成年健康体检人群Brugada心电图征发生率的初步调查及SCN5A基因突变的检测.pdf.doc

成年健康体检人群Brugada心电图征发生率的初步调查及SCN5A基因突变的检测.pdf.doc 第一军医大学 硕士学位论文 成年健康体检人群Brugada心电图征发生率的初步调查及 SCN5A基因突变的检测 姓名:阮发晖 申请学位级别:硕士 专业:心血管内科 指导教师:孟素荣 20060501 ,觨 ,， ,,因 与青壮年猝 死高 度相 关而 日 性 ， 并 对 发 现基 因 突变 的 家 系进行遗 传学 调 查。 超 过,,稣 ,, 哉 昭 ,揪 ,捶? 滞,,募 罨,湟臁, 硗 庖 桓 鯞 ,,,综 合 硕 士 学 位 论文 硕 士 学 位 论文 , , , , , , , , , , , , , , , , , , — ( , , , , , , , , , , , , , , , , , , ( , , , , , , , , , , , , , , , , , , , , , , , , , , , , , , , , , , , , , , , , , , , , , , , , , , , , , , , , , , , , , , , , , , , , , , , , , , , , , , , , , , , , , 甋 , , , , , , , , , , , , , , , , , , , , , , 瓽 , , , , , , , , , , , , , , , , , , , , , , , , , ( , 甌 , , , , , , , , , , , , , , , , , , , 【 , , , ( , , , , ( , , , ( , , , , , , , , , , , , , , , , , , , , , , , , , , 甌 , , , , , , , , , , , , , , , , , , , , , , , , , , , , , , , , , , , 疭 , , , , , , , , , , , , , , , , , , , , , ( , , , , ; , , , , , , , , , 状 态 下 ， 他 们的 心 电 图 表现 为 右心 前, — , 导 点 : 人群发 病 率 约为 , , , , , ， 青壮 年 男 性多 见。发 生 猝死的 平 均 年 龄 约 为 , 岁 ， 已报 , 岁 。地 区 种族 发 病 率 差异较 大 ， 亚 洲 国 图 , 湫 偷 腂 , , , 心 电 图 表现 , , 譨 , , , , , , , , , 心 电 图 征 : 右地 区 发 病 率 侧 胸 前 区 导 较 低 ‘, 。 联, ㄌ Ц呒 潭 鳶 , 蜗 滦 毙 , , 、 , , , , 甆, , ( , , : , , ( , , ， 而起搏 器、 外 科 治疗 及 消 融 的 治疗 效果均 未得到公 , 、 异丙 肾上 腺 烈 , ’, , , 錾 舷偎丶 ざ , , 、 表, 築 , , , 综 合 征 的 治疗 手段 , , , , , , , , : 有 效; ×: 无 效; , 翰蝗 范 , , , , , , 緊 , , , , , , , , — ?‘甜 ; , , 未, 誊 爹 材 匀 捌 匿 豸 图 , 築 , , , 心 电 图 征 的 三 种类 型 , , , ; , , , , , , , , 表, 築 , , , 心 电 图 征 的 三 种类 型 的 标 准 , , , , , , , , 嗣, 甌 , , , , , , , , , , , 图 征 的 发 生 率 以 及 跟 踪 随访上 。 发 生 心 脏事件 是 用 钠 通道 阻 滞 剂 后 诊 断为 , , , , 酆险 骰颊 叩 , ( , 叮, 、 男 , , , : , ? 仆ǖ辣 泶锛 跎倩蛏 ナ А, 、 电压 或 时间依 赖 的钠通道 激 活 、 失 , , 电 图 , ?癝 , 翁 Ц叩 脑 , 颍 , , 缙 诟 醇 ǖ牟痪 , 辉蚬 钩 , 相 折 返性室心 律失 的 进 展不仅加深 我 们对 本病 阿认 识 ， 也让 我 们看 到了 基因 诊 断及 基因 治疗 的 前 究 ， 致 病 机 制等 方面均 处于起步 阶 段 ， 还 需进 行 大 量的 工作以 了 解 我 国自 己 的 置， ,间 期一 般正 常此种的 特 征 性 改 变 。 现 今 这种心 电图 征 象被 称为,,, 心 电图 征 。 关于 ,,,心 电图 征 的 意义 ， 医 学 界现 存 在 较 大争议 。 有 资料 显 示 : 岁; 岁。 其 中 男 性 ,,,,,钚? ,,辏 ,畲 笪 ,,辏 ,骄 ,,,,,辏 ,,,,, ? 渊 争夺 鎏骧 硕 士 学 位 论文 图 ,,翰糠 植 坏 湫 虰 ,,,综 合 征 心 电图 , 典 型,,,心 电图 征 ,型,姆 ? ,试嘉 ,(,, ， 在 男 性 中 的 发 生 率 为 ,,鴄 ,资料 刚 对 比， 在 整 个 人 群 全部 ,,,资料 相 比， 在 整 个 人 群 如 何 ， 尚 需 进 一 步 随 访观察 。 硕 士 学 位 论文 第 二章 , 虰, , , 心 电 图 征 人 群 , , , , 试剂 , , 确 拢, 煳 齑迹 , , , , : , , , ， , , , ( , , 甈 , 试 剂 硕 士 学 位 论文 , , , 罷 , , , , , : 北 京 鼎 国 生 物 技 术 有 限公司 。 , , , : , , , 大 连 公 司 , 鍺 , , , , 一 缓 冲 液 , , ( , , 溴酚 蓝 ，, 甇 , , 妆 角 郌 , , , フ 崽侨芤 , , 虰, , , 心 电 图 征 人 群( 咒 批 列 基 因 突 变检测 , , , , ㄊ礁 咚 倮 胄幕 , 篢, , , 型， 珠 海 黑 马 医 学 仪器 有 限公司 , , 型， 法国 , , , , 公司 , , , , , , , 岫燃 疲 篊 , , , , , , 等。 , , , , , 甈 , ( , , 银 染法 , , , 序列 测 定了 解 有 无 基 因 变异， 并分析基 因 变异是否导 致氨 基 酸 改 , , , , 蛲 庀 宰 拥腜 , 扩 增 表 , , 篠 , , 基 因 外 显子 突 变检测 用 引物 , , , , , , , , , , , 玎 , , ，,,;,, , , 觕 , , 鎐 , , , 齬 , , , , , , , , 兀 ?, , , , , , , , , 郍, 聆, 广, , , 鲫 , , “硼, , 菴, , , , , , , , , , , , , , 疘, , , , , , , , , , 轆, , , , , , , , , , , , , 鍯 , , , 媾, ?, , , 孢骉 , , 鍯 , , , , , , , , , , , , , 盋 , , , , 博侉, 蠥, , , , , , , , , 加甜也,巧撕打船 , 从, , , 从, , ?, ?, , , , 蹵 , , , , , , , 盯 , , , , , , ?, , , , , 了 , , , , 兀?, , , , , , , , , × , , 混 合 液 , 产物 长 度及 环 境 温 度下 也不 同 : , , , , , 止 ，自 来 水 漂洗数 次 ，凉干 。 , , , , , 循环 测 序试 剂盒 及 , , , , 虰, , , 心 电 图 征 人 群 , , 罐 因 突 变检测 析， 分析是否有 碱 基 变化 及 有 无 相应 编 码 的氨 基 酸 改 变。 , , 限制性 内 切 酶 酶 切 分析 终 止 反 应 。 , , 测 序分析后 发 现 有 引起 氨 基 酸 改 变的碱 基 改 变的， 而 无 , , 异常 条 带的， 则 根 据 情 况选用 合 适 的限制性 内 切 酶 进 行 酶 切 分析。若正 常 人 均 无 此 异常 ， 则 认 为 是基 因 突 变， 进 一 步对整 个 家 系 进 行 遗有 相同 的异常 改 变， 则 认 为 是传学 分析， 了 解 遗传缺 陷在 基 因 多态 性 。 硕 士 学 位 论文 ， 可 诊断 为 , , , , 酆 险 鳌 , 见 表 , , 表 , , : 突 变检测 病 人 的基 本 资 料 , , 型, , , , 心 电 图 征 人 群, , 越 罔 突 变检剥 图 , , , 甈 , 扩增后 的部 分目的条 带 , , , , 谒母 鲅, 镜, , 磐庀 宰 右, 颬, ， , , 腜 , 扩 增 产 物 , , 电 泳 条 带 , , , , , , , , , , , , 图 , , : 第 , 号 外 显子 引物 , , , , 的, , ? 霾 , 顳 , 测 序图 。 , , , , , 硕 士 学 位 论文 , 第 六泳 道有 异常 条 带存 在 ，见 箭 头 标志 。, ?， , , , , , , , 一 条 染色 单体上， , , , , 虻, , , 幻 苈胱拥牡 谝晃 患 罨 , 哪襦 堰 , , 蹦 , 輑 憎, , 鞑 酘 蚺, , 蝜 , , , , 能 , , , , , , , , , , 轌, , , , , , , , , , , , , , , , , , , , 轈 , 托, , , , , 搿 , , ,,, 鋖 饼 , , , , , , , , , , , , , , , , , , , , , 硕 士 学 位 论文 : , , , , , , , , , , , , , , , , , , , , , , , , , , , , , , , , , , , , , , , , , 图 , , : 第 , 号 外 显子 引物 , , , , 的, , ? 霾 , 顳 , 测 序图 。 , , , , , , , ?鼴全部 , , , , 扩增产物 直接 测 序无 异常 。 , , , , , 河 ×酶 媚 谇忻付訮, 产物 进 行 酶 切 分析， 并 与 正 常 人 进 行 比 较 后 表 , , , , , , , ( , , , , , , , , , , 基 因 改 变使 原 来 的酶 切 位 点 消 失 , 图 , , 翰 ?鼳 家 系 分析图 , 四、 讨 论 , , , , 酆 险 骰 颊 弑还 鄄 斓接 屑易 宄稍 崩 嗨 撇 ?贰 , ”。, , 年 ，, , 等人 利用 , 多态 性 分析以 来 螂】 ，该方法大 量 地 用 于 检测 未 知 的基 因 突 变， 本 次 研 究基 因 突 硕 士 学 位 论文 变筛 查 的方法也采用 此 方法。, , 的主 , 要 原 理 是单链 核 苷 酸 在 聚 丙 烯 酰胺 凝 胶 中电 泳 迁 移率除了 受限于 凝 胶浓度， 电 压、 时 间 等物 理 因 素 影响外 ， 还 由 单链 形成的局 部 构 象决定。当 核 苷酸 片 段 不 大 时 ， 单个 碱 基 的变异往往足 以 改 变单 链 核 苷酸 的局 部 构 象， 表 现 出 突 变型与 野生 型电 泳 迁 移率的差 异删。, , 操 作 简便 ， 对设备 要 求不 高， 但 也存 在 一 些 不 足 。例 如 ，只能 作为 碱 基 变异检测 的 一 种 粗筛 方法， 最 后 确 定突 变的位 置 和 , 类 型， 还 需进 一 步测 序; 电 泳 条 件 要 求 较 严 格等。另 外 ， 由 于 , , 是依 据 突 变引起 单链 核 苷酸 分子 立 , , , , , 体构 象的改 变 来 实现 电 泳 分离 的， 而 温度、 离 子 强度 等均 会影响单链 核 苷酸 构 象， 这 样 就 可 , 虰, , , 心 电 图 征 人 群, , ( , ( 基 突 变检测 , , , , , , , ，, , , 因 敏 感 度较 好而 有 逐 步取 代 , , 异情 况作出 危险 分层 ，这 不 能 不 说 是一 种 遗憾 。现 在 基 因 变异的检测 只应 用 于 做为 临 床诊断 的支 持证据 、 早期估计 潜 在 危险 性 及 进 一 步了 解 基 因 型和 表 现 型 关 系 等方面 。导 致这 种 遗憾 的原 因 包 括 患 者 基 因 变异检出 率不 高、 基 因 变异发 现 及 认 识 不 全、 对调 控 区 调 控 作用 机 理 不 清楚及 没 有 一 种 简单有 效 的检测 技 术 等。但 是， 通 过 对基 因 突 变检测 、 变异基 因 表 达 及 功 能 学 的研 究， 并与 临 床相 硕 士 学 位 论文 参 考 文 献 ,,, ,,,,( ,: ,,,,,,,( ,,,, ,,,,( ,,,， ,: ,,, ,珺 ,,,, ,,,,,,,( ,,， ,: , ,珺 ,,, ,,， ,: ,,— ,,( ,,,,,,,: ,,,,( , ,,, , ,,, ,,, 们 ( , , ,,,,,,,,,,,: ,,?,,( 硕 士 学 位 论文 , ,,,,,,,,,— ,,, ,,?,, , ,,,,,,, ,,,, ,,,,,, , , ,,,,,,,， ,,， ,: ,,,,( 【 ,】 , ,,,, , ,,, ,,,， ,,， ,,,,,( ,,,, , 【 ,,,,, 】 ,,, , , ,【 ,浚 瓹 ,,,,,， ,,， ,,,, , ,,,,,【 ,緾 ,,,,,， ,,,, ,,,, , , ,,,,,,,,,: ,,,,( 硕 士 学 位 论文 , , , ,， ,,,, ,,,,綣 】 ( , ,( ,,,,,,,,,, ,,, ,,,,,,,， ,,， ,: ,,,,( , , , ,,,,【 ,浚 瓹 ,,,,,， , , , , 个 新 的,,,,蛲 槐 洹 綣 】 ( 中 华心 血 管 病 杂 志， ,,， ,: ,,,,( ,( ,,,,, , , , ,,,,,,,: ,,,,( , ,,,— , ,,,綣 】 ( , , ,( ,,,”,,,,,,,,盿 , , ,,,, ,,, ,,, , ,， , , , , ,珺 ,,, ,,,,: ,, 英文 缩 略 词 表 英文 缩 写 , , 低 离子 强 度 , , 感 谢王 琦 光、范 志 平、谢毅 、黄 炎、张 登君 、刘亚 洋、谢宜 军 、王 辉 清、