草鱼头肾免疫细胞组成和数量变化的研究.doc

草鱼头肾免疫细胞组成和数量变化的研究.doc 草鱼头肾免疫细胞组成和数量变化的研究 头肾:某些圆口类及少数硬骨鱼在成体时，仍保留残存的前肾,称为头肾，其位置相当于全肾的前部，具有免疫功能。头肾含有大量的免疫细胞(其中淋巴细胞约占62(2, ，粒细胞约占36(6,，单棱细胞和巨噬细胞约占1(2,。本研究检测不同生长发育期的草鱼头肾器官重量及其免疫细胞数量。 材料:试验鱼:取自本所养殖场养殖的正常草鱼。有当年、I龄、?龄、?龄、Iv龄和?龄草 鱼，分析天平，无菌剪刀，不锈钢筛，无菌Hanks液，l00目的尼龙网，血细胞计数板，(Giemsa染色液，Bouins液，石蜡，HE染液-光镜标本制作)，(3,的戊二醛卡可酸钠缓冲，1,的锇酸，，酒精，，树脂-电镜标本制作). 步骤: 1， 头肾重量测定:试验鱼先称体重然后断尾放血，用无菌操作进 行解剖，取出垒部头肾组织，分析天平称重, 2， 免疫细胞总数的测定:再取一定量的头肾组织，用无菌剪刀剪 碎，过不锈钢筛， 无菌Hanks液洗下l00目的尼龙网过滤，翩成一 定浓度的细胞悬液，立即采用血细胞计数板计数，(免疫细胞总 数包括全部淋巴细胞、粒细胞、单核细胞、巨噬细胞等所有白细 胞。)。 3， 头肾免疫细胞分类计数:采用头肾印迹片，Giemsa染色，按印 迹片自然分布计数l000—,2000个免疫细胞，进行分类统计。 4，光镜组织标本制作:采用Bouins液固定，常规石蜡包埋，4—5 m 厚切片，HE染色。,头肾印迹片采用Giemsa染色。 4， 电镜组织标本制作:用3,的戊二醛卡可酸钠缓冲液作前固定， 1,的锇酸作后固定，酒精系列脱水，树脂包埋，超薄切片，电子 染色后用透射电镜观察。 结果 1，草鱼头肾及其免疫细胞分布 A:草鱼头肾位于胸腔内咽退缩肌上方两侧， 围绕心腹隔膜前面的食道背面和两倒J分布。头肾呈扁平状， 分左右两叶，两叶头肾在基部相连。 B:在第1种静脉及其窦状隙周围，HE染色显示蓝紫色(由于淋巴细胞聚集) C:在第2种静脉及其血窦周围，HE染色显示较淡的颜色(粒细胞聚集) 2，头肾免疫细胞种类组成 头肾的细胞分类计数见表。由表可见头肾免疫细胞主要由淋巴细胞和粒细胞组成。 3 草鱼头肾器官重量和免疫细胞数量变化(表) 结果说明草鱼头肾器官重量随体重和鱼龄(特别是体重)的增加而增加，头肾免疫细胞总数则随头肾重量增加而相应增加，但是每毫克头肾组织的免疫细胞数则通常是稳定在10O一132万个之间，均值117(3 Giemsa染色步骤 (1) 自然干燥的细胞涂片(预先滴加甲醇固定更好)水平置于染色架上。 (2)将I液(用缓冲液或蒸馏水5-10倍稀释)滴盖涂片上，lO-30分钟。 (3)倒弃涂片上的I液，自来水漂洗干净。 (4)立即滴盖?液(用缓冲液或蒸馏水5-10倍稀释)在涂片上染色10-30分钟。 (5)倒弃涂片上的?液，自来水漂洗干净。 (6)趁湿加盖片或待干后镜检。 (2) Bouins液固定没查到具体固定时间 我的时间安排:周一周二上午，周六晚上有限选课。再就是三月十五号左右可能不在学校。