再从此管中 吸出 100 amp

再从此管中 吸出 100 amp 再从此管中吸出100&2010-04-2011:45结晶紫法活性测定1、取对数生长期的人胰腺癌SW1990细胞，用0.25%胰酶(以无钙镁离子PBS溶液配制，pH7.4)消化后，加入RPMI-1640培养基(10%新生牛血清，100U/ml青霉素，100U/ml链霉素，pH7.2)吹皮带秤打细胞，使形成细胞悬液。进行细胞计数，使细胞数为2~2.5x105个/ml。接种于96孔细胞培养板，100µl/孔。接种细胞时须不断摇动细胞悬液，以保证各孔细胞数的均匀一致,红外热像仪。96孔板放置于37?、5%CO2培养箱中培养22h，观察到孔中细胞长满70~80%。2、在上述RPMI-1640完全培养基中加入放线菌素D，使终浓度测力仪为1.5µg/ml，配成样品稀释液。取此稀释液900µl至Eppendorf管中，另在9个5ml管中加入700µl稀释液。3、用完全培养基将基因工程人肿瘤凋亡素样品(上海恰尔生物技术有限公司研制，批号:0304，冻干粉剂，蛋白浓度:2mg/支)复溶至1000µl(液体样品测定蛋白浓度后，直接测力计进行下一步操作)，取出100µl至已装有900µl稀释液的Eppendorf管中，充分混匀，尽量不起泡沫。再从此管中吸出100µl至下一管中，如此反复n次(即测定前10倍稀释若干次，直到与估计活性相接近时)。4、从最后稀释的Eppendorf管中吸出700µl样品至已装有700µl稀释液的5ml管中，充分混匀。再从此管中吸出700µl至下一管同样装有700µl稀释液的5ml管称重变送器中，如此反复9次(即测定时倍比稀释样品)。5、弃去96孔板中旧的培养基，从第一个5ml管中吸取已稀释的样品100µl至第2排细胞孔中，每个稀释度作6复孔(n=6);从第二个5ml管中吸取的样品加入第3排细胞中，依此类推，直至第10排孔结束。第1排中不含细胞，加入100µl/孔含有放线菌素D的稀释液作空白对水质仪照;第11排加100µl/孔稀释液作细胞对照;第12排加不含放线菌素D的RPMI-1640完全培养基。6、将加好样品的96孔板置37?、5%的CO2培养箱中继续培养22h，显微镜下观察细胞形态变化，初步判断结果。7、弃除培养板中的培养基，每孔加入100µl染浊度仪色液(1.5mmol/L结晶紫)染色30min。洗去染色液，甩去水分并在吸水纸上拍打以使干燥。冲洗程度以在吸水纸上拍打时，没有颜色出现为宜。8、充分干燥后，每孔加入100µl33%浓度的冰醋酸，在色差仪振荡仪上充分振荡使结晶溶解。设定λ=595nm酶联检测仪测定各孔的吸光值，据此数据进行统计学处理，计算出对细胞50%杀伤时所需的基因工程人肿瘤凋亡素的浓度。[活性计算]活性单位定义:在上述测定条件下，以50%SW1990肿瘤细胞被杀伤时，为基因工程人肿瘤凋亡素的1个活性单位。1、样品的稀释度取常用对数。2、根据对应的细胞毒活性(光密度值)与稀释度的对数，进行线性回归，得到计算公式y=ax+b，分析相关系数R值，符合统计学要求者进行下一步分析。3、代入50%杀伤时的光密度值(即第11排细胞光密度值的一半)，计算超声波清洗设备出稀释倍数的对数，再求出稀释倍数。4、根据原样品浓度及稀释倍数计算出基因工程人肿瘤凋亡素对细胞50%杀伤时的浓度，再算出比活性。5、其他细胞的检测方法同上，计算时根据对SW1990标定的基因工程人肿瘤凋亡素活性单位，先求出对细胞50%杀伤时的所需活性单位，再根据基因工程人肿瘤凋亡素对SW1990细胞杀伤的比活性算超声波清洗机出相应的绝对量。[计算结果]0304批原液:比活为:1.03×107活性单位/mg 蛋白的生物活性及结构测定方法生物活性测定[37,38]是将人胰腺癌1990细胞以2×105个/ml种入96孔细胞培养板，37?5%CO2培养箱培养4-6小时，用完全培养液(加有1.2µg/m的放线菌素D)做梯度稀释的样品加入纯水机细胞板(n=3)。置37?5%CO2培养箱，18h后弃上清，以结晶紫固定液(结晶紫0.5%，甲醛8%，NaCl0.1%，乙醇20%)染色15min，蒸馏水洗去结晶紫。每孔再加入200μ33%的乙酸，旋涡混匀，置酶联仪读出D(595)值，以未加细胞的空白孔为D本底。根据活性单位定义:使培养孔中的细胞50%死亡为一个单位。 MTT法--活性测定1、接种细胞:用0.25%胰蛋白酶消化单层培养细胞，用含10%胎牛蒸汽电磁阀血清的RPMI1640培养液配成单个细胞悬液，以每孔103-104个细胞接种于96孔板中，每孔体积200μl。2、培养细胞:将培养板移入CO2培养箱中，在37?、5%CO2及饱和湿度条件下，培养3-5天,发电机产生的强电场特别是漏磁产生的强磁场对上导瓦和推力瓦测温电阻干扰非常大。(培养时间取决于实验目的和要求)3、呈色:培养第3-5天后，每孔加入MTT溶液(5mg/mL)20μl，37?，继续孵育4h，终止培养，小心吸弃孔内培养液上清。每孔加入150μlDMSO(二甲基亚砜)，振荡10min，使结晶物充分溶解。4、比色:选择490nm波长，在酶标仪上测定个孔吸收值，气体减压阀结果。万濠VMS影像测量仪的光学成像系统实质上是图像的采集过程，即将被测工件的可视化图像转换成能被计算机处理的一系列数据。作为测量的开始和数据的源头，工件图像的好坏直接关系到后续图像处理和测量的质量高低。因此，对影像测量仪在图像照明、图像聚焦、图像输出三个环节进行了严格的质量把关，以确保采集到的图像清晰、轮廓分明，便于后期处理和测量。照明是影响获取图像质量的重要因素，因为它直接影响输入数蒸汽减压阀据的质量和至少30%的应用效果。由于测量对象的差异性，针对每个特定的应用实例，要选择相应的照明装置，以达到最佳效果。在测量工件的不同部位时，也需要选择不同的照明 方式。比如测量工件的面特热风循环烘箱征时，需要利用不同角度的表面光照明;测量工件的边缘轮廓尺寸，就需要利用轮廓光源照明。影像测量仪独有的六环八区照明光源摒弃了机器视觉中单光源单用途的特点，将环形表面光源划分为48个弧形单元，可以针对不同的被测工件实现灵活的照明。这样的设真空干燥机计方式可以避免更换测量对象后需要重新设计照明光源的成本。图像聚焦合理选择镜头、设计成像光路是测量系统的关键技术之一。被测工件在光源的照明下，通过光学透镜将成像光线聚焦到CCD相机的光敏面阵上。测量系统处理的所有图像信息均闪蒸干燥机通过镜头得到，镜头的质量直接影响到测量系统的整体性能。影像测量仪采用的专业镜头具有极高的对比度及分辨率，它不仅能够适应不同倍率的变焦，也可以提供自动或手动对焦，同时还支持模块化选型。镜头性能非常稳定，畸变极小。图像输出CCD相机是一个光电转换器件，它将光学成像系统所形预冷机成的光学图像转变成电子信号。对CCD相机除了考察其核心的光电转换器件外，还应考虑成像速度、检测的视野范围、点距精度等因素。影像测量仪配置的CCD相机，主要从分辨率、点距间隔和信宰杀流水线噪比等方面进行考察，使得图像清晰，出图快捷，噪声少，利于后续的图像处理。