫酸钠,充分振摇,静置30mln.分层后收集二氯甲 烷层于圆底烧瓶(如发生乳化现象,则乳化部分再过无水 硫酸钠,并用二氯甲烷冲洗无水硫酸钠,一并转入圆底烧 瓶),用真空旋转蒸发仪蒸发(水浴30"C)至数毫升后转入 1Ornl刻度离心管中,并用少量二氯甲烷洗涤圆底烧瓶3 次.继续蒸发至近干,最后用弱N2气流吹干,加0.2Om1 甲酵溶解,混匀后即为样品测试液. 1.3.3样品测定在标准溶液测试相同条件下,取样品测 试液1Ol进样测定,测定其峰面积.根据样品峰面积,由 标准曲线回归方程计算水样中二甲戊乐灵的含量,再由水 样体积计算得水样中二甲戊乐灵的含量(以g/L表示). 样品色谱图见图3,图4为样品加标色谱图. 图2二甲戊乐灵标准图谱 mln 8 一,一一 八g 图3水样色谱图 图4样品加标色谱图 2结果与讨论 2.1色谱条件的选择 787 2.1.1色谱柱CI8柱为非极性烷烃类化学键合相,对极 性较弱的二甲戊乐灵有较强的保留,采用甲醇一水流动相 能将二甲戊乐灵与其他杂质较好的分离.本法采用依特利 cI8柱(5,250×4.6n'I1TI)反相色谱柱作为分离柱. 2.1.2流动相的选择除色谱柱外,流动相也是影响化合 物分离的重要因素.本法选择价格比较便宜的甲醇做流动 相,试验了不同比例甲醇一水(85%,100%甲醇)的分离效 果.结果表明,100%甲醇和99%甲醇一水时的分离度不能达 到分离要求;而采用85%甲醇一水时分离度达2.5,满足分析 要求.甲醇含量过低时,分析时间过长,峰形变宽,拖尾,且 灵敏度降低.所以本文选用85%的甲醇做流动相 2.1.3流速的选择色谱分离时,流速主要影响溶质与吲 定相和流动相的相互作用,从而引起待测物质的保留时间 改变,继而使色谱峰分离度发生变化.本法采用1.0ml/ IT.i,可使目标化合物和杂质达到良好分离,二甲戊乐灵保 留分析时间为10.5min. 2.2样品处理条件的优化 2.2.1样品提取溶剂的选择二甲戊乐灵具有疏水性,难 溶于水,而易溶于有机溶剂丙酮,二甲苯,氯代烃,芳香 烃类溶剂等.本实验根据所选溶剂的提取效率和后续处理 的难易程度,选择二氯甲烷作提取剂. 2.2.2提取次数对提取效率的影响以50n11二氯甲烷为 提取剂,振摇100次,试验了的不同提取次数对提取效率 (加标量为1000ng)的影响试验结果表明,一次提取效 率高达94%以上,所以本法采用50n二氯甲烷溶剂提取 一 次. 2.3方法性能指标 2.3.1方法的线性范围和检出限在分析件下,本法的绝 对量的线性范围上限至少可达】00ng,线性回归方程为A 51667C+27921.r=0.9995.以3倍信噪比(S/N)计算得方法 绝对检出量为0.12ng,水样检出限为4.7×10t~g/l. 2.3.2方法精密度方法的日内相对标准偏差:以20ng, 50tag,100ng水平的二甲戊乐灵标准液,于同一天内按优 化的试验条件连续测定7次,分别以峰面积计算日内相对 标准偏差为0.48%,1.23%和3.65%.说明精密度满足河 水中微量二甲戊乐灵分析的要求. 2.3.3加标回收率按lt~g/L,2t~g/I两个质量浓度水平 进行加标回收试验,同时作空白试验.利用保留时问定性, 采用外标法以样品加标进行校正,计算回收率.实验结果 表明,本法回收率为89.1%,102.2%,平均回收率为 95.6%.本法准确满足河水中微量二甲戊乐灵分析要求. 3方法应用 采用本法对成都南河水样进行了测定,但未检出二甲 戊乐灵.经对该水样按1.0几,2.0btg/L两个质量浓度 水平加标后处理和测定,结果回收率达89%以上,说明本 法适宜于检测河水中微量二甲戊乐灵,水样中其他共存物 质对测定的影响很小.本法处理步骤简单,准确度与精密 度均达到水样中微量二甲戊乐灵的测定要求. (下转第789页) 理岱亟随医2oo6年第33卷第5期ModemPreventiveMedicine,2006.voI.33.No.5 于水,并能与任何比例与醇相溶. 苯酚【C6HSOH】分子量94.n.是简单的一元酚.无 色,易挥发,具有恶臭味.沸点182"(3,能溶于水,并能与 任何比例与醇相溶. 根据以上特性,标准品和样品的处理都用甲醇溶解. 2.3方法的线性试验用不同浓度的氢醌,苯酚混合标 准溶液,在规定的色谱条件下,进样5.0,其回归方程及 相关系数见表l. 表1线性试验结果(mAU) 氢醌的回归方程C1=8.37×10—4A一0.021,71=0.9997 苯酚的回归方程(32=1.13×10—3A一6.68×10—3, =0.9999 2.4方法的精密度试验 2.5回收试验选用一样品(氢醌本底含量为0.00688 nag/nil,苯酚本底含量为0)进行加标回收实验,氢醌回收 率为94.5%-95.7%,苯酚回收率为98.8%,100%. 3结论 通过甲醇溶解样品,超声波提取样品的前处理方法, (上接第787页) 789 以及优化高效液相色谱条件下,成功地进行了祛斑类化妆 品中氢醌和苯酚的高效液相色谱测定的方法研究,该方法 灵敏度高,稳定性好,简单易行,分离效果好,适用于各 类祛斑化妆品中氢醌和苯酚的测定. 表2重现性试验结果 [参考文献] [1]甘卉芳.化妆品,洗涤用品和服饰中有害物质及其防护[M]. 北京:化学工业出版社,2000.49,82, [2]朱杰民,胡静,杜达安+高效液相色谱法多波长测定祛斑类化 妆品中氢醌和苯酚[J].环境与健康.2000,17(2):109一 llO. [3]中华人民共和国卫生部.化妆品卫生规范[S].1999.169— 170. 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