高效液相色谱法测定清肺颗粒中黄芩苷含量

高效液相色谱法测定清肺颗粒中黄芩苷含量 高效液相色谱法测定清肺颗粒中黄芩苷含 量 第22卷第1期 2006年3月 长春中医学院学报 AcademicPenodle~lofCha~hunCollege0fTraditionalChineseMedicine ,1.22 1.2006 高效液相色谱法测定清肺颗粒中黄芩苷含量 魏忠宝,胡嵘,徐多多.毕丹.指导:张辉 (1.长春中医学院2003级硕士研究生,吉林长春130117;2.长春中医学院附属医院,吉林长春13(~21) 摘要:目的:建立测定清肺颗粒有效成分含量的方法.方法:采用HPLC对清肺颗粒中黄芩苷的含 量进行测定.结果:黄芩在0.1224一O.6120/ag之间具有良好的线性关系,平均回收率为98.3%,RSD= 1.54%(n=5).结论:该方法灵敏,重现性好,适用于清肺颗粒中黄芩苷的含量测定. 关键词:清肺颗粒;黄芩苷;高效液相色谱法 中图分类号:R284.2文献标识码:B文章编号:1007—4813(2006)01—0051—02 清肺颗粒系由羚羊角,贝母,桑白皮,玄参, 苦杏仁,栀子等24味中药提取物制成的颗粒剂.具 有清肺利咽,清氲止嗽之功.用于肺胃热盛,感受 时邪,身热头晕,四肢酸懒,咳嗽痰盛,咽喉肿痛, 鼻衄咳血,口干舌燥等症.为了控制该药质量,保 证临床用药效果,笔者以黄芩苷为指标,采用高效 液相色谱法测定其含量,结果较为满意. 1仪器与试剂 1.1仪器美国Agilientl100高效液相色谱仪,色 谱柱:EclipseXDB—C18柱,Aglient色谱数据工作 站,德国SartofiusBP211D(1/10万)电子天平. 1.2试剂黄芩苷由中国药品生物制品检定所提 供,甲醇为色谱纯,其他试剂均为纯. 2方法与结果 ,?5?7??'OT1'i'''5MII"Illit"扫 肿Ml_i A I_.-.. B 1-葛根素 图1A葛根素对照品B感冒宁颗粒HPIE图 3小结 3.1流动相考察参照《中华人民共和国药典》 2000年版(一部)葛根含量测定项下测定葛根素的 流动相及相关文献,通过实验摸索,流动相选用乙 腈:水:磷酸(12:88:0.1)葛根素具有较好的峰 型和相对合理的保留时间租分离度,故选用乙腈: 水:磷酸(12:88:0.1)为葛根素分析的流动相. 3.2样品检测波长取葛根索对照品,加甲醇制成 每hIll中含葛根素h珲溶液,作为对照品溶液,进行 紫外检测.结果选定测定波长=250rim.且溶 剂,阴性无干扰. 本实验建立的高效液相色谱法测定加样回收率 高,是一种快速,简便,较准确的方法. (收稿日期:2005—11—14) 作者简介:魏忠宝(1979一),男,在读硕士.研究方向:新药研究与开发.一 5l一 第22卷第1期 2006年3月 长春中医学院学报 AcMemiePeriodicalChar~hunCollegeofTraditiomlChine~Medicine Vo1.22 1,2006 2.1色谱条件色谱柱:EclipseXDB—C18(4.6mm ×150mm,5肿);流动相:0.5%磷酸甲醇.二甲基 甲酰胺(12:l1:1);流速:0.3ml/min;检测波长: 280nm;柱温:室温. 2.2对照品溶液的制备精密称取在6ocI=真空干 燥4h的黄芩苷对照品适量,置嚣瓶中,加甲醇制成 lml中含6o黄芩苷的溶液,摇匀,即得. 2.3供试品溶液的制备本品混匀,取6g,精密称 定,置锥形瓶中,加70%乙醇4Oral,置水浴中加热 回流3h,放冷,滤过,滤液置100ml景瓶中,用少 量70%乙醇洗涤容器和残渣数次,洗液滤人同一量 瓶中,加70%乙醇稀释至刻度,摇匀,微孔滤膜 A (0.45Inn)滤过,取续滤液,即得. 2.4阴性对照品溶液的制备取缺黄芩的样品 2.0g,照供试品溶液的制备项下同法操作,即得. 2.5线性关系考察精密吸取黄芩苷对照品溶液 (61.2w/mL)0.1224,0.2448,0.3672,0.4896, 0.6120/xg分别注入液相色谱仪,根据对照品的峰面 积积分值对黄芩苷的进样质量绘制曲线,得回 归方程:Y=3.7785×lo2x-3.14,r=0.9993.结果 明:黄芩苷在0.1224—0.6120/xg之间呈良好的线性 关系,由于标准曲线经过原点,故采用外标一点法. 色谱图,见图1. 2.6方法学考察 1.葛苓苷 图1A葛芩苷对照品B清肺颗粒ItPLC图 2.6.1精密度实验分别吸取5的对照品溶液, 重复进样5次,测得其峰面积的RSD为1.36%. 2.6.2稳定性试验精密吸取对照品溶液5gl,于 0,2,4,24,48h分别依法测定,结果峰面积的 RSD为1.03%,黄芩苷在48h内测定结果稳定.. 2.6.3重现性实验精密称取同一批样品5份,按 供试品溶液的制备和测试方法测定,结果峰面积的 RsD为1.08%. 2.6.4回收率实验精密称取已知含量(1.37ling/ g)的样品5份,分别加入一定量黄芩苷对照品,按 正文2.3项下操作,测定,并根据样品含量及黄芩 苷对照品加入量,计算回收率.结果平均回收率为 98.30%,HSD为1.54%(=5). 2.7样品测定依法测定040501,040502,040503, 一 52一 B 3批样品中黄芩苷含量(m#g)1.6362,1.353, 1.381.=1.358.结论:经过多次实验,现本品中 黄芩苷含量暂定为每克不得低于1.10mg. 3小结 3.1参照《中华人民共和国药典》2000年版(一 部)黄芩含量测定项下测定黄芩苷的流动相及相关 文献,通过实验摸索,选用0.5%磷酸.甲醇.二甲基 甲酰胺(12:11:1)为黄芩苷分析的流动相. 3.2取黄芩苷对照品,加甲醇制成每lml中含黄芩 苷61.2/xg溶液,作为对照品溶液,进行紫外检测. 结果选定测定波长=28Ohm.且溶剂,阴性无干 扰. 3.3本实验建立的高效液相色谱法测定加样回收率 高,是一种快速,简便,较准确的方法. (收稿日期:2OO5—11—14)