鸡传染性腔上囊病琼脂扩散试验

鸡传染性腔上囊病琼脂扩散试验 目的要求 1.掌握传染性法氏囊病琼扩试验的操作方法; 2.了解判定以及注意事项。 实验材料 塑料采血管、打孔器、滴管、平皿、烧杯、酒精灯、琼脂、带盖瓷盘、氯化钠、苯酚、蒸馏水IBD琼扩抗原、阳性血清等。 内容方法 鸡传染性腔上囊病(IBD)1957年首次在美国特拉华洲甘布洛(Gumbro)城发现。因此又称“甘布洛鸡”，是鸡的一种病毒性传染病。病鸡表现腔上囊和肠道炎症以及肾脏病变，主要侵害雏鸡幼龄鸡。本病世界各地均有流行，对雏鸡的培育威胁极大。我国近几年来本病严重流行，并分离出了该病病毒。目前，本病检疫诊断较为快速简易、准确特异的方法是琼脂扩散试验。 (一)操作方法 1(琼脂板的制备(也可用马立克氏病琼扩试验的琼脂板代替):琼脂1克，氯化钠8克，苯酚0.1毫升，蒸馏水或无离子水100毫升溶化后，用5.6 NaHCO3调至PH6.8,7.2，将溶化均匀的琼脂倒入干净的平皿，制成厚度3毫米的琼脂板，冷凝后加盖置普通冰箱，可供一周内使用。 2(打孔:用打孔器(直径2毫米 和毫米薄壁圆型金属小管)，在座标纸上画好七孔图案，把座标纸放在带有琼脂的平皿下面，照图案在空位置打孔，将切下的琼脂吸出或用针头挑出，外周孔径为2毫米，中央孔径为3毫米，孔间距3毫米，如图所示。 3(抗原及血清的添加:中央孔7加入抗原0.02毫升。1、4孔加入阳性血清，2、3、5、6孔各加入受检血清，添加至孔满为止，待孔中液体吸干后将平皿倒置，在37?条件下进行反应，逐日观察三天，并记录结果。 (二)判定 阳性:当检验用标准阳性血清和抗原之间有明显致密的沉淀线，或者阳性血清沉淀线末端向毗邻的受检血清孔内侧偏弯者，此受检血清判为阳性。 阴性:受检血清与抗原之间不形成沉淀线，或者阳性血清的沉淀线向毗邻的受检血清孔伸直或向其外侧偏弯者，此受检血清判为阴性。 (三)注意事项 1(对琼脂板打孔时，吸出或用针头挑出切下的琼脂，注意不要使琼脂与平皿脱离，以防止加样后下面渗漏，若琼脂与平皿脱离可在酒精灯上稍稍加热封底。 2(溶化的琼脂倒入平皿时，注意不要产生气泡。 3(受检血清要求不腐败和不溶血，勿加防腐剂和抗凝剂。