水溶性高良姜素精氨酸酯的制备研究

水溶性高良姜素精氨酸酯的制备研究 水溶性高良姜素精氨酸酯的制备研究 作者:符伟玉，张建和，罗辉，佘戟，梁念慈【关键词】 高良姜素; L 摘要:目的制备水溶性高良姜素衍生物，提高高良姜素的生物 利用度。方法采用过量的L精氨酸与高良姜素在乙醇中回流反应，反 应混合物经柱层析分离纯化，得3个水溶性化合物B，C，D。结果经 TLC，UV，IR谱初步分析，确定B，C，D分别为:高良姜素一精氨酸 酯、高良姜素二精氨酸酯、高良姜素三精氨酸酯。高良姜素，B，C， D 抑制红白血病K562细胞生长的IC50(μg/ml)值分别为:26.2， 40.4，47.9，60.5。结论 此高良姜素水溶性衍生物的制备反应为一 酯化过程;但高良姜素结构中羟基封闭不利于其生物活性的保持。 关键词:高良姜素; L精氨酸; 水溶性衍生物; K562细胞 Study on Preparation of the Water Soluble Galangin-arginine Ester Abstract:ObjectiveTo prepare the water solubte galanginarginine derivative and improve the bioavailability of galangin (Ga). MethodsOverdosly Larginine and Ga were refluxed in alcohol. Reaction compounds were isolated on silica gel column chromatography and their structures were identified by spectral and chemical analysis. ResultsThree water solube compounds were isolated and identified as galanginmonoargininate(B), galangindiargininate (C) and galangin-triargininate (D). Ga, B, C and D inhibited the growth of erythroleukoemia K562 cells, and the inhibited IC50(μg/ml) values were 26.2, 40.4, 47.9 and 60.5. ConclusionThe above preparation of the water soluble Galanginarginine derivative were esterification process,but the blocking of Hydroxyl in Ga structure was disadvantageous to keep its bioavailability. Key words: Galangin; Larginine; Watersoluble derivative; K562 Cell 高良姜Alpinia officanorum是南方广泛种植的一类药用植物,1,。 高良姜素(galangin)属黄酮类化合物，是高良姜的主要成分之一， 同时也存在于多种植物体中。高良姜素明显的抗癌、抗氧化、抗病毒、抗致畸等作用日益得到关注,2,，但与大多数的黄酮类苷元相似，高良姜素几乎不溶于水，限制了给药途径，影响其在体内的吸收和代谢,3,。为了拓宽高良姜素的临床用途，提高其生物利用度，本研究组尝试通过高良姜素与精氨酸结合制备水溶性的药物前体,4，5,，就制备工艺、产物的结构以及衍生物对癌细胞的抑制作用进行了初步的探讨。 1 仪器与材料 1.1 仪器Lambds 2s型紫外/可见光谱仪(PE公司);175C/UMA500型显微红外光谱仪(BioRAD公司);852型恒温磁力搅拌器(深圳天南海北有限公司);CO2孵箱(Precision);IS6000型液闪记数仪(Beckman)。 1.2 材料 高良姜素按文献,1,提取纯化;L-精氨酸(上海丽珠东风生物技术有限公司);薄层层析用硅胶GF254(青岛海洋化工厂);柱层析用200~300目硅胶(青岛海洋化工厂);其它试剂均为分析纯。 2 方法与结果 2.1 高良姜素精氨酸酯的制备高良姜素1.1 mg(0.448 mmol)，微温下完全溶于40 ml无水乙醇中，然后加入L精氨酸470 mg(2.7 mmol)，搅拌下，滴加pH=10~11的Na2CO3溶液，将反应系统调至pH=8左右，加热搅拌回流48 h，TLC监测反应进程。反应结束后，减压除去溶剂至干，再加入经干燥处理的无水乙醇溶解，减压过滤，滤液浓缩至小体积，经200~300目硅胶柱层析分离。 2.1.1 经石油醚?醋酸乙酯=5?1?1?1梯度洗脱，得难溶于水的化合物A:34.9 mg;Rf =0.86(展开剂:石油醚?醋酸乙酯=2?1)，高良姜素的Rf =0.86;显色:紫红色(FeCl3);黄绿荧光(AlCl3，紫外灯);橙红色(2.4二硝基苯肼)。 2.1.2 经醋酸乙酯?甲醇=5?1?1?1梯度洗脱，得可溶于水的化合物B:52.7 mg;Rf =0.67(展开剂:醋酸乙酯?甲醇=8.5?1);显色:紫红色(FeCl3);黄绿荧光(AlCl3，紫外灯);橙红色(2.4二硝基苯肼)。 2.1.3 经醋酸乙酯?甲醇=2?1洗脱，得易溶于水的化合物C:111.7 mg;Rf =0.22(展开剂:醋酸乙酯/甲醇=2?1);显色:紫红色(FeCl3);黄绿荧光(AlCl3，紫外灯);橙红色(2.4二硝基苯肼)。 2.1.4 经醋酸乙酯?甲醇=1?1?1?5梯度洗脱，得易溶于水的化合物D:55.0 mg;Rf =0.22(展开剂:为醋酸乙酯/ 甲醇=1?5);显色:无色(FeCl3);浅黄荧光(AlCl3，紫外灯);橙红色(2.4二硝基苯肼)。 2.2 高良姜素、A、B、C、D的紫外吸收谱(见图1)及λMeOHmax(见表1)和红外吸收谱(见图2)得到测定。 2.3 对红白血病K562细胞生长的抑制作用采用MTT法观察高良姜素、B、C、D分别在48 h对K562细胞生长的抑制作用。各样品用DMSO配成原液，超声震荡。各药物临用前用对应溶剂稀释至所需浓度，煮沸30min灭菌。处理细胞时，DMSO的终浓度小于或等于0.1%，实验表明该浓度对细胞无影响。