超速离心法分离血浆脂蛋白
超速离心法分离血清脂蛋白
取正常人混合血清,定量移入烧杯中,根据d = mPv ,用万分之一分析天平根据称量法测出血清初始密度do ,用干燥固体溴化钾调血清密度至1 300gPml ,按Radding2Steining 公式计算需加入的干燥KBr 重量,公式如下:X = Vo (dm2do)P1201312 ×d m 式中,Vo 代表原血清毫升数,do 代表初始血清密度,dm代表需调定的血清密度,01312 为KBr 的比容(mlPg) ,X代表需加KBr 克数。
待固体溴化钾完全溶解后,将血清分别移至10 个透明的离心管中,再用滴管沿管壁小心铺加密度为11006 的氯化钠溶液约28 ml ,勿使界面混扰。平衡后加盖封闭,小心放入55122Ti角度转头,置入Beckman L8255 型超速离心机中,选用慢加速工作程序,加速和减速时间均控制在45 min ,10 ?,50 000 rPmin ,离心5 h。离心结束后,取出离心管,见血清脂蛋白已分层。