【word】 肠道致病菌的鉴定方法

【word】 肠道致病菌的鉴定方法 肠道致病菌的鉴定方法 中华临床医学研究杂志2007年5月第13卷第9期May2007,Vol13,No.9 产.配套的干化学法试纸条由苏州第一制药有限公司制造. 1.3检测方法 1.3.1干化学法每天开机预温后,用仪器附上的色 条作校验后,再取一条检测试纸用蒸馏水浸润后上机检测, 结果应都是阴性(pH除外).再取一条试纸检测尿质控品, 结果应在所附范围内,说明仪器和试纸条都正常,记录结果, 备查.然后,测试病人尿液,将试纸完全浸入不离心尿液中1 - 2s后取出滤纸上沾去多余尿液,按进行测定,并 打印结果. 1.3.2手工法按照《全国临床检验操作规程》【J的方法 进行. 2结果 2.1780例尿标本分析仪法与手工法结果比较,详见附. 附表.780例尿干化学法与手工法测定结果比较 笪堕蕉堡旦堕重堕望堑童垦望堕签垩壁垫旦塑堕 符合数670748672748687748765765757670 符合率(%)85.995.986.295.988.195.998.198.197.185.9 以上结果表明,尿分析仪与手工法测定结果大致符合. 但尿糖,红细胞,白细胞,蛋白测定结果符合率均低于90%, 说明存在着较多干扰成份. 2.2370例分析仪法结果为阴性标本的尿沉渣镜检结果 对370例分析仪法结果为阴性标本的尿沉渣进行镜检,结果 检出颗粒管型8份(2.2%),细胞管型6份(1.6%),白细胞 阳性18份(4.9%),红细胞阳性9份(2.4%),说明尿干化学 法出现了假阴性结果. 3讨论本文对780例尿液标本的测定结果表明,分析仪 法各项指标易受以下因素影响: 3.1pH的测定干化学法按操作说明要求掌握浸泡时间 及分析,样本宜新鲜. 3.2蛋白质的测定当尿中有管型时,分析仪不易检出呈 假阴性,做尿蛋白定性试验醋酸加热法(或磺柳酸法)均为阳 性.用干化学法测球蛋白的敏感性仅为白蛋白的1/5,1/ 100,也是出现假阴性的原因.大剂量青霉素滴注患者易出 现假阴性,当病人的尿中pH>8时易出现假阳性,pH>3时 易出现假阴性. 3.3葡萄糖的测定此实验中两例临床大剂量使用维生素 C的病人,测其葡萄糖为阴性,停药后复查阳性.当试纸带 长期暴露于空气中氧化变色而使葡萄糖测定假阳性,或某些 病人尿中含有过氧化氢类物质,能使色带色源呈色呈假阳 性. 3.4比重异常尿色如黄疸尿可测尿比重偏低,尿液本身 的pH对尿比重影响较大,当其pH<5时结果偏高,pH>8时 1247 结果偏低. 3.5隐血试验当发生尿路感染时,某些细菌产生过氧化 氢酶,假阳性也较高.笔者同时发现,利福平药物可降低红 细胞的反应性,使检测结果偏低1个阳性等级. 3.6胆红素的测定某些药物如氯丙嗪(精神,神经剂)致 假阳性. 3.7尿胆原的测定当尿中含有甲醛防腐剂或亚硝酸盐大 于0.05g/L时出现假阴性.当存在内源性干扰物质如卟胆 原可致假阳性. 3.8酮体的测定尿样本宜新鲜,否则出现假阴性. 3.9亚硝酸盐的测定放置过久或尿污染可致假阳性. 3.10白细胞的测定干化学法只能测中性粒细胞中的酯 酶,不与淋巴细胞发生反应,当某些疾病尿中以淋巴细胞为 主时易产生阴性结果. 本文的结果表明,干化学法可造成一定假阳性和假阴 性.造成尿干化学法假阳性的主要原因为尿试纸条检测 LEU可疑或阳性,尿镜检却见不到白细胞,临床上最常见的 是女性阴道分泌物对尿样的污染,其中的上皮细胞有类似颗 粒细胞的功能,可与试纸条上的白细胞膜块发生反应.此 外,尿液受甲醛,呋喃坦啶,大量胆红素,氧化型清洁剂等污 染,可使尿液试纸条检测LEU产生假阳性【.原则上阳性 结果应以传统手工法复核,这是质量保证重要环节,通过复 核可发现许多药物或其它干扰.按CCCI.S文件,尿蛋白 的确证试验为磺基水杨酸法.尿葡萄糖的确证试是葡萄糖 氧化酶定量法.尿胆红素的确证试验为Harrison法.尿白 细胞,红细胞的确证试验是尿沉渣显微镜检查.对于其阴性 结果与尿显微镜检查不一致的也应复查,尿沉渣镜检可对干 化学分析进行有效补充J.它不仅可检出一些药物在尿中 的结晶,而且能对化学分析中的假阳性结果起到纠正作用, 特别是对白细胞和红细胞. 总之,各实验室做尿常规应同时做尿沉渣镜检,临床检 验工作者应时刻重视用传统的手工法进行复核.建议在非 肾性,非泌尿系统疾病时,亚硝酸盐,蛋白,隐血,白细胞中有 一 项阳性者必须镜检;当患者为肾性,泌尿性疾病时,均为阴 性也需镜检. 参考文献 1.叶应妩,王毓三.全国临床检验操作规程(第二版),卫生部医政司.东 南大学出版社,1997.120,131 2.段同兴.尿沉渣染色镜检在临床应用中的价值.临床检验杂志,2002; 20(5):290 3.夏铁安,胡翊群,王清涛,等.临床医学检验.济南:山东大学出版社, 2004.4750 肠道致病菌的鉴定方法 内蒙古牙克石疾病控制中心(02215o】张焕芝 摘要目的:建立一种以粪便为标本的细菌学检验方法.方法:取粪便标本直接涂片做革兰染色,镜检观察标本中细菌数量,种类及比例;对粪便标 本进行菌群培养,分离病原菌,并与镜检结果进行对照.结果:因菌群失调导致的腹泻,直接镜检表现为细菌数量和种类普遍减少,或某一类细菌增 多或减少,或呈单一种类细菌;由某种病原菌引起的腹泻,直接涂片多数只能见到革兰阴性杆菌,要进一步做细菌培养和分离.结论:粪便细菌菌谱 分析能直接或间接为临床提供腹泻患者的肠道微生态资料,尤其能准确地提示因各种原因造成菌群失调而导致的腹泻,为临床诊断和制定治疗 提供快捷,科学的依据. 关麓词腹泻菌群失调粪便 1标本来源首先进行周围环境和采集标本器具消毒准备,以保证采集的粪便标本均不受污染,作到无菌操作所得 1248中华临床医学研究杂志2007年5月第13卷第9期May2007.Vol13,No.9 结果真实可靠. 2检验方法 2.1形态结构和培养特性观察 2.1.1涂片染色采集粪便标本进行直接涂片,革兰染色, 置油镜下镜检. 2.1.2细菌细胞在固体培养基表面形成的细胞群体叫菌落 (colony).,不同微生物在某种培养基中生长繁殖,所形成的 菌落特征有很大差异,而同一种的细菌在一定条件下,培养 特征却有一定稳定性.,以此可以对不同微生物加以区别鉴 定.(I)细菌的培养特征包括以下内容:在固体培养基上,观 察菌落大小,形态,颜色,光泽度,透明度,质地,隆起形状,边 缘特征及迁移性等.在液体培养中的表面生长情况(菌膜, 环)混浊度及沉淀等.半固体培养基穿刺接种观察运动,扩 散情况.(2)分离培养各取一环标本分别接种DHL,SS,HE 种培养基,36~C培养18—24h,记录细菌在各种培养基上的生 长情况,挑取可疑菌落(无色透明不发酵乳糖或迟缓发酵乳 糖菌落)进行菌种鉴定. 2.2生理生化试验微生物生化反应是指用化学反应来测 定微生物的代谢产物,生化反应常用来鉴别一些在形态和其 它方面不易区别的微生物.因此微生物生化反应是微生物 分类鉴定中的重要依据之一. 微生物检验中常用的生化反应有: 2.2.1糖酵解试验不同的细菌含有发酵糖的酶有很大差 异,因而发酵糖的能力各不相同.即使能发酵某些糖,但其 产物也不同,或产气或不产气.或产酸或不产酸.根据这些 特点来鉴别细菌. 2.2.2V—P试验某些细菌在葡萄糖蛋白胨水培养基中 能分解葡萄糖产生丙酮酸,再将丙酮酸缩合,脱羧成乙酰甲 基甲醇,乙酰甲基甲醇在强碱环境下,被空气中氧氧化为二 乙酰,二乙酰与蛋白胨中的胍基生成红色合物,称V—P(+) 反应. 2.2.3甲基红(MethylRed)试验肠杆菌科各菌属都能发 酵葡萄糖,在分解葡萄糖过程中产生丙酮酸,进一步分解中, 由于糖代谢的途径不同,可产生乳酸,琥珀酸,醋酸和甲酸等 大量酸性产物,可使培养基PH值下降至pH4.5以下,使甲 基红指示剂变红. 2.2.4靛基质(Imdole)试验某些细菌能分解蛋白胨中的 色氨酸,生成吲哚.吲哚的存在可用显色反应表现出来.吲 哚与对二甲基氨基苯醛结合,形成玫瑰吲哚,为红色化合物. 2.2.5双糖铁(TSI)琼脂试验试验方法:以接种针挑取待 试茵可疑茵落或纯培养物,穿刺接种并涂布于斜面,置36? 1oC培养18—24h,观察结果. 本试验可同时观察乳糖和蔗糖发酵产酸或产酸产气(变 黄);产生硫化氢(变黑).葡萄糖被分解产酸可使斜面先变 黄,但因量少,生成的少量酸,因接触空气而氧化,加之细菌 利用培养基中含氮物质,生成碱性产物,故使斜面后来又变 红,底部由于是在厌氧状态下,酸类不被氧化,所以仍保持黄 色.肠杆菌科细菌在双糖铁培养基上的反应见表1. 表1 2.3血清学试验血清学反应是指:相应的抗原与抗体在 体外一定条件下作用,可出现肉眼可见的沉淀,凝集现象. 在食品微生物检验中,常用血清学反应来鉴定分离到的细 菌,以最终确认检测结果. 习惯一常用的血清学反应有:直接凝集反应,间接凝集 反应凝集反应:颗粒性抗原(细菌,红细胞等)与相应抗体结 合,在电解质参与下所形成的肉眼可见的凝集现象,称为凝 集反应(Agglutinationreaction).其中的抗原称为凝集原,抗 体称为凝集素.在该反应中,因为单位体积抗体量大,做定 量实验时,应稀释抗体. 2.3.1直接凝集反应颗粒性抗原与相应抗体直接结合所 出现的反应,称为直接凝集反应(Directagglutionreaction). (1)玻片凝集法.是一种常规的定性试验方法.原理是用已 知抗体来检测未知抗原.常用于鉴定菌种,血型.此法快 速,简便,但不能进行定量测定.(2)试管凝集法.是一种定 量试验方法.多用已知抗原来检测血清中有无相应抗体及 其含量.常用于协助诊断某些传染病及进行流行病学调查. 如肥达氏反应就是诊断伤寒,付伤寒的试管凝集试验. 2.3.2间接凝集反应将可溶性抗原(抗体)先吸附在一种 与免疫无关的,颗粒状微球表面,然后与相应抗体(抗原)作 用,在有电解质存在的条件下,即可发生凝集,称为间接凝集 反应(Indirectagglutination).由于载体存在能出现肉眼可见 的反应,敏感性很高. 在人的肠道和粪便中存在着大量的微生物(如细菌,原 虫,病毒等),其中主要是细菌,正常人粪便中的茵群分为常 居茵和过路茵两大类,在这些菌中99%以上是厌氧菌(多数 为G杆菌),需氧菌不到1%.乳婴粪便中多为G茵(为嗜 酸性乳杆菌,双歧杆菌类及粪链球菌),而成人粪便中除占优 势的厌氧菌外多为埃希菌类,所有这些细菌组成人类肠道正 常茵群.肠道致病菌主要是G一茵无芽孢无荚膜有鞭毛,需 氧或兼性厌氧茵,营养要求不高.肠道正常菌群在一般情况 下,数量及各菌种间的比例都处于一种相对的动态平衡中. 对机体的营养,消化,吸收,防御疾病,保持人体与外界环境 的平衡起着重要的作用.一旦由于宿主免疫力降低或某种 原因破坏了正常茵群内各种微生物之间的相互制约的关系, 使菌群的量和种类的比例发生变化时,肠道微生态环境被破 坏,即出现暂时或持久的菌群失调,肠道功能发生紊乱,甚至 出现明显的临床症状一腹泻. 参考文献 1.董善民.微生物学及检验技术 2.高等医学院教材,医学微生物学