注射用五水头孢唑林钠细菌内毒素检查法研究

注射用五水头孢唑林钠细菌内毒素检查法研究 注射用五水头孢唑林钠细菌内毒素检查法 研究 294 广东化工 ?.gdchem.com 2009年第8期 第36卷总第196期 研究 吴九玲 (深圳技师学院&深圳高级技工学校,广东深圳518026) 【摘要】目的:建立五水头孢唑林钠的细菌内毒素检查.方法:采用2005年版 《中国药典(二部)》附录?E细菌内毒索检查法【1].结果: 五水头孢唑林钠在10m咖L稀释浓度时对细菌内毒素检查法无干扰作用,其细菌 内毒素限值L=O.10EU/mg.结论:可采用细菌内毒素检查法 替代家兔热原法对五水头孢唑林钠进行细菌内毒素检查1 【关键词】注射用五水头孢睦林钠;细菌内毒素检查法;干扰试验 【中图分类号】TQ[文献标识码】A【文章编号】lo07—1865(2009)08—0294.02 StudyofBactericaLEndotoxinsTestofCefazoLinSodiumPentahydratefor Injection WuJiuling (ShenzhenIustituteofTechnicians&ShenzhenSeniorTechnicaLSchool,Shenzhen518026,China) Abstract:TostudythebactericalendotoxinstestofCefazolinSodiumPentahydrateforInjecti onAccordingtothebactericalendotoxinstestandinhibitionor enhancementtestapprovedbyChinesepharmacopoeiaof2005edition,Theresultsshowed10mg/mLsolutionofCefazolinSodiumPentahydrateforInjectiondon't inhibitorenhancethetest,L0.10EU/mg.ConcLusion:Theseresultssuggestthatthebacterica lendotoxinstestcanbeusedforthedetectionofendotoxinin CefazolinSodiumPentahydrateforInjectioninsteadofpyrogentest. Keyword:CefazolinSodiumPentahydrateforInjection;bactericalendotoxinstest;inhibitio nandenhancementtest 鲎试剂用于细菌内毒的快速检测,具有操作简单,灵敏度 高,重现性好,实用性强等优点.注射用五水头孢唑林钠是国 家四类新药,我们参照中国药典2005年版二部附录XIE细菌 内毒素检查法和中国药品检验操作2005年版,对注 射用注射用五水头孢唑林钠进行了细菌内毒素检查的研究,探 讨以细菌内毒素检查法检测注射用五水头孢唑林钠的可行性 为]. 1实验材料 (1)鲎试剂:0.1mL/支,0.125EU/mL,批号0705212,湛 江安度斯生物有限公司生产;0.1mL/支,0.25EU/mL,批号 0705300,湛江安度斯生物有限公司生产;0.1m】L,支,O.125EU/mL, 批号06124113,福州新北生化工业有限公司生产;0.1mL/支, 0.25EU/mL,批号06123413,福州新北生化工业有限公司生 产. (2)内毒素标准品:100EU/支,批号2007—5,中国生物制 品检定所. (3)内毒素检查用水:5mL/支,批号0706090,湛江安度 斯生物有限公司生产. (4)仪器:XW-80A型自动漩涡混合器,HHS一6型数显恒 温水浴箱. (5)玻璃器材:试管,刻度吸管等均经250?干烤1h除细 菌内毒素. (6)供试品:注射用五水头孢唑林钠,内毒素的限值为 L=0.10EU/mg;批号:0709202,0709212,0709222生产单位: 糟瑶釜 2.1本品内毒素限制的确立 由公式L=K/M,式中K=5EU/(kg?h),M是每kg每h的最 大剂量,由于本品在临床上成人一次最大用量为3000mg,因 此确定M=3000mg/(60kg'h),计算得供试品的= 0.10EU?mg,. 2-2鲎试剂灵敏度复核 按中国药典2005年版二部附录XIE细菌内毒素检查法进 行,结果0705212和06124113的2c=0.125EU/mL,0705300 和06123413的2c=0.25EU/mL,测定结果均在0.5,2.0,四 批鲎试剂均可用于试验. 2.3供试品干扰预试验 (1)鲎试剂:选择灵敏度2=0.25EU/mL的鲎试剂进行实 验. (2)内毒素系列溶液的制备(C溶液系列):将内毒素工作 标准品稀释到E:42=1EU/mL,Eo5:2X=0.5EU/mL浓度溶 液,备用. (3)样品稀释(A溶液):取1支样品制成初始浓度为 100rng/m~的供试液S0. 用BET水将样品s0稀释成5倍(浓度为20mg/mL),10倍(浓 度为10mg/mL),20倍(浓度为5mg/mL),40倍(浓度为 2.5medmL),80倍(浓度为1.25mg/mL),160倍(浓度为 0.625mg/mL),320倍(浓度为0-3125mg/mL)的一系列溶液, 分别记为Ss,S10,520,S4o,S8o,816o,S32o. (4)制备含内毒素供试品溶液(B溶液系列): S10E0.5(1mLEI+ImLs5),S20E0.5(1mLEI+ImLS10), S40E0.5(1mLEI+ImLS20),S80E0.5(1mLEI+ImLS40), S160E0.5(1mLEI+ImLs8o),$320E0.5(1mLEI+ImLS160) 各2mL. (5)反应测试:取鲎试剂分别与2_3中的A,B,C溶液反 应,结果见表1. [收稿15t期]2009—06?29 [作者简介]吴九玲(1974.),女,硕士研究生,讲师,主要研究方向为药品,食品等微生 物检验. 2009年第8期 第36卷总第196期 广东化工 ?nv,v.gdchem.com295 表1初筛试验结果 Tlab.1T_estresults 鲎试剂批号样品批号与鲎试剂反应液 供试品的稀释倍数 1020408O16O320 阳性对 照(C) 阴性 对照 0705300 0709202 07092l2 0709222 样品(A) 供试品阳性(B) 样品(A) 供试品阳性(B) 样品(A) 供试品阳性(B) ++ 0709202 0709212 样品(A) 供试品阳性(B) 样品(A) 供试品阳性(B) 样品(A) 0709222 供试品阳性(B) ++ 如上结果可初步确定,该样品的释倍数为l0倍时不存在供试液,把稀释40倍(0)2.5mg/mL,80倍(S8o) 干扰,即为So/lO=lOmg/mL.1.25mg/mL,备用. 2.4正式干扰试验(4)制备含内毒素供试品溶液(B溶液系列):用$4o和内毒 (1)选用灵敏度为2=0.125EU/mL的鲎试剂进行实验,样素标准品5,甄Eo125,Eo0625,Eo03125,即,22,i,0.l:1 品检验浓度为1.25mg/mL.稀释得,0.52,0.252的含内毒素的供试品溶液.用BET水 (2)内毒素系列溶液的制备(c溶液系列):取一支内毒素标稀释成4入,2^,,0.531,0.253.不同浓度的标准溶液即 准品,用BET水稀释成5个浓度的标准溶液即E0.5(o.5EU/mL),E0.25(0.25EU/mL),E0.125(0.125EU/mL), S80E0.25(1mLE0.5+1mLS401,S80E0.125(1mLE0.25+lmLE0.0625(0.0625EU/mL), E003l25(O.03125EU/mL)溶液. $40),S80E0.0625f1mLE0.125+1mLs40),S80E0.03125(1(5)正式干扰试验,取鲎试剂分别与2.4中的B,C溶液反 mLE0.0625+1mLS40)各2mL.备用方法同2.3(1).应,使用两个鲎试剂厂家的鲎试剂对供试品进行干扰试验,以 (3)样品制备:取1支样品制成初始浓度为100mg/InL的排除厂家不同而出现的差异.反应结果见表2和表3. 表2干扰试验结果1(鲎试剂批号:0705212,湛江安度斯,=O.125EU/mL) 11ab.211estresultsl 注:C系列:Es-Lg..(E瓜 /4)=Lg[(Lg0125+Lg0.125+Lg0.125+Lg0I25)/4]=0125(EU/mL);B系列:由公式巨 =Lg..(?xt/4)计算出臣"巨2,臣3均 为0125EU/mL,说明臣在O5,2范围内,无干扰作用. 表3干扰试验结果2(鲎试剂批号: Tab.3 06124113,福州新北,2=0.125EU/mL) Testresults2 注:C系列:EsLg.(/4)Lg,[(Lg0125+Lg0125+Lg0125+Lg0t25)/4]=0125(EU/mL);B系 列:由公式E=Lg,(yxt/4)it~lE【1,Ee,E均 为o.125EU/mL,说明臣在0.5Es~2Es范围内,无干扰作用.(下转第293页) 2009年第8期 第36卷总第196期 广东化工 ?nv,v.gdchem.com293 传热的三种基本方式时,结合家用暖水瓶为何要用软木塞,夹 层要抽真空及内胆要镀成银光面进行分析和讨论.通过这样的 举例,讨论,学生由被动学习变成主动学习,不仅活跃了课堂 氛围,而且让学生们真正感受到此课程的重要性.同时,有了 具体的例子,学习起来感到生动形象,大大激发了学生学习化 工生产基础的兴趣,明显提高了教学质量. 5强化现代教学手段的运用 化工生产基础涉及众多大型化工设备结构,复杂的操作 原理及流程,大量的计算.学生没有实际工作经验,对许 多化工设备缺乏感性认识,在学习化工设备的原理时会感到比 较抽象和枯燥,影响学习效果.采用传统的教科书加黑板的教 学模式,教师难讲,学生难学,利用多媒体教学能够把抽象的 概念或过程形象地展示,动态地显示设备结构,操作原理,工 艺流程中物料的流动情况,使原本难讲难学的教学内容更直 观,生动,形象,降低了教学难度,学习效果显着提高.利用 多媒体教学能够精确作图,进行过程分析,并能方便地多次重 复再现整个分析过程,减少教师在课堂上板书的时间,从而使 教师将精力与时间更多地集中在知识的讲解和与学生的交流 上,这既强化了基本知识的应用,又是对教学内容的深化和补 充. ,对于 化工生产基础实验装置一般价格较高,并且占地大 学生较多的班级很难做到人均一台装置,而仿真实验每个学生 利用仿真实验软件在计算机上运行,解决了学生多而实验装置 少的问题.对于验证性实验和演示实验大多数采用仿真实验. 在仿真实验软件上,学生可以利用机房计算机多次对化工原理 实验装置进行不同的仿真操作,这样,使学生加深了对基本原 理的理解,并提高了上课效率. 6结束语 通过近年来的教学实践和研究,笔者深刻认识到,培养工 程观念,激发学生的学习兴趣,让学生多动脑思考,引导学生 积极主动地学习,才能有效提高教学效率.教师只有让学生认 识到现在所学的一切知识对自己将来的工作和才能的发挥非 常有用,才能真正激发起学生的学习兴趣. 参考文献 [1】王奇.化工生产基础(第二版)[M].化学工业出版社,2006.8. [2]刘祥丽,等.化工原理教学方法初探【J].九江学院,2008(3):121—122. [3]赖庆柯.浅谈如何提高化工原理的教学质量[J]].广东化工,2006(3): 78.8O. [4]李春生,等.浅谈如何搞好化工原理的教学【JJ.山东教育学院, 2003(1):73—74. [5】宋贤良,等.浅谈增加化工原理教学的趣味性fJ].广东化工.2008(1): 1l2.1l4. [6】刘丽英,等.在化工原理教学中注重工程观点的培养[J】.化工高等教 育,200t(1):56—58. (本文文献格式:汪玲浅谈技校化工生产基础课的教学策略 【J]_广东化工,2009,36(8):283) (上接第295页) (6)供试品内毒素检查: 按中国药典2005年版二部附录XIE细菌内毒素检查法进 行的细菌内毒素检查,其中鲎试剂:2=0.125EU/mL,批号分 别为:0705212,06l24113,厂家分别为湛江安度斯生物有限 公司和福州新北生化工业有限公司;供试品的检验浓度: C=I.25mg/mL,L?0.10EU/mg.检查结果见表4. 表4供试品内毒素检查结果 Tab.4Testresults 批号样品管阳性对照阴性对照 由表4中可以得知,三批样品细菌内的毒素含量均小于 0.10EU/mg,内毒素检查合格. 3结论 (1)由干扰预试验得出结论,当注射用五水头孢唑林钠样 品在浓度为10mg/mL及以下浓度时对内毒素检查不产生干 扰. (2)本试验选用灵敏度为A=0.125EU/mL的鲎试剂进行实 验,样品检验浓度为1.25mg/mL.由表2,表3可以得出结论 三个批号的样品用分别用两个厂家的鲎试剂检测,E在 0.5Es,2Es范围内,表明该样品在该浓度下对内毒素检查无干 扰,可以选用灵敏度为A=0,125EU/mL的鲎试剂对注射用五水 头孢唑林钠进行内毒素日常检查. (3)七批样品在该方法检查下检验结果为阴性,细菌内毒 素含量均小于0.10EU/mg. 参考文献 [I]中华人民共和国药典委员会.中国药典(2005版第二部)IS1.2005,85—88. [2]黄捷,王炳,崔志伟.细菌内毒素检查法与热原检查法fJ1.科技资讯, 2006,4:159. 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