血小板抗原基因的分型与配型临床疗效

血小板抗原基因的分型与配型临床疗效 论文范文 题目:血小板抗原基因的分型与配型临床疗 效 编辑:司马小 作者:林国连 高发平 陈雅雯 【关键词】 血小板 摘要:目的:血小板基因分型及配型的探导～以便确定临床血小板输注的安全和疗效。方法:应用聚合酶链序列特异性引物技术,PCR,SSP,～对湛江市72例患者,人血小板抗原,的HPA1-5系统等位基因进行分型～由湛江市血液中心提供相配型的血小板为其进行成份血小板输注。结果:经血小板基因配型的吻合组血小板输注后CCI1、CCI24效果明显优于对照组。结论:对血小板基因分型与配型可以提高临床输注血小板的安全性和疗效。 关键词:人血小板抗原,基因分型,配型,临床疗效 The Genotype Matched-type and Clinical Effect of Platelets Antigen Gene Abstract: Objective: To research the genotype and the matched-type of platelets antigen gene for making sure the clinical effect of the platelets inject. Method: Divide HPA1-5 system accede of 72 patients in Zhanjiang by the technique of PCR-SSP. The inject matched-platelets with provided by the blood of Zhanjiang for patients. Result: The group injected the matched genotype platelets in the effect of CCI1.CCI24 were better than the compared one. Conclusion: To divide the genotype and match the type of platelets can improve the safety and curative effect of the platelets injection. Key words: Platelets antigen; The genotype; Matched-type; Clinical effect 国外近年来经大量研究后发现～HPA,人血小板抗原,在新生儿血 小板减少性紫癜～输血后紫癜～和经血小板输注后无疗效等疾病中具 有重要意义,1，2,。特别在临床上～许多血小板减少性紫癜患者～ 因血小板输注疗效很差～并发出血等～更有甚者导致死亡等严重后 果。因此～有必要对血小板抗原基因分型及配型进行深入的探导。一 直以来～医学上一直用传统的血清学方法进行HPA分型～由于缺乏高 质量、高效价抗血清等等多种因素的制约～始终无法对HPA进行分 型。随着对HPA基因的深入研究～国外近年来己报道,3，6,将基因 检测技术用于血小板分型研究中～经临床配型输注取得较好的效果。 本文应用聚合酶链,序列特异性引物技术,PCR-SSP,对湛江市区72 例患者的HPA1-5系统等位基因进行了分型～并提供基因型相合的血小 板成份进行输注～现报告如下。 1 材料与方法 1.1 检测标本:抽取185名湛江市区的健康军人献血者以及72例 需输注血小板的患者静脉血1m1,EDTA抗凝,。 1.2 主要试剂和仪器 Taq DNA聚合酶由Promega公司提供,HPA1-5系统等位基因特异性引物由美国C&T公司提供,DNA提取采用德国QLAmp DNA Mini kit,扩增仪为澳大利亚RG公司3000型WVSR分析仪。 1.3 DNA提取:采有德国QIAamp DNA Mini Kit从全血中提取DNA～操作按机器说明书进行。 1.4 PCR,SSP特异性HPA基因扩增 1.4.1 PCR反应体系:反应体系共10μl～包括反应混合液,含特异性HPA1a，HPA5b基因引物～内对照引物,Dntp、PCR缓冲液等,8μl～提取的基因组DNA1μl及含0.6U TaqDNA酶液1μl。 1.4.2 PCR扩增参数:首先以95?5min变性,然后按95? 30S～60? 60 S～72?90 S扩增～共45个循环。 1.4.3 扩增产物鉴定:PCR扩增产物在2%琼脂糖凝胶中电泳～在紫外光下观察结果。 1.5 临床HPA基因吻合组与末配型组输注成份血小板的疗效比较果:将需要输注血小板的患者分为基因吻合者,吻合组,及末配型者,对照组,两组～分别在输注前、输注后1h和24h进行血小板计数～同时记录输入的血小板数总量及患者的体面积。计算血小板输注后1h、24h患者纠正的血小板计数增值,CC1,,7,～比较两组的有效率。 2 结果 2.1 对185名湛江市区的健康军人献血者进行HPA基因分型～其ABO血型、HPA基因型分布情况见表1。 2.2 对72例需输注血小板的患者进行HPA基因分开型～其ABO血型、HPA基因型分布情况～见表2。 2.3 对湛江市区72例需输注血小板患者进行血小板基因分型并选择～由湛江市血液中心提供HPA基因相吻合的血小板输注。共收到临 床反馈资料60份～其中基因型吻合者,吻合组,29份～未配型者,对照组,31份。吻合组与对照组血小板输注后1h、24h平均CCI值见表3。对吻合组及对照组血小板输注后1h、24h的输注有效率进行了比较,8,～结果见表4。 3 讨论 血小板抗原在临床输血中有着重要的意义。血小板抗原不合～可导致血小板输注后疗效差别很大～或者无效～输成份血小板后引起紫癜～以及引起新生儿血小板减少性紫癜等等。要想输成份血小板有满意疗效～必须对血小板抗原基因分型及配型。近年来～国外对血小板抗原基因分型进行很多研究。我国大部分地区没开展此项技术的研究工作～临床上大部分地区没有对血小板抗原基因分型及配型。导致临床上输血小板的疗效不很满意～甚至出现负作用。因此希望广大医务工作者在此方面加倍努力。对湛江市185名献血员的HPA1-5系统等位基因进行分型～可建立一个小资料库～为临床输注成份血小板的患者提供配型相合的成份血小板。对提高输血小板疗效有很大的帮助～还可以对血小板特异性抗体进行鉴别。对湛江市72例患者进行的HPA的基因分型及配型～从收集回的60例疗效来看～基因吻合组输血小板后1h、24h的平均CCI值比对照组显著升高。从两组疗效来看吻合组输注血小板后1h、24h有效率 表1 湛江市185名献血者ABO血型、HPA基因型分布 略 均为100%～而对照组则为83.9%和80.6%～明显不及吻合组。目前临床上输注血小板只考虑ABO血型相同～,实际工作中～由于病情急～且血源受限制时～血型不同也会输注血小板～这情况结果～本人在另一编文章中已述,而忽视HPA配型。对那些需反复多次输注血小板者～更应进行HPA的基因分型～以便提高输血小板的安全和疗效。 表2 湛江市72例患者ABO血型、HPA基因型分布 略 参考文献: ,1,williamson L M,Hacket G,Pennie J,et al.The natural history of fetomatrnal alloimmunization to the platelet- specific antigen HPA-la as determined by antenatal screening,J,.Blood,1998～92:2280. ,2,Kickler T S.Platelet immunology.In:Anderson K L, Ness P M.eds.Scientific Basis of Transfusion Medicine,M,.Philadelphia:WB Saunders,1994.304. ,3,Metcalfe P,Cavanagh G,Hurd C,et al,HPA genotyping by PCR-SSP:Report of 4 exercises,J,.Vox Sang,1999～77:40. ,4,Skogen B,Belissimo D B,Hessner J M,et al.Rapid determination of platelet alloantigen genotypes by PCR using allele-specific primers,J,.Transfusion,1994,34:95( ,5,Cavanagh G,Dunn A,Chapman C E,et al.HPA genotyping by PCR-SSP:A streamlined method for rapid routine investigations,J,.Transfus Med,1997,41. ,6,Chen D F,Pastucha L T,Chen H Y,et al,Simultaneous genotyping of human platelet antigens by hot start sequence-specific polymerase chain reaction with DNA polymerase AmpliTaq gold,J,.Vox Sang,1997,72:192. ,7,王培华.输血技术学,M,.北京:人民卫生出版社,1988.182- 183. ,8,孟钵,张益红,等.血小板抗原基因分型及配型的研究与初步 应用,J,.临床检验杂志,2001,19(4):207